检测吡仑帕奈原料药中基因毒性杂质的方法技术

本申请提供一种检测吡仑帕奈原料药中基因毒性杂质的方法。所述方法通过高效液相色谱法检测吡仑帕奈原料药中的五种基因毒性杂质，所述方法包括以磷酸溶液作为流动相A，以乙腈为流动相B，并采用乙腈

【技术实现步骤摘要】
检测吡仑帕奈原料药中基因毒性杂质的方法


[0001]本申请涉及本专利技术属于化学药物分析检测领域，具体涉及检测吡仑帕奈原料药中五种基因毒性杂质的方法。

技术介绍

[0002]在整个说明书中对现有技术的任何讨论都不应被视为承认这些现有技术是广为人知的，或构成本领域公知常识的一部分。
[0003]吡仑帕奈(Perampanel，商品名Fycompa)是一种新型的抗癫痫药物，由日本卫材制药(EISAI)公司研发，于2012年在欧盟和美国上市，2019年在中国获批。它的作用机制是通过非竞争性地拮抗突触后神经元的α
‑
氨基
‑
3羟基
‑
5甲基
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4异噁唑受体(AMPAR)，抑制过度兴奋的谷氨酸介导的神经递质释放，从而降低癫痫发作的发生。它主要用于治疗12岁及以上儿童癫痫部分性发作患者(伴或不伴继发性全面性癫痫发作)的辅助治疗，也可用于治疗原发性全面性强直阵挛发作。目前临床上可用的剂型为片剂和口崩片剂。
[0004]吡仑帕奈的化学名为[2
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(6'
‑
氧代
‑
1'
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苯基
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1',6'
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二氢
‑
[2,3'
‑
联吡啶]‑
5'
‑
基)苄腈]四分之三水合物，其分子式为C
23
H
15
N3O
·
3/4H2O，分子量为362.90g/mol，CAS号为380917
‑
97
‑
5。它的工艺路线是以邻溴苯乙酸和苯胺为起始原料，经缩合，氰化，环合生成吡仑帕奈。基因毒性杂质主要来源于原料合成过程中的起始物料、中间体、试剂及反应副产物，也可在药物贮存中降解产生。
[0005]ICH M7(R1)是国际药品注册技术要求协调会(ICH)制定的一份指导原则，它针对药物中可能含有的DNA反应性杂质，即能够与DNA发生反应并引起突变的杂质，制定了评估和控制的标准和方法，旨在降低这些杂质对人体的致癌风险。该指导原则提供了一个致突变杂质的鉴别、分类、定性和控制的框架方案，涵盖了计算机模拟预测、实验室检测和风险评估等步骤。计算机模拟预测是利用已知的化学结构和生物活性之间的关系，对药物中可能存在的DNA反应性杂质进行预测；实验室检测是利用细菌或哺乳动物细胞等体外模型，对药物中已知或预测的DNA反应性杂质进行检测；风险评估是根据实验室检测的结果，对药物中DNA反应性杂质的致癌风险进行评估。
[0006]基因毒性杂质的限度控制通常采用毒理学关注阈值法(TTC法)，即根据毒理学数据确定一个安全的暴露水平，规定原料药及制剂中基因毒性杂质的TTC值不超过1.5μg/d。TTC值是指每天接触某种化合物不会引起任何可察觉风险的最大剂量。吡仑帕奈的最大日剂量为12mg，因此其基因毒性杂质的控制限度为0.0125％。
[0007]由于基因毒性杂质限度较低，检测方法一般需要用液相色谱
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质谱联用(LC
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MS)或气相色谱
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质谱联用(GC
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MS)，LC
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MS和GC
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MS是将液相色谱或气相色谱与质谱仪结合在一起，可以同时进行分离、鉴定和定量分析，但这些仪器成本高昂，不是每个药企QC部门都能够使用。常规液相色谱方法是利用不同化合物在移动相和固定相之间的相互作用，实现分离和定量分析，与LC
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MS或GC
‑
MS相比，具有仪器成本低、操作简便、灵敏度高等优点。因此，开发常规液相色谱方法检测遗传毒性杂质更具有现实意义。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种同时检测吡仑帕奈中五种基因毒性杂质的检测方法，使其专属性、检测限、定量限、线性及范围、重复性、准确度、耐用性等方面完全符合标准且具有较高的精密度，可用于吡仑帕奈的质量控制和安全性评估。
[0009]具体地，本专利技术提供了下述的技术方案。
[0010]在本专利技术第一方面，提供了一种检测吡仑帕奈原料药中基因毒性杂质的方法，所述方法通过高效液相色谱法检测吡仑帕奈原料药中的五种基因毒性杂质，所述方法包括以磷酸溶液作为流动相A，以乙腈为流动相B，并采用乙腈
‑
流动相A作为杂质对照品溶剂；
[0011]所述五种基因毒性杂质的结构及名称如下表所示：
[0012][0013][0014]在本专利技术的实施方式中，所述流动相A为0.08
‑
0.12％的磷酸溶液，优选为0.1％的的磷酸溶液。
[0015]在本专利技术的实施方式中，所述杂质对照品溶剂为体积比60：40的乙腈和流动相A的混合液。
[0016]在本专利技术的实施方式中，所述方法包括：
[0017]以乙腈溶解吡仑帕奈样品制备供试品溶液；
[0018]杂质L、杂质N、杂质O、杂质K、杂质D作为杂质对照品，以体积比为60:40的乙腈
‑
流动相A的混合溶液溶解并稀释各杂质对照品制备杂质对照品溶液贮备液，并以乙腈稀释制备对照品溶液；
[0019]分别将供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪进行检测并记录色谱图，采用外标法以峰面积计算供试品溶液中五种基因毒性杂质的含量。
[0020]在本专利技术的实施方式中，所述高效液相色谱仪的检测条件为：
[0021]色谱柱：十八烷基硅烷色谱柱，CAPCELL PAK ADME HR C18(150mm
×
4.6mm，3μm)
[0022]流动相A：0.08
‑
0.12％磷酸溶液，优选为0.1％磷酸溶液；
[0023]流动相B：乙腈
[0024]流速：0.75
‑
0.85mL/min，优选为0.8mL/min；
[0025]柱温：23
‑
27℃，优选为25℃；
[0026]检测波长：208
‑
212nm，优选为210nm；
[0027]进样量：10μL。
[0028]在本专利技术的实施方式中，采用梯度洗脱方式，梯度洗脱程序为：
[0029]流动相A和流动相B的初始比例为80:20；
[0030]第0～35min，降低流动相A的比例，同时提高流动相B的比例至两者比例为42:58；
[0031]第35～45min，保持流动相A和流动相B的比例为42:58；
[0032]第45～50min，提高流动相A的比例，同时降低流动相B的比例至回到初始比例80:20；
[0033]第50～60min，保持流动相A和流动相B的比例为80:20。
[0034]在本专利技术的实施方式中，杂质K的线性范围为0.2086μg/mL～2.0862μg/mL，杂质L的线性范围为0.3086μg/mL～2.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测吡仑帕奈原料药中基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述方法包括通过高效液相色谱法检测吡仑帕奈原料药中的五种基因毒性杂质，所述五种基因毒性杂质的结构分别如下所示：杂质D：杂质K：杂质L：杂质N：杂质O：其中，所述方法中以磷酸溶液作为流动相A，以乙腈为流动相B，以乙腈
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流动相A作为杂质对照品的溶剂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为0.08
‑
0.12％的磷酸溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为0.1％的磷酸溶液。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述杂质对照品的溶剂，其乙腈和流动相A的体积比为60:40。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，包括：取吡仑帕奈样品，精密称定，加乙腈溶解并稀释，制备供试品溶液；杂质L、杂质N、杂质O、杂质K、杂质D作为杂质对照品，精密称定，置于同一量瓶中，以乙腈
‑
流动相A的混合溶液溶解并稀释至刻度制备杂质对照品溶液贮备液；精密量取对照品溶液储备液至量瓶中并以乙腈稀释至刻度制备对照品溶液；精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪进行检测并记录色谱图，采用外标法以峰面积计算供试品溶液中五种基因毒性杂质的含量。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的检测条件为：色谱柱：C18色谱柱流动相A：0.08
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【专利技术属性】
技术研发人员：毕红娜，杨杰，解春文，于晓燕，王鹏，胡醒，
申请(专利权)人：北京达因高科儿童药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：