一种HIV-1融合抑制剂体外筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种ＨＩＶ－１融合抑制剂体外筛选方法，属生物技术领域。该方法是用可吸附组氨酸标签的磁珠对带有组氨酸标签的ＨＩＶ－１　ｇｐ４１五螺旋蛋白粗提物于微孔板上进行包被，微孔板设阴性对照３孔，每孔分别加入２μｌ二甲亚砜，设阳性对照３孔，包被时不加五螺旋蛋白粗提物，其他孔中每孔分别加入２μｌ不同浓度的待测化合物样品，之后所有孔均分别加入９８μｌ报告基团标记Ｃ－螺旋溶液，在１５－４０℃下孵育１０分钟，甩去孔内液体，洗板后用荧光分析仪检测报告基团信号，计算待测样品的抑制率。本发明专利技术方法步骤简单、快速便捷且成本低廉。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说是涉及一种HIV-l融合抑制剂体外 筛选方法。
技术介绍
目前HIV-1融合抑制剂体外筛选方法主要有以下两大类1、 基于gp41N-螺旋与C-螺旋相互作用的筛选方法位于HIV-1包膜表面的跨膜蛋白gp41是三聚体蛋白，gp41的三段C-螺 旋以反向平行的方式堆积在N-螺旋三聚体表面的疏水凹槽，形成稳定的六螺 旋束结构，将病毒包膜与宿主细胞膜拉近，导致膜融合的发生。抑制§ 411^-螺旋与C-螺旋相互作用的化合物会抑制六螺旋束结构的形成，从而抑制膜融 合的发生。基于gp41 N-螺旋和C-螺旋相互作用的筛选方法主要存在靶位不单 一、标记物影响N-螺旋/C-螺旋构象、检测时间长等缺点。2、 基于gp41五螺旋蛋白与C-螺旋相互作用的筛选方法Root等人(Root MJ, Kay MS， Kim PS. Protein design of an HIV國l國l entry inhibitor. Science, 2001， 291 (5505): 884-888.)报道了根据蛋白质工程原理设计 的由3个N-螺旋与2个C-螺旋交错相连而成的五螺旋蛋白。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＨＩＶ－１融合抑制剂体外筛选方法，其特征在于包括以下步骤：　（１）ＨＩＶ－１ｇｐ４１五螺旋蛋白的包被　将可吸附组氨酸标签的磁珠与带有组氨酸标签的ＨＩＶ－１ｇｐ４１五螺旋蛋白粗提物于微孔板上在２０－４０℃下孵育１０－２０分钟， 于磁板上沉淀后甩去孔中液体，洗板后待用；　（２）待测化合物样品的制备　室温下将待测化合物样品用二甲亚砜配制成不同浓度的溶液，充分振荡溶解后备用；　（３）待测化合物样品的筛选　微孔板设阴性对照３孔，每孔分别加入２μｌ二 甲亚砜，设阳性对照３孔，包被时不加五螺旋蛋白粗提物，其他孔中每孔分别加入２μｌ不同浓...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王存新，刘斌，何红秋，张小轶，谭建军，陈慰祖，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]