一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及肿瘤生物治疗领域，具体公开了一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒及其构建方法和应用。该重组溶瘤病毒能够选择性感染肿瘤细胞，复制，表达可溶性“别吃我”阻断元件，阻断肿瘤细胞膜表面的“别吃我”信号受体，并显著增强抗肿瘤免疫；本发明专利技术包含的重组溶瘤腺病毒构建体的药物组合物在制备癌症治疗药物中的应用。本发明专利技术通过整合免疫活化、招募和提高巨噬细胞吞噬肿瘤活性等多方面的抗肿瘤机制，达到极其显著的抗肿瘤作用，并减少阻断剂的脱靶效应，从而减少毒副作用的产生；具有极高的临床抗肿瘤药物的开发价值。临床抗肿瘤药物的开发价值。临床抗肿瘤药物的开发价值。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤生物治疗领域，具体涉及一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，我国每年都有数百万的人死于癌症。多数病人在确诊时已处于中晚期从而失去外科手术治疗的机会，而传统放疗化疗，并没有给肿瘤带来突破性的进展，急需突破性的治疗手段。
[0003]肿瘤免疫疗法的兴起给肿瘤治疗带来一线曙光。然而肿瘤细胞能够借助“别吃我(don
’
t eat me)”信号来逃逸免疫细胞的攻击，包括程序性细胞死亡配体1(PD
‑
L1)
[1]，beta
‑
2微球蛋白亚基主要组织相容性I类复合物(B2M)
[2]，CD47
[3]和CD24
[4]。通过阻断“别吃我”信号与表达在免疫细胞表面的受体相互作用，在多种癌症中展示出良好的抗肿瘤效果
[5]。
[0004]CD47是质膜分子，是一种整合素相关蛋白(IAP)，是血小板反应蛋白家族成员的受体，在肿瘤细胞中广泛表达
[6]。跨膜信号蛋白SIRPα是CD47的配体，是一种调节性膜糖蛋白，在髓样细胞(如巨噬细胞)以及其他免疫细胞(如树突细胞)中高表达
[7]。
[0005]研究证明，阻断CD47在癌细胞上的信号可以促进对巨噬细胞，NK细胞，肿瘤特异性细胞毒性CD8+的T细胞和树突细胞的活化
[8]。给小鼠注射SIRPα可以阻断CD47对巨噬细胞的抑制作用，与注射CD47抗体具有相同的抑制肿瘤作用
[9]。近十年来，CD47已经成为肿瘤免疫疗法的一个潜在靶点。
[0006]CD24也被称为热稳定抗原或小细胞肺癌4簇抗原，是一种高度糖基化糖基
‑
锚定的表面蛋白。CD24与固有免疫细胞上的抑制性受体——唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素10(Siglec
‑
10)相互作用，传递免疫抑制性信号
[10]。有研究发现，肿瘤表达的CD24能与肿瘤相关巨噬细胞表达的Siglec
‑
10相互作用而逃逸免疫攻击。CD24在许多肿瘤高表达，而Siglec
‑
10被发现在肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)高表达。敲除CD24或Siglec
‑
10，以及使用单克隆抗体阻断CD24
‑
Siglec
‑
10相互作用，均可以增强对表达CD24的肿瘤细胞的吞噬，从而抑制肿瘤生长并延长生存
[4]。
[0007]然而，由于受肿瘤微环境异质性的影响，免疫检查点抑制剂仅在淋巴细胞浸润水平较高的“热”肿瘤、突变负荷(TMB)高的肿瘤中有效
[11]，而对一些肿瘤应答率不足
[12]。另外，系统性给予免疫检查点抑制剂会导致免疫相关性不良反应(Immune
‑
Related Adverse Events,irAEs)，严重者可致死。因此，如何提高临床益处和减少免疫相关性不良事件是亟待解决的问题。
[0008]溶瘤病毒是一种新型药物，在癌症免疫治疗中的应用得到了广泛认可。溶瘤病毒通过多种机制选择性地在肿瘤细胞中选择性复制、裂解肿瘤细胞和激活抗肿瘤免疫等
[13,14]，近年来，溶瘤病毒在临床应用中也取得了快速进展
[15,16]。由于临床试验对晚期黑色素瘤患者显示出有益结果，表达粒细胞
‑
巨噬细胞集落刺激因子的溶瘤病毒T
‑
VEC在2015
Immunotherapy.Front Immunol 10,168,doi:10.3389/fimmu.2019.00168,2019.
[0023][13]Bartlett DL,Liu Z,Sathaiah M,Ravindranathan R,Guo Z,He Y and Guo ZS.Oncolytic viruses as therapeutic cancer vaccines.Mol Cancer 12,103,2013.
[0024][14]Woller N,Gurlevik E,Ureche CI,Schumacher A and Kuhnel F.Oncolytic viruses as anticancer vaccines.Front Oncol 4,188,2014
[0025][15]Pol J,Bloy N,Obrist F,Eggermont A,Galon J,Cremer I,Erbs P,Limacher JM,Preville X,Zitvogel L et al.Trial watch:oncolytic viruses for cancer therapy.Oncoimmunology 3,e28694,2014.
[0026][16]Vacchelli E,Eggermont A,Sautes
‑
Fridman C,Galon J,Zitvogel L,Kroemer G and Galluzzi L.Trial watch:oncolytic viruses for cancer therapy.Oncoimmunology 2,e24612,2013.

技术实现思路

[0027]针对现有技术的不足，本专利技术的第一个目的是提供一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒；该重组溶瘤病毒既能激活机体免疫，又能同时阻断固有免疫检查点SIRPα/CD47和Siglec10/CD24调控轴，通过整合免疫活化、招募和提高巨噬细胞吞噬肿瘤活性等多方面的抗肿瘤机制，达到极其显著的抗肿瘤作用，并减少阻断剂的脱靶效应，从而减少毒副作用的产生；
[0028]本专利技术的第二个目的是提供上述靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒的构建方法；
[0029]本专利技术的第三个目的是提供上述靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒的应用。
[0030]为实现上述专利技术目的，本专利技术采用了下列
技术实现思路
：
[0031]第一方面，本专利技术保护一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒，该重组溶瘤病毒既能激活机体免疫，又能同时阻断固有免疫检查点SIRPα/CD47和Siglec10/CD24调控轴。
[0032]优选的，所述重组溶瘤病毒为重组溶瘤腺病毒，所述腺病毒载体选自C血清型亚群，为Ad2、Ad5、Ad55等，优选Ad2或Ad5。
[0033]本专利技术保护一种靶向“别吃我”信号的重组人5型溶瘤病毒(Ad5)，其包含修饰的Ad5基因组；该修饰包含：(i)缺失野生型Ad5基因组的E1和/或E3区序列；(ii)编码阻断肿瘤“别吃我”信号的外源性核酸序列，其中所述的外源性核酸序列被稳定地加入到至少是所述经修饰的Ad5基因组的被缺失区域。
[0034]更具体的，一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒(Ad5)，其基因组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒，其特征在于，该重组溶瘤病毒既能激活机体免疫，又能同时阻断固有免疫检查点SIRPα/CD47 和Siglec10/CD24调控轴；优选的，所述重组溶瘤病毒为重组溶瘤腺病毒，所述腺病毒载体选自C血清型亚群，为Ad2或Ad5。2.一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒包含修饰的Ad5基因组；该修饰包含：（i）缺失野生型Ad5基因组的E1和/或E3区序列；（ii）编码阻断肿瘤“别吃我”信号的外源性核酸序列，其中所述的外源性核酸序列被稳定地加入到至少是所述经修饰的Ad5基因组的被缺失区域。3.根据权利要求1或2所述的一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒包含修饰的Ad5基因组，其基因组E1和E3区域缺失，但包括早期复制所需的E1A序列，缺失区域被稳定地插入靶向阻断“别吃我”信号功能元件的外源核苷酸序列，所述的阻断“别吃我”信号功能元件选自靶向结合肿瘤细胞表面的CD24和/或CD47受体的元件；所述的靶向结合肿瘤细胞表面的CD24和/或CD47受体的元件选自包含Siglec
‑
10和/或SIRPα配体的胞外区组件的组合；所述的胞外区组件的组合以Siglec
‑
10单独，SIRPα单独，SIRPα
‑
linker
‑
Siglec10融合，或Siglec10
‑
linker
‑
SIRPα融合方式可操作地连接至信号肽序列3
’
端后；优选的，所述的胞外区组件是以可操作地连接方式连接至外源调控序列，包括启动子序列、增强子序列、标签序列和PA序列，形成功能元件；更优选的，所述启动子序列选自组成型、组织特异型或诱导型启动子；所述组成型启动子优选自CMV、SV40或EF1α。4.根据权利要求3所述的一种靶向“别吃我”信号的重组溶瘤病毒，其特征在于，所述Siglec
‑
10和/或SIRPα胞外区组件为人源化的，并可操作地通过Linker连接融合表达或单独表达；SIRPα胞外区组件的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或与SEQ ID NO：1所述的序列具有80%以上同源性的核苷酸序列；Siglec
‑
10胞外区组件的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，或与SEQ ID NO：2所述的序列具有80%以上同源性的核苷酸序列；SIRPα
‑
Linker
‑
Siglec
‑
10融合胞外区组件的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，或与SEQ ID NO：3所述的序列具有80%以上同源性的核苷酸序列；所述的Linker组件选自4GS或encodes linker peptide，所述encodes linker peptide的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，或与SEQ ID NO：4所述的序列具有80%以上同源性的核苷酸序列。...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏继武，董杰，张业男，
申请(专利权)人：南京惟亚德生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：