一种肿瘤新生抗原特异性TCR及其应用制造技术

本发明专利技术涉及肿瘤免疫技术领域，具体涉及一种肿瘤新生抗原特异性TCR及其应用。本发明专利技术提供的肿瘤新生抗原TCR能够特异性识别并结合ENTPD6新生抗原(FYAFSCYYDL)，具有较高的亲和力，该TCR可用于基因编辑改造T细胞，用于TCR

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤新生抗原特异性TCR及其应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤免疫
，尤其涉及一种肿瘤新生抗原特异性TCR及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤新生抗原是肿瘤细胞中因基因突变或病毒整合等事件编码产生的正常组织中不存在的多肽。针对肿瘤新生抗原的TCR
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T疗法，被认为是能够攻克实体肿瘤最有效的治疗手段之一。TCR(T cell receptor)是T细胞表面的特征性标志，经基因改造TCR的T细胞可以对肿瘤细胞表面的抗原分子进行特异性识别，进而针对肿瘤细胞产生免疫反应。与直接使用新生抗原来刺激患者本人的特异性T细胞扩增的治疗方法相比，TCR
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T疗法的效果明显更优。但是，TCR
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T疗法具有高度特异性，针对不同肿瘤新生抗原的TCR不同，因此需要获得肿瘤新生抗原特异性TCR，进而用于TCR
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T疗法。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一种肿瘤新生抗原特异性TCR及其应用。
[0004]本专利技术针对ENTPD6新生抗原开发特异性TCR，ENTPD6新生抗原的序列为FYAFSCYYDL，是一种肝癌优势新生抗原，该新生抗原已在申请人在先专利CN113956342B中公开。为开发能够特异性识别并杀伤携带ENTPD6新生抗原靶细胞的TCR
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T细胞，获得ENTPD6新生抗原特异性TCR是最关键的环节。本专利技术利用四聚体染色技术，将ENTPD6新生抗原特异性T细胞进行标记，使用流式细胞术对新生抗原特异性T细胞进行分选，进一步使用Sanger测序技术对这些T细胞的TCR序列进行测序。针对捕获的TCR序列进行筛选和验证，利用这些TCR序列构建了能够特异性识别ENTPD6新生抗原的TCR
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T细胞，同时构建了能够共表达HLA
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A*24:02与ENTPD6新生抗原或其配对的野生抗原的COS
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7靶细胞，通过ELISPOT技术检测TCR
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T细胞对表达ENTPD6新生抗原的靶细胞的识别杀伤作用，最终获得能够高效、特异性识别并结合ENTPD6新生抗原的TCR以及表达该TCR的TCR
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T细胞。
[0005]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供肿瘤新生抗原TCR，所述肿瘤新生抗原TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；
[0007]所述TCRα链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述TCRβ链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0008]优选地，所述TCRα链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1
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3所示，所述TCRβ链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4
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6所示。
[0009]具有上述α和β链可变区CDR序列的TCR能够特异性识别并结合ENTPD6新生抗原(序列为FYAFSCYYDL)，具有较高的亲和力，且难以识别和结合其对应的野生抗原结合。
[0010]上述CDR序列具体如下：
[0011]SEQ ID NO.1：α链可变区的CDR1：SVFSS；
[0012]SEQ ID NO.2：α链可变区的CDR2：VVTGGEV；
[0013]SEQ ID NO.3：α链可变区的CDR3：AGVANAGGTSYGKLT；
[0014]SEQ ID NO.4：β链可变区的CDR1：SGHKS；
[0015]SEQ ID NO.5：β链可变区的CDR2：YYEKEE；
[0016]SEQ ID NO.6：β链可变区的CDR3：ASSLEVDMNTEAF。
[0017]优选地，所述TCRα链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或与如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有至少80％的相似性，所述TCRβ链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或与如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有至少80％的相似性。
[0018]在具有以上所述的α和β链可变区CDR序列的情况下，与如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％的序列相似性的α链可变区序列，以及与如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％的序列相似性的β链可变区序列对应的TCR也在本专利技术的保护范围内。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述TCRα链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述TCRβ链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0020]具有上述α和β链可变区序列的TCR能够特异性识别并结合ENTPD6新生抗原(序列为FYAFSCYYDL)，具有较高的亲和力，且难以识别和结合其对应的野生抗原结合。
[0021]上述可变区序列具体如下：
[0022]SEQ ID NO.7：α链可变区：
[0023][0024]SEQ ID NO.8：β链可变区：
[0025][0026]本专利技术提供一种抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含以上所述的肿瘤新生抗原TCR。
[0027]上述抗原结合蛋白可为多价TCR复合物，其包含至少两个TCR分子，其中至少一个TCR为本专利技术提供的上述肿瘤新生抗原TCR。
[0028]本专利技术提供编码以上所述的肿瘤新生抗原TCR的核酸分子。
[0029]优选地，编码所述TCRα链可变区的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。编码所述TCRβ链可变区的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
[0030]本专利技术提供一种生物材料，所述生物材料为含有以上所述核酸分子的载体，或者，所述生物材料为含有以上所述核酸分子或所述载体的宿主细胞。
[0031]以上所述的载体可为表达载体或克隆载体。
[0032]优选地，所述载体为表达载体，所述表达载体包含将所述核酸分子可操作地与表达调控序列连接的多核苷酸。所述载体能够将所述核酸分子递送至宿主细胞。
[0033]以上所述的载体包括但不限于质粒载体、病毒载体等。
[0034]优选地，所述载体为病毒载体。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述载体为慢病毒载体或逆转录病毒载体。
[0036]以上所述的宿主细胞包括微生物细胞或动物细胞。其中微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、酵母等，动本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肿瘤新生抗原TCR，其特征在于，所述肿瘤新生抗原TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；所述TCRα链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述TCRβ链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。2.根据权利要求1所述的肿瘤新生抗原TCR，其特征在于，所述TCRα链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1
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3所示，所述TCRβ链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4
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6所示。3.根据权利要求1或2所述的肿瘤新生抗原TCR，其特征在于，所述TCRα链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或与如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有至少80％的相似性，所述TCRβ链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或与如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有至少80％的相似性。4.抗原结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合蛋白包含权利要求1～3任一项所述的肿瘤新生抗原TCR。5.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码根据权利要求1～3任一项所述的肿瘤新生抗原TCR；优选地，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冬波，陈红松，陈谱，谢兴旺，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：