阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用，具体涉及抗癌药物阿帕替尼抑制汉滩病毒(HTNV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)复制的应用，阿帕替尼可在细胞水平明显抑制HTNV的复制，降低病毒滴度。通过实验证明：HTNV感染的A549细胞经阿帕替尼处理后，细胞内病毒结构蛋白表达水平明显降低，细胞内HTNV的核酸水平明显降低，细胞培养上清中的病毒滴度明显降低，同时该药物对细胞毒性较小。此外阿帕替尼还可抑制CHIKV复制。本发明专利技术提供了一种新型抗HTNV候选药物，并为快速研发抗病毒药物提供思路。并为快速研发抗病毒药物提供思路。并为快速研发抗病毒药物提供思路。

【技术实现步骤摘要】
阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用


[0001]本专利技术涉及抗病毒药物领域，具体涉及原抗癌药阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用。

技术介绍

[0002]汉滩病毒(hantaanvirus，HTNV)是引起重症肾综合征出血热(HFRS)的主要病原体，隶属于布尼亚病毒目(Bunyaviridae)、汉坦病毒科正汉坦病毒属(Hantavirus)。该病毒是在韩国学者李镐汪在1976年于该国疫区汉滩河流域黑线姬鼠的肺组织中首次成功分离得到。汉滩病毒引起的肾综合征出血热发病急，症状严重，死亡率高，且缺乏特异有效的治疗药物。
[0003]基孔肯雅病毒(CHIKV)是引起基孔肯尼亚热的一种急性传染病病原体。基孔肯雅病毒是在1987年于云南西双版纳发现的基孔肯雅热病人的血液中分离出该病毒。基孔肯雅病毒主要是通过感染病毒的伊蚊叮咬而传播。
[0004]目前的抗病毒药物研究多针对病毒自身结构蛋白，虽可以取得非常特异的治疗效果，但开发时间长，开发成本高，技术难度大，易造成耐药。目前临床治疗中使用利巴韦林作为抗病毒药物，但临床数据表示其单独使用抑制病毒效果并不够理想。
[0005]病毒作为专性寄生型微生物，其生物合成完全依靠宿主细胞。宿主细胞多种蛋白激酶参与病毒的复制，或参与细胞抗病毒反应，以这些蛋白激酶为药物靶点，可能会有较好的抗病毒效果，并且针对这类靶点的药物可能具有抗多种病毒的能力。
[0006]目前有多种已经进入临床使用的抗癌药物以蛋白激酶为靶点，可抑制肿瘤细胞的生长、抑制血管生成，从这些抗癌药物中可筛选获得用于抗病毒治疗的药物，由于这些药物已经经过临床试验，副作用明确，可以快速用于新发再发病毒性传染病的治疗。

技术实现思路

[0007]为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用，具体涉及抗癌药物阿帕替尼抑制汉滩病毒和CHIKV复制的应用。
[0008]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下。
[0009]阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用。该病毒主要包括汉滩病毒和基孔肯雅病毒。
[0010]进一步，所述阿帕替尼的结构式如式(I)所示：
[0011][0012]进一步，所述阿帕替尼在制备抗汉滩病毒药物中的应用。
[0013]更进一步，所述阿帕替尼在制备抑制汉滩病毒复制药物中的应用。
[0014]进一步，所述阿帕替尼在制备抗基孔肯雅病毒药物中的应用。
[0015]更进一步，所述阿帕替尼在制备抑制基孔肯雅病毒复制药物中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]本专利技术证实了抗癌药物阿帕替尼可有效抑制汉滩病毒(HTNV)的复制，降低了病毒滴度，且对细胞毒性作用低，同时还兼具抗基孔肯雅病毒(CHIKV)的效果。本专利技术可提供新的抗汉滩病毒药物候选，也可为研制抗病毒药物提供新的思路。
附图说明
[0018]图1是不同浓度下阿帕替尼抑制HTNV核衣壳蛋白生成的Western
‑
blot检测结果。
[0019]图2是阿帕替尼降低HTNV感染细胞上清滴度检测结果。
[0020]图3是阿帕替尼抑制HTNV基因组RNA水平RT
‑
PCR检测结果。
[0021]图4是阿帕替尼抑制A549细胞生长检测结果。
[0022]图5是阿帕替尼抑制基孔肯雅病毒复制效率检测结果。
具体实施方式
[0023]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0024]基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]下述各实施例中所述实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
[0026]本专利技术涉及了阿帕替尼(Apatinib)在制备抗病毒药物中的应用，阿帕替尼的结构式如下式(I)所示：
[0027][0028]本专利技术根据抗癌药物的作用机制，寻找可能具有抗病毒作用的新用途，并通过病毒学方法验证药物的抗病毒效果。将已经成熟的抗癌药物用于抗病毒治疗，提供快速应对新发再发病毒性传染病药物治疗的方案。
[0029]本专利技术涉及了阿帕替尼在制备抗汉滩病毒药物中的应用，具体涉及了阿帕替尼(Apatinib)在制备抑制汉滩病毒复制药物以及抑制汉滩病毒增殖药物中的应用。该药物在体外实验中显示了其能够有效抑制汉滩病毒的复制和增殖。
[0030]本专利技术还涉及了阿帕替尼在制备抗基孔肯雅病毒(CHIKV)药物中的应用。具体涉及了阿帕替尼(Apatinib)在制备抑制基孔肯雅病毒复制药物中的应用。该药物在体外实验中显示了其能够有效抑制孔肯雅病毒的复制。
[0031]下面对阿帕替尼(Apatinib)作为抗汉滩病毒药物效果和抗基孔肯雅病毒(CHIKV)药物效果的具体实验过程和相关数据进行分析说明。
[0032]实施例1
[0033]抗癌药物库中筛选具有抗HTNV(汉滩病毒)效果的候选药物并验证其抗病毒效果。
[0034](一)筛选
[0035]将A549细胞消化后传代至96孔细胞培养板，待细胞密度达到60％时，按MOI＝1(病毒感染复数＝1)感染HTNV，37℃孵育2h，更换为含有工作浓度为10μM的各药物的培养基，置于37℃条件下CO2细胞培养箱中培养48h。将细胞以4％多聚甲醛固定后，免疫荧光检测HTNV核衣壳蛋白，以此判断HTNV复制情况。经初步筛选获得药物候选阿帕替尼，阿帕替尼对HTNV抑制效果可达83.2％。
[0036](二)验证
[0037]将A549细胞消化后传代至6孔细胞培养板，待细胞密度达到60％时按MOI＝1感染HTNV，感染后2h将阿帕替尼按不同浓度加入细胞培养上清，混合均匀后置于37℃条件下CO2细胞培养箱中培养48h。RIPA裂解液裂解细胞，提取总蛋白，BCA法定量后Western
‑
blot检测HTNV核衣壳蛋白(NP)的量，每组蛋白上样量10μg，见图1。
[0038]图1是不同浓度下阿帕替尼抑制HTNV核衣壳蛋白的Western
‑
blot检测结果。如图1所示，阿帕替尼在0.1μM浓度以上可以明显降低细胞内HTNV核衣壳蛋白量。
[0039]实施例2
[0040]阿帕替尼细胞水平抑制HTNV复制能力的鉴定。
[0041](一)滴度测定
[0042]将A549细胞消化后传代至6板细胞培养板，待细胞密度达到60％时按MOI＝1感染HTNV，感染后2h更换为含有10μM阿帕替尼的培养基，置于37℃条件下CO2细胞培养箱中培养
48h。另将VeroE6细胞消化后传代至一新96孔板，待贴壁后取6孔板中的培养上清，并加入新铺12孔板中，每个实验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用。2.根据权利要求1所述的阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述阿帕替尼的结构式如式(I)所示：3.根据权利要求1所述的阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述阿帕替尼在制备抗汉滩病毒药物中的应用。4.根据权利要求3所述的阿帕替尼在制备抗病毒药物中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：应旗康，王芳，吴兴安，张晓晓，古天乐，屈思瑞，张俊梅，冯文杰，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：