泛素结合酶UBE2L6在防治猪蓝耳病及鉴定抗蓝耳病猪中的应用制造技术

本发明专利技术公开了泛素结合酶UBE2L6在防治猪蓝耳病及鉴定抗蓝耳病猪中的应用。本发明专利技术首次发现，在猪感染PRRSV病毒后会促进泛素结合酶E2L6的表达，且随着感染时间增加，UBE2L6的表达量会显著升高。同时，UBE2L6基因敲低促进PRRSV复制，UBE2L6过表达显著抑制病毒复制；当猪体内UBE2L6表达量较高时，猪对PRRSV具有抗性，反之具有易感性。因此，促进UBE2L6表达可以提高猪对蓝耳病毒抗性，UBE2L6可以作为判定PRRSV易感性或抗性的标准。本发明专利技术通过发掘PRRSV宿主新的抗病/易感基因，为鉴定猪对PRRSV易感性和抗性猪的奠定了坚实的基础，有利于培育优良品系猪，对猪蓝耳病的防控具有重要的意义。要的意义。要的意义。

【技术实现步骤摘要】
泛素结合酶UBE2L6在防治猪蓝耳病及鉴定抗蓝耳病猪中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及泛素结合酶UBE2L6在防治猪蓝耳病及鉴定抗蓝耳病猪中的应用。

技术介绍

[0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称猪蓝耳病，是养猪业中最重要的传染病之一，其致病机理和病原
‑
宿主互作机制仍不清楚。其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)，主要侵染猪肺泡巨噬细胞，破坏免疫系统，引起免疫抑制，类似艾滋病毒HIV。该病毒具有以下特点：极易变异重组、免疫抑制性、病毒血症时间长、抗体依赖性增强(ADE)。目前，从病原(PRRSV)角度研发的疫苗存在以下问题：诱导产生的中和抗体水平低或不产生，对不同毒株交叉保护力差，疫苗毒带毒时间长，与田间毒株重组产生致病力更强的重组毒。因此，目前研制的疫苗不能控制该病的发生与流行，也无有效的抗病毒药物。
[0003]基于目前针对PRRSV研发的疫苗存在的问题，亟需从新的角度和思路进行探讨研究。由于遗传背景与生物抗病性有着紧密的联系，因此，从宿主遗传角度开展研究，在遗传水平提高宿主对PRRS的抗病力，采用基因手段筛选蓝耳病抗性猪的工作，找出PRRSV宿主抗性或易感相关的基因，对于猪蓝耳病的防控具有不可比拟的优势，不仅可以研究猪蓝耳病的感染机制，还为猪蓝耳病的治疗和预防提供新办法。例如中国专利CN106191320A公开了HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用，专利CN109207577A公开了MARCO在筛选抗蓝耳病猪中的应用，通过发掘PRRSV宿主抗病/易感基因，进而培育和筛选抗病(PRRS)猪新品种(系)，探索更多相关基因对于分子层面抗猪蓝耳病具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术在防治猪蓝耳病的缺陷和不足，提供泛素结合酶UBE2L6在防治猪蓝耳病及鉴定抗蓝耳病猪中的应用。
[0005]本专利技术的目的是提供泛素结合酶UBE2L6的新应用。
[0006]本专利技术另一目的是提供一种提高猪对蓝耳病毒抗性的制剂。
[0007]本专利技术又一目的是提供一种鉴定猪对蓝耳病毒的抗性或易感性的方法。
[0008]本专利技术再一目的是提供一种培育猪蓝耳病抗性品种的方法。
[0009]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0010]本专利技术首次发现，在猪感染PRRSV病毒后会促进泛素结合酶E2L6(ubiquitin conjugating enzyme E2 L6，UBE2L6)的表达，且随着感染时间增加，UBE2L6的表达量会显著升高。本专利技术研究的UBE2L6 mRNA序列号：NM_001246215.1，UBE2L6蛋白序列号：NP_001233144.1。研究显示敲低UBE2L6会促进PRRSV复制，通过过表达UBE2L6能够抑制PRRSV复
制，且UBE2L6抑制PRRSV复制具有剂量表依赖性，明UBE2L6的表达与PRRSV复制密切相关。同时，显示猪体内UBE2L6的表达量，能够用于鉴定猪对蓝耳病的抗性和易感性，因此，UBE2L6作为生物标志物可以鉴定猪对蓝耳病毒的抗性和易感性，可以培育猪蓝耳病抗性品种，对PRRSV抗性猪的筛选和培育具有很好的临床应用价值。
[0011]因此，本专利技术提供泛素结合酶UBE2L6的以下应用：
[0012]作为生物标志物在鉴定猪对蓝耳病毒的抗性或易感性中的应用。
[0013]在培育猪蓝耳病抗性猪品种中的应用。
[0014]UBE2L6基因或蛋白的表达促进剂或表达激活剂在制备提高猪对蓝耳病毒抗性的制剂中的应用。
[0015]此处所述“表达促进剂或表达激活剂”包括但不限于酶激活剂、化合物促进剂、质粒等。
[0016]本专利技术提供促进泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白表达的试剂在防治猪蓝耳病、在制备抗猪蓝耳病治疗药物或制备猪蓝耳病毒抗病毒药物中的应用。
[0017]进一步地，UBE2L6表达量越高的猪对蓝耳病毒的抗性越强、越不易感；反之易感性越强。
[0018]本专利技术提供检测泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白的试剂在诊断猪蓝耳病或在制备检测诊断猪蓝耳病的产品、在筛选抗蓝耳病猪或制备鉴定猪对蓝耳病毒易感性的产品中的应用。
[0019]另外，作为一种可优选的实施方案，本专利技术提供了一种检测猪UBE2L6表达的引物，序列如SEQ ID NO.1～2所示。具体为，上游引物
‑
F(SEQ ID NO.1)：5
′‑
GCGAAGGAGCTGGAGGATC
‑3′
；下游引物UBE2L6
‑
R(SEQ ID NO.2)：5
′‑
TTCGGCCTTCCTGTTGAACA
‑3′
。
[0020]在实际应用中，诊断标准为：UBE2L6表达量异常升高则表示感染蓝耳病毒或患猪蓝耳病。这里所述的“异常升高”是以本领域技术中猪体内UBE2L6表达量的普遍水平为依据。
[0021]本专利技术提还供一种提高猪对蓝耳病毒抗性的制剂，含泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白的表达促进剂或表达激活剂。
[0022]本专利技术还提供一种鉴定猪对蓝耳病毒的抗性和易感性的方法，通过检测猪体内UBE2L6表达水平来鉴定猪对蓝耳病毒是抗性或易感性。
[0023]进一步地，鉴定的标准是：UBE2L6表达量高的猪对蓝耳病毒具有抗性；反之具有易感性。
[0024]具体操作时，UBE2L6表达量的高低以本领域技术中猪体内UBE2L6表达量的普遍水平为依据。这里所述的高低是相对的，根据UBE2L6表达量异常较高或较低，从而判定猪是否可能对PRRSV具有抗性，对PRRSV的易感性程度。
[0025]更具体地，基于本专利技术实验的结果，鉴定的具体数据标准大致为：当UBE2L6表达量高于8.3
±
0.5
×
10
‑2(相对于内参HPRT1)时，猪对病毒有抗性；表达量低于8.3
±
0.5
×
10
‑2(相对于内参HPRT1)时，易感。
[0026]特别地，本专利技术对于UBE2L6表达量的检测方法不作严格限制，可以是本领域内现有的基因表达量检测方法。
[0027]另外，本专利技术还提供一种培育猪蓝耳病抗性品种的方法，过表达猪的UBE2L6基因。
[0028]本专利技术具有以下有益效果：
[0029]本专利技术首次发现，在猪感染PRRSV病毒后会促进泛素结合酶UBE2L6的表达，且随着感染时间增加，UBE2L6的表达量会显著升高。而通过敲低UBE2L6基因，并接毒PRRSV24 h后，PRRSV
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N蛋白表达量显著升高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.泛素结合酶UBE2L6作为生物标志物在鉴定猪对蓝耳病毒的抗性或易感性中的应用。2.泛素结合酶UBE2L6在培育猪蓝耳病抗性猪品种中的应用。3.促进泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白表达的试剂在防治猪蓝耳病中的应用。4.促进泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白表达的试剂在制备抗猪蓝耳病治疗药物或制备猪蓝耳病毒抗病毒药物中的应用。5.检测泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白的试剂在诊断猪蓝耳病或在制备检测诊断猪蓝耳病的产品中应用。6.检测泛素结合酶UBE2L6基因或蛋白的试剂在筛选抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭春和，陈兵华，严杰聪，汤森龙，陈玲，
申请(专利权)人：全南现代牧业有限公司，
类型：发明
国别省市：