白血病来源的经修饰细胞用于增强过继性细胞治疗的效力的离体用途制造技术

本公开内容提供了利用白血病来源的经修饰细胞以增强过继性细胞治疗效力的离体方法。饰细胞以增强过继性细胞治疗效力的离体方法。饰细胞以增强过继性细胞治疗效力的离体方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白血病来源的经修饰细胞用于增强过继性细胞治疗的效力的离体用途
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2020年3月27日提交的美国临时专利申请序列No.63/001,189和2020年11月5日提交的美国临时专利申请序列No.63/110,003的优先权，其全部公开内容在此通过引用并入本文。

技术介绍

[0003]嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)和T细胞受体(T cell receptor，TCR)改造的T细胞的使用最近已成为许多临床前研究和临床研究的主题。这些经遗传修饰的T细胞将基础免疫学原理与当前免疫治疗的最新进展组合，并为利用机体自身的免疫系统来攻击疾病例如癌症提供了有前景的方法。过继性细胞治疗通常涉及收集患者自身的免疫细胞，对免疫细胞进行离体扩增和遗传修饰，以编码肿瘤抗原特异性受体。在一些情况下，免疫细胞可以从同种异体来源获得。经遗传修饰免疫细胞被输注回患者体内，从而有效清除肿瘤。目前基于输注离体扩增的免疫细胞的免疫治疗在癌症治疗中(特别是在恶性血液病中)已显示出显著的成功。例如，在患有用CD19特异性CAR T细胞治疗的晚期B细胞白血病和淋巴瘤的患者中的临床试验在成人和儿童中引发了持久的缓解。
[0004]输注回患者中的经遗传修饰免疫细胞(特别是自体细胞)主要是终末分化的，并且通常无法维持针对肿瘤的长期记忆响应。此外，尽管临床效果令人印象深刻，但因为持久的临床响应受到在治疗之后的经改造的细胞的体内扩增、存活和长期存在的影响，过继性细胞治疗面临挑战。一个挑战出现在T细胞趋于衰竭，这种现象由次优效应功能的发生、抑制性受体表达的提高以及与功能性的效应或记忆T细胞不同的表达谱的发生所限定。T细胞衰竭导致效应功能(例如针对致病细胞的细胞毒性以及细胞因子表达)降低。
[0005]本领域需要具有提高的功能和治疗有效性的经遗传修饰免疫细胞，以及制备其的方法。本公开内容解决并满足了此需求。

技术实现思路

[0006]本公开内容至少部分基于这样的发现：某些白血病来源的细胞可以提高过继性细胞治疗中采用的某些经修饰免疫细胞(例如自体患者来源的CAR
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T细胞)的扩增、效力和/或功能性(当将这些细胞离体组合在一起时)。在某些实施方案中，在白血病来源的细胞存在下扩增和共培养的免疫细胞在随后通过过继性细胞转移施用于患者后表现出提高的扩增和持久性。在另一些实施方案中，暴露于白血病来源的经修饰细胞的免疫细胞表现出提高的CD4辅助，例如，基于CD4表型和CD4/CD8比率。在另一些方面中且不受任何特定理论的束缚，认为暴露于“背景”抗肿瘤免疫使得能够延长T细胞的活化和输注后经修饰免疫细胞的存活。在某些实施方案中，由于将经修饰免疫细胞与白血病来源的细胞(其表达这样的肿瘤抗原，所述肿瘤抗原与经修饰免疫细胞被设计成在患者中所靶向的相同)离体共培养，因此经修饰免疫细胞可表现出延长的输注后存活。因此，本公开内容的方法解决了CAR
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T和其他
过继性T细胞治疗的主要瓶颈之一，即T细胞，特别是患者来源的自体T细胞的有限扩增能力。
[0007]在某些方面中，提供了用于活化、刺激和和/或扩增免疫细胞群的方法，其包括：获得包含免疫细胞的细胞群；使所述细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合刺激所述免疫细胞的增殖的条件下，将所述细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而活化和扩增所述免疫细胞群。
[0008]在另一些方面中，提供了用于生成记忆T细胞群的方法，其包括：获得包含免疫细胞的细胞群；使所述细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合刺激所述免疫细胞的增殖的条件下，将所述细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而生成所述记忆T细胞群。
[0009]在某些示例性的实施方案中，所述细胞群包含含有经改造的免疫受体的免疫细胞。在某些示例性的实施方案中，所述经改造的免疫受体是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。
[0010]在另一些方面中，提供了用于生成具有增强的活化状态的自体T细胞群的方法，其包括：获得来自患有癌症的患者的自体T细胞群；对所述自体T细胞群进行修饰以表达结合所述患者中的肿瘤抗原的经改造的免疫受体，所述经改造的免疫受体选自嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)；使经修饰的自体T细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合刺激所述经修饰的自体T细胞的增殖的条件下，将所述经修饰的自体T细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而生成所述具有增强的活化状态的自体T细胞群。
[0011]在某些示例性的实施方案中，所述方法用于治疗患有癌症的患者，所述方法还包括向所述患有癌症的患者施用所述具有增强的活化状态的自体细胞群。
[0012]在另一些方面中，用于扩增包含抗肿瘤抗原特异性的自体T细胞群的方法，其包括：从患有癌症的患者中获得自体T细胞群；对所述自体T细胞群进行修饰以表达在所述患者中结合肿瘤细胞上的肿瘤抗原的经改造的免疫受体，所述经改造的免疫受体选自嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)；使经修饰的自体T细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合扩增和刺激所述经修饰的自体T细胞群的条件下，将所述经修饰的自体T细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而生成包含抗肿瘤抗原特异性的经修饰的自体T细胞群，其中所述包含抗肿瘤抗原特异性的经修饰的自体T细胞群能够与所述患者的肿瘤细胞反应。
[0013]在某些示例性的实施方案中，所述经修饰的自体细胞群能够与所述患者的不表达与所述经改造的免疫受体结合的肿瘤抗原的肿瘤细胞反应。
[0014]在某些示例性的实施方案中，所述经修饰细胞包含选自以下的至少一种肿瘤抗原：WT
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1、RHAMM、PRAME、MUC
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1、p53和存活蛋白(Survivin)。
[0015]在某些示例性的实施方案中，所述免疫细胞在暴露于由所述白血病来源的经修饰细胞表达的内源性细胞后被活化。
[0016]在某些示例性的实施方案中，所述经修饰细胞是CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性和CD14阴性的。在某些示例性的实施方案中，所述经修饰细胞还包含选自以下的细胞表面标
志物：DC
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SIGN、Langerin、CD40、CD70、CD80、CD83、CD86、及其任何组合。在某些示例性的实施方案中，所述经修饰细胞进一步是CD40阳性、CD80阳性和CD86阳性的。在某些示例性的实施方案中，所述经修饰细胞包含共刺激分子。在某些示例性的实施方案中，所述共刺激分子是CD70。在某些示例性的实施方案中，所述经修饰细胞包含MHC I类分子。在某些示例性的实施方案中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于活化、刺激和和/或扩增免疫细胞群的方法，其包括：获得包含免疫细胞的细胞群；使所述细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合刺激所述免疫细胞的增殖的条件下，将所述细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而活化和扩增所述免疫细胞群。2.用于生成记忆T细胞群的方法，其包括：获得包含免疫细胞的细胞群；使所述细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合刺激所述免疫细胞的增殖的条件下，将所述细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而生成所述记忆T细胞群。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述细胞群包含含有经改造的免疫受体的免疫细胞。4.权利要求3所述的方法，其中所述经改造的免疫受体是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。5.用于生成具有增强的活化状态的自体T细胞群的方法，其包括：获得来自患有癌症的患者的自体T细胞群；对所述自体T细胞群进行修饰以表达结合所述患者中的肿瘤抗原的经改造的免疫受体，所述经改造的免疫受体选自嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)；使经修饰的自体T细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合刺激所述经修饰的自体T细胞的增殖的条件下，将所述经修饰的自体T细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而生成所述具有增强的活化状态的自体T细胞群。6.权利要求5所述的方法，其中所述方法用于治疗所述患有癌症的患者，所述方法还包括向所述患有癌症的患者施用所述具有增强的活化状态的自体细胞群。7.用于扩增包含抗肿瘤抗原特异性的自体T细胞群的方法，其包括：从患有癌症的患者中获得自体T细胞群；对所述自体T细胞群进行修饰以表达结合所述患者的肿瘤细胞上的肿瘤抗原的经改造的免疫受体，所述经改造的免疫受体选自嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)；使经修饰的自体T细胞群与白血病来源的经修饰细胞接触，其中所述经修饰细胞包含成熟树突状细胞表型并且是非增殖性的；以及在适合扩增和刺激所述经修饰的自体T细胞群的条件下，将所述经修饰的自体T细胞群和所述白血病来源的经修饰细胞进行共培养，从而生成包含抗肿瘤抗原特异性的经修饰的自体T细胞群，其中所述包含抗肿瘤抗原特异性的经修饰的自体T细胞群能够与所述患者的肿瘤细胞反应。8.权利要求7所述的方法，其中所述经修饰的自体细胞群能够与所述患者的不表达与所述经改造的免疫受体结合的肿瘤抗原的肿瘤细胞反应。
9.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含选自以下的至少一种肿瘤抗原：WT
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1、RHAMM、PRAME、MUC
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1、p53和存活蛋白。10.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞在暴露于由所述白血病来源的经修饰细胞表达的内源性细胞后被活化。11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞是CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性和CD14阴性的。12.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞还包含选自以下的细胞表面标志物：DC
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SIGN、Langerin、CD40、CD70、CD80、CD83、CD86、及其任何组合。13.前述权利要求中任一项所述的方法，进一步地其中所述经修饰细胞是CD40阳性、CD80阳性和CD86阳性的。14.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含共刺激分子，任选地其中所述共刺激分子是CD70。15.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含MHC I类分子。16.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含MHC II类分子。17.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞负载有外源性抗原或其肽片段。18.权利要求17所述的方法，其中所述外源性抗原是肿瘤相关抗原(TAA)或是非肿瘤相关抗原。19.权利要求17或18所述的方法，其中所述经修饰细胞能够表达所述外源性抗原。20.权利要求17或18所述的方法，其中所述经修饰细胞不能表达所述外源性抗原。21.权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述外源性抗原以肽、核苷酸序列、全蛋白或肿瘤裂解物的形式提供。22.权利要求17至21中任一项所述的方法，其中所述外源性抗原与所述经改造的免疫受体所结合的抗原相匹配。23.权利要求17至21中任一项所述的方法，其中所述外源性抗原与所述经改造的免疫受体所结合的抗原不同。24.权利要求17至23中任一项所述的方法，其中在所述白血病来源的经修饰细胞表现出成熟树突状细胞表型之前，将所述外源性抗原或其肽片段载入所述白血病来源的经修饰细胞。25.权利要求17至23中任一项所述的方法，其中在所述白血病来源的经修饰细胞向成熟树突状细胞表型过渡期间，将所述外源性抗原或其肽片段载入所述白血病来源的经修饰细胞。26.权利要求17至23中任一项所述的方法，其中在所述白血病来源的经修饰细胞表现出成熟树突状细胞表型之前、之后，将所述外源性抗原或其肽片段载入所述白血病来源的经修饰细胞。27.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含染色体11p15.5至11p12之间的遗传畸变。28.权利要求24所述的方法，其中所述遗传畸变涵盖约16Mb的基因组区域。29.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞已被辐照。
30.前述权利要求中任一项所述的方法，其中适合刺激免疫细胞或自体T细胞的增殖的条件包含向所述免疫细胞提供信号1。31.权利要求30所述的方法，其中信号1是由所述经修饰细胞提供的。32.权利要求30或31所述的方法，其中信号1包含TCR/CD3复合体的激活。33.前述权利要求中任一项所述的方法，其中适合刺激免疫细胞或自体T细胞的增殖的条件包含向所述免疫细胞提供信号2。34.权利要求33所述的方法，其中信号2是由所述经修饰细胞提供的。35.权利要求32或33所述的方法，其中信号2包含共刺激分子的激活。36.权利要求35所述的方法，其中所述共刺激分子是CD70。37.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群源自人。38.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群包含CD4+细胞和CD8+细胞二者，并且其中所述方法导致对所述CD4+细胞和CD8+细胞二者的组合刺激。39.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群包含CD4+细胞和CD8+细胞二者，并且其中所述方法导致CD4+细胞与CD8+细胞的比率提高。40.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群包含未经刺激的T细胞。41.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群包含功能性内源性TCR库。42.权利要求17至41中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群被改造成靶向所述白血病来源的经修饰免疫细胞的所述外源性抗原。43.权利要求18至41中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群被改造成靶向所述白血病来源的经修饰细胞的同一肿瘤相关抗原(TAA)。44.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群或自体T细胞群与由所述白血病来源的经修饰免疫细胞展示的非肿瘤来源的抗原具有交叉反应性。45.权利要求44所述的方法，其中所述非肿瘤来源的抗原是病毒来源或疫苗来源的回忆抗原。46.权利要求44或45所述的方法，其中所述经改造的免疫细胞是EB病毒(EBV)特异性T细胞。47.权利要求4至46中任一项所述的方法，其中所述CAR包含抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包含共刺激结构域和主要信号传导结构域。48.权利要求47所述的方法，其中所述抗原结合结构域包含全长抗体或其抗原结合片段、Fab、单链可变片段(scFv)、或单结构域抗体。49.权利要求47或48所述的方法，其中所述抗原结合结构域对肿瘤相关抗原(TAA)或非肿瘤相关抗原具有特异性。50.权利要求47至49中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含外源性抗原或其肽片段，并且其中所述抗原结合结构域对与所述外源性抗原不同的肿瘤相关抗原(TAA)或非肿瘤相关抗原具有特异性。51.权利要求47至49中任一项所述的方法，其中所述经修饰细胞包含外源性抗原或其肽片段，并且其中所述抗原结合结构域对与所述外源性抗原相同的肿瘤相关抗原(TAA)或
非肿瘤相关抗原具有特异性。52.权利要求47至51中任一项所述的方法，其中所述CAR还包含铰链区。53.权利要求52所述的方法，其中所述铰链区是选自以下的铰链结构域：抗体的Fc片段、抗体的铰链区、抗体的CH2区、抗体的CH3区、人工铰链结构域、包含CD8的氨基酸序列的铰链，或其任何组合。54.权利要求47至53中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域选自：人工疏水性序列；I型跨膜蛋白、T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、OX40(CD134)、4
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1BB(CD137)、ICOS(CD278)或CD154的跨膜结构域；以及源自杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)的跨膜结构域。55.权利要求47至54中任一项所述的方法，其中所述胞内结构域包含共刺激信号传导结构域和胞内信号传导结构域。56.权利要求55所述的方法，其中所述共刺激信号传导结构域包含蛋白质的共刺激结构域和源自杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)或其变体的胞内结构域中的一个或更多个，所述蛋白质选自：TNFR超家族中的蛋白质、CD27...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克，
申请(专利权)人：门德斯有限公司，
类型：发明
国别省市：