一种TK缺失的牛结节性皮肤病病毒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及病毒疫苗及疫苗制备领域，具体公开了一种通过药物5

【技术实现步骤摘要】
一种TK缺失的牛结节性皮肤病病毒及其应用


[0001]本专利技术涉及病毒疫苗及疫苗制备领域，具体涉及牛结节性皮肤病病毒疫苗。

技术介绍

[0002]牛结节性皮肤病(Lumpy Skin Disease，LSD)是一种由牛结节性皮肤病病毒(Lumpy Skin Disease Virus，LSDV)引起牛的一种的高度传染性疫病。临床表现症状为，发热到40～41.5℃，并持续1～3d，体重减轻，产奶量减少，严重的会停止产奶；还会出现流涎、流泪，伴有流脓性或粘脓性鼻涕；全身淋巴结体积增大，形成单个或多个圆形皮肤结节，多出现在头部、颈部、背部、乳房、会阴、生殖器、四肢、尾巴等毛发稀疏区域。皮肤结节溃烂会招引蝇蛆而引起细菌感染，伤口数月无法愈合，最后留下可深入到肌肉组织的永久性痘疤，严重降低皮革制品的质量。虽然LSD发病率差异很大(5％～90％)，死亡率较低(10％以下)，但在个别疫情区域中可达到85％，偶发性或者巨大差异的死亡率可能与牛品种、毒株毒力、动物健康状态以及传播媒介类型等密切相关。LSD给疫情国家的养牛业造成重大经济损失，该病被世界动物卫生组织列为必须报告的疫病之一。
[0003]牛结节性皮肤病病毒属于痘病毒科(Poxviridae)，脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirinae)，羊痘病毒属(Capripoxvirus)。该病毒属于双链DNA病毒，基因组全长约150kbp，编码约156个假定基因，LSDV粒子呈砖型，长294
±
20nm，宽262nm
±
22nm。投射电子显微镜下，羊痘病毒基因组呈现三折叠螺旋状或管状，且基因组组成了双凹核心的结构，该核心和两个侧体被衣壳包围。与其它痘病毒基因组一样，两末端是发卡结构，这样的发卡结构与复制密切相关，紧邻发卡结构的两末端是反向重复序列(ITR)。TK已经在DNA病毒中被证明是复制非必须的毒力基因，当其被缺失后病毒毒力会降低(TenserRB,1991；Mart
í
n Hern
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ndezAM etal，1995)，但是抗原性不受影响(刘正飞等，2002)。LSDV TK(thymidine kinase)基因全长534bp，编码178个基酸，对LSDV毒力同样有着重要影响(Wallace DB,Viljoen GJ，2022)。
[0004]自2019年LSD传入我国以来，该病已经迅速在我国各省市传播开来，给养殖业带来巨大经济损失。目前没有特效药物可以治疗牛结节性皮肤病。一般用弱毒活疫苗(LAV)用于预防LSD；第一类为基于LSDV毒株的弱毒同源疫苗，包括Neethling株疫苗和KGSP株疫苗；第二类为非LSDV毒株弱毒异源疫苗，如山羊痘疫苗和和绵羊痘疫苗。南非地区主要以弱毒同源疫苗(Neethling/vaccine/LW1959)来控制该病，且已有多种衍生疫苗，如Lumpyvax、Herbivac LS和OBP等疫苗。尽管弱毒同源疫苗通过连续传代致弱，但在使用Neethling疫苗时，牛会产生副作用。常见的副作用表现为接种部位的局部反应、短暂的发烧和产奶量下降，有些动物可能会表现出温和的全身性反应。因此，尽快研发一款或者几款安全、有效的LSD治疗药物或疫苗对养牛产业意义重大。

技术实现思路

[0005]第一方面，本专利技术提供一种基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK，保藏
日期：2023.3.10，保藏编号：CCTCC NO:V202314，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心。
[0006]进一步的，所述基因缺失是TK基因(thymidine kinase)的缺失。
[0007]进一步的，所述牛结节性皮肤病病毒毒株LSDV优选Neethling疫苗毒株。
[0008]进一步的，所述基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的ΔTK的序列如下：
[0009]SEQ ID NO:1
[0010]atgctatgAatatatacatttaattataggacctatgttttctggcaaaagtactgaattgataagaatagttaaaaggt
[0011]accaaatagcgcagtataaatgctgtgtagtaaaatacttaaaagatatccgatatggtaattctgtgtatacgcatgat
[0012]aataaccatgtatctgccatatcaacaactttattatatgacgtcgttgataaaattatgaattacattataggtataga
[0013]tgaaggccaattctttaaagatattgtatctttttctgaaaataCggcaaatatgggaaagataattataatagctgcac
[0014]tagatagcacgtttcaacgaaaagaatttaatgatatattgaaattaataccgttatctgaaaaagtaacaaaattaaac
[0015]gctgtatgtatggaatgttataaagacgccgcattttctaagaggatcactaaagaaaaggaaatagaactcatcggggg
[0016]taaggaaaaatataaatctgtttgtaggaaatgttatttttGagaataa。
[0017]第二方面，本专利技术提供一种获得基因缺失牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的方法；所述方法包括如下步骤：
[0018]S01构建ΔTK的LSDV细胞系；
[0019]S02在上述ΔTK的LSDV细胞培养过程中，通过药物筛选LSDVΔTK突变株。
[0020]进一步的，所述细胞优选Vero TK
‑
细胞，将Vero TK
‑
细胞接种在含有BrdU的DMEM培养液中，待长满后，以5个MOI感染Vero TK
‑
细胞，继续在含有BrdU的DMEM培养液继续培养。
[0021]进一步的，所述药物为5
‑
溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液，所述溶液浓度为10
‑
50mg/L。
[0022]第三方面，本专利技术提供一种含有基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的药物组合物，所述药物组合物可以是疫苗、免疫制剂和/或免疫佐剂的组合。
[0023]进一步，所述基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK可以是病毒核酸或蛋白质。
[0024]第四方面，本专利技术提供一种基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK在制备牛结节性皮肤病免疫药物中的应用。
[0025]进一步的，所述免疫药物可以是疫苗、免疫制剂和/或免疫佐剂。
[0026]进一步的，所述疫苗优选活疫苗或灭活疫苗。
[0027]进一步的，所述免疫制剂和/或免疫佐剂是含有表达基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的核酸或蛋白质。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK，Capripoxvirus Lumpy skin disease virus LSDVΔTK(N)，保藏日期：2023.3.10，保藏编号：CCTCC NO:V202314，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，所述基因缺失是TK基因(thymidine kinase)的缺失；所述基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的ΔTK的序列如SEQ ID NO:1。2.一种获得基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的方法；所述方法包括如下步骤：S01构建ΔTK的LSDV细胞系；S02在上述ΔTK的LSDV细胞培养过程中，通过药物筛选TK缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK。3.如权利要求2所述基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的方法，其特征在于，所述药物为5
‑
溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液。4.如权利要求2所述基因缺失的牛结节性皮肤病病毒毒株LSDVΔTK的方法，其特征在于，所述药物为5
...

【专利技术属性】
技术研发人员：步志高，张敏敏，葛金英，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：