一种通过A2B5阳性胶质瘤细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种通过A2B5阳性脑胶质瘤细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗。具体地，本发明专利技术还提供了靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞、细胞毒性T淋巴细胞、细胞制剂及其制备方法与应用。本发明专利技术的树突状细胞疫苗可用于针对肿瘤的预防和主动免疫治疗，安全性好，且具有高纯度、高效杀伤能力和强特异性，可增强患者的免疫能力，改善预后，一定程度上防止肿瘤复发。一定程度上防止肿瘤复发。

【技术实现步骤摘要】
一种通过A2B5阳性胶质瘤细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗


[0001]本专利技术涉及生物技术及医药领域，具体地，本专利技术涉及一种通过A2B5阳性脑胶质瘤细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]树突状细胞(Dendritic cells,DC)是人体内功能最强的专职抗原提呈细胞，它能激活CD8+细胞毒性T细胞(CTL)和CD4+辅助性T细胞(Th)，在抗肿瘤、抗病毒等免疫应答过程中发挥重要作用。大多数研究表明体内肿瘤抑制了DC的成熟而非直接抑制DC的功能。研究发现，恶性肿瘤组织内树突状细胞的数量、功能与肿瘤组织原发灶、转移灶中瘤细胞向周围组织浸润的程度以及患者的临床分期呈负相关，而大部分实体肿瘤内浸润树突状细胞的数量越多则患者的预后越好(J Surg Oncol,2007,95(2):123
‑
128)。肿瘤患者体内的树突状细胞存在分化成熟障碍，导致其在表达细胞因子、表面抗原、激活T细胞增殖并诱导CTL生成等方面均存在不同程度的功能缺陷，包括CD8+T细胞增加、CD4+T细胞降低、CD4+/CD8+比例降低以及自然杀伤细胞数量下降等。所以体外诱导功能性DC用于免疫治疗有着重要的临床应用价值。
[0003]DC广泛分布与人体多个部位，如血液以及肝脾、淋巴结、肺、肾、胃肠道等组织间质，约占外周血单个核细胞总数0.5
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1％。DC亚群分类复杂，骨髓源DC(mDC)和淋巴源DC(pDC)是外周血DC的两种主要类型。DC可以经由单核细胞分化生成，分离PBMC中的单核细胞体外培养，GM
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CSF和IL
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4诱导生成未成熟DC(Curr Protoc Immunol 2005；Chapter 22:Unit22F 4)。未成熟DC可以通过不同的成熟诱导成分分化成熟，DC的成熟状态是决定DC疫苗有效性的一个关键因素。未成熟DC致敏T细胞能力有限，并且还可能诱导T细胞耐受。另外成熟DC的迁移能力更强，能更有效的迁移至次级淋巴组织的T细胞区，进而诱发免疫反应。
[0004]脑胶质瘤是一种最常见的颅内肿瘤，发病率约占全部颅内肿瘤的40％
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50％，其中脑胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)是最常见并且恶性程度最高的胶质瘤，5年存活率仅仅为5.1％，现在GBM最有效的治疗方案是手术、放疗和化疗为主的综合治疗，化疗药物替莫唑胺与放疗联合应用也仅比单纯放疗的中位生存期提高了3个月，并且经过积极治疗后中位生存期仍小于15个月。
[0005]A2B5阳性脑胶质瘤细胞具备有肿瘤细胞的特性，所以若能有效杀伤A2B5阳性脑胶质瘤细胞，可以有效地治疗脑胶质母细胞瘤，以及防止其复发。
[0006]因此专利技术一种可以高效杀伤A2B5阳性脑胶质瘤细胞的治疗方案，在临床上具有重大意义，是脑胶质瘤母细胞癌患者的福音。

技术实现思路

[0007]本专利技术的一个目的就是提供一种有效的A2B5阳性肿瘤的预防性和/或治疗性疫苗。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供一种靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞、细胞毒性T淋
巴细胞、细胞制剂以及它们的制备方法与应用。
[0009]在本专利技术的第一方面，提供了一种靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞的制备方法，包括步骤：
[0010](a)制备A2B5阳性肿瘤细胞抗原；和
[0011](b)将步骤(a)中获得的A2B5阳性肿瘤细胞抗原与未成熟树突状细胞共孵育，诱导树突状细胞成熟，从而获得所述的靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞。
[0012]在另一优选例中，所述A2B5阳性肿瘤是指高表达A2B5抗原的肿瘤或肿瘤细胞，其中所述高表达是指肿瘤或肿瘤细胞中的A2B5表达量Z1与正常组织或细胞中的A2B5表达量E0之比(即E1/E0)≥1.5，较佳地≥2.0，更佳地≥3.0。
[0013]在另一优选例中，所述A2B5阳性肿瘤包括A2B5阳性胶质瘤。
[0014]在另一优选例中，所述A2B5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。
[0015]在另一优选例中，所述A2B5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。
[0016]在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。
[0017]在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。
[0018]在另一优选例中，所述A2B5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。
[0019]在另一优选例中，所述A2B5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。
[0020]在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。
[0021]在另一优选例中，所述A2B5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。
[0022]在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤IDH野生型、胶质母细胞瘤IDH突变型及胶质母细胞瘤NOS(非特指)型。
[0023]在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤IDH野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。
[0024]在另一优选例中，所述未成熟树突状细胞分离自外周血样本中的外周血单个核细胞PBMC。
[0025]在另一优选例中，所述外周血样本采集自患者本身。
[0026]在另一优选例中，步骤(b)中所述共孵育使用的培养基为x
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vivo15、KBM581或RPMI
‑
1640。
[0027]在另一优选例中，所述培养基中包含选自下组的成分：IL
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4、GM
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CSF、自体血浆、分化成熟促进剂，或其组合。
[0028]在另一优选例中，所述自体血浆是指所述外周血样本的血浆。
[0029]在另一优选例中，所述培养基中所述自体血浆的浓度为0.5
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10％，较佳地为0.8
‑
8％，更佳地为1
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5％，最佳地为2％。
[0030]在另一优选例中，所述培养基中IL
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4的浓度为50
‑
200ng/mL，较佳地为60
‑
150ng/mL，更佳地为80
‑
120ng/mL，最佳地为100ng/mL。
[0031]在另一优选例中，所述培养基中GM
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CSF的浓度为50
‑
200ng/mL，较佳地为60
‑
150ng/mL，更佳地为80
‑
120ng/mL，最佳地为100ng/mL。
[0032]在另一优选例中，所述分化成熟促进剂选自下组：IFN
‑
γ、LPS，或其组合。
[0033]在另一优选例中，所述的IFN
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γ的浓度为10
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100ng/mL，较佳地为30
‑
80ng/mL，更
佳地为40
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(a)制备A2B5阳性肿瘤细胞抗原；和(b)将步骤(a)中获得的A2B5阳性肿瘤细胞抗原与未成熟树突状细胞共孵育，诱导树突状细胞成熟，从而获得所述的靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞。2.一种制备A2B5阳性肿瘤细胞抗原的方法，所述A2B5阳性肿瘤细胞抗原被用于如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(a)消化及裂解胶质瘤组织，从而获得单细胞悬液；(b)收集步骤(a)中获得的单细胞悬液，用磁珠分选从而获得A2B5阳性胶质瘤细胞；和(c)将步骤(b)获得的A2B5阳性胶质瘤细胞用γ射线进行辐照，再用研磨仪破碎细胞，从而获得A2B5阳性肿瘤细胞抗原。3.一种靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞，其特征在于，所述树突状细胞由如权利要求1所述的制备方法获得。4.一种靶向A2B5阳性肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞，其特征在于，所述细胞毒性T淋巴细胞由如权利要求3所述的树突状细胞进行致敏反应而获得。5.一种制备如权利要求4所述的细胞毒性T淋巴细胞的方法，其特征在于，包括步骤：(a)采用磁珠负选法从PBMC中分离CD3+T淋巴细胞；和(b)以1:(1～10)的比例将如权利要求3所述的树突状细胞与步骤(a)获得的CD3+T淋巴细胞共培养，从而致敏CD3+T淋巴细胞，获得如权利要求4所述的细胞毒性T淋巴细胞；任选地，所述方法还可包括步骤：(c)进行多轮致敏，即多次重复步骤(b)以获得敏感性更...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晨蔚，周慧斌，邓婷婷，周冰逸，胡雪，
申请(专利权)人：上海尚泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：