新琼四糖促进树突状细胞成熟、增强免疫细胞治疗疗效的用途制造技术

本发明专利技术公开了新琼四糖促进树突状细胞成熟、增强免疫细胞治疗疗效的用途。本发明专利技术实验证明，新琼四糖可以剂量依赖性地促进未成熟树突状细胞成熟。本领域技术人员知道，成熟树突状细胞具有较强的抗原递呈能力，可将抗原信息提呈给T细胞从而诱导T细胞产生特异性免疫应答。因此，本发明专利技术技术方案可以用于细胞免疫治疗以增强细胞免疫治疗疗效。疗以增强细胞免疫治疗疗效。疗以增强细胞免疫治疗疗效。

【技术实现步骤摘要】
新琼四糖促进树突状细胞成熟、增强免疫细胞治疗疗效的用途


[0001]本专利技术属于细胞治疗领域，具体涉及新琼四糖促进树突状细胞成熟、增强免疫细胞治疗疗效的用途。

技术介绍

[0002]树突状细胞(DCs)是目前发现的功能最为强大、唯一能够活化初始T细胞的抗原呈递细胞。DCs的成熟与否是发挥生理功能的先决条件。未成熟的DCs(imDCs)表面低表达MHCⅡ类分子和共刺激分子，具有较强的抗原摄取和加工能力；成熟的DCs(mDCs)具有较强的抗原递呈能力，可将抗原信息提呈给T细胞从而诱导T细胞产生特异性免疫应答。因此，采用DCs负载肿瘤抗原制成肿瘤疫苗而发挥抗肿瘤作用的效果好坏，与DCs的成熟程度密切相关。由于只有成熟的DCs才能有效刺激淋巴细胞增殖和激活适应性免疫应答，有效诱导DCs成熟成为DC疫苗制备的关键因素。如何诱导DCs成熟也成为DCs体外培养研究的热点。
[0003]在DCs被激活后由未成熟状态转变为成熟状态的过程中，伴随着NO的释放及TNF
‑
α、IFN
‑
γ、IL
‑
6、IL
‑
10和MCP
‑
1等细胞因子的分泌增加。同时，DCs成熟后表面标志物CD11c和CD86的表达水平显著升高。
[0004]琼胶寡糖作为一种新型的海洋功能性低聚糖，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、美白和保湿等生物活性，已成为国内外研究的热点。根据还原性末端的不同，琼胶寡糖可分为琼寡糖(AOs)和新琼寡糖(NAOs)。新琼四糖就是一种NAOs。
[0005]现有技术没有新琼四糖对树突状细胞成熟的影响报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于克服现有技术不足，提供新琼四糖促进树突状细胞成熟、增强免疫细胞治疗疗效的用途。
[0007]本专利技术目的通过下面的技术方案实现：
[0008]一种新琼四糖用于树突状细胞体外培养促进其成熟的用途。
[0009]一种新琼四糖用于制备促进树突状细胞成熟的培养基用途，该培养基以新琼四糖为促进树突状细胞成熟的活性成分。
[0010]进一步地，所述培养基中还含有青链霉素。
[0011]进一步地，所述培养基中还含有胎牛血清。
[0012]本专利技术取得的有益效果：
[0013]本专利技术通过实验证明，新琼四糖可以剂量依赖性地促进未成熟树突状细胞成熟。本领域技术人员知道，成熟树突状细胞具有较强的抗原递呈能力，可将抗原信息提呈给T细胞从而诱导T细胞产生特异性免疫应答。因此，本专利技术提供的技术方案可以用于细胞免疫治疗以增强细胞免疫治疗疗效。
附图说明
[0014]图1为各组CD11c和CD86表达阳性率。
具体实施方式
[0015]为了更好地介绍本专利技术，下面通过具体实施例详细阐述本专利技术的实质性内容，但需要注意并不以此限定本专利技术的保护范围。
[0016]实施例1：
[0017]一、实验材料
[0018]C57BL/6J小鼠(8～10周龄)购自杰克森艾特生物科技(北京)有限公司。
[0019]RPMI
‑
1640培养基购自Gibco公司。
[0020]胎牛血清购自Gibco公司。
[0021]青链霉素双抗购自Sigma
‑
Aldrich公司。
[0022]β
‑
巯基乙醇购自Sigma
‑
Aldrich公司
[0023]rmGM
‑
CSF购自上海优宁维生物科技股份有限公司。
[0024]rmIL
‑
4购自上海淳麦生物科技有限公司。
[0025]胰酶购自Sigma
‑
Aldrich公司。
[0026]新琼四糖(HPLC≥98％)购自源叶生物。
[0027]NO试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。
[0028]ELISA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。
[0029]流式细胞术抗体购自爱必信(上海)生物科技有限公司。
[0030]二、实验方法
[0031]1、imDCs的分离和培养
[0032]选取8～10周龄的C57BL/6J小鼠，处死后在无菌条件下分离股骨及胫骨，用75％酒精及PBS洗涤后吹打出骨髓混匀，用70μm细胞筛过滤后再使用红细胞裂解液室温裂解，最后用含15％胎牛血清的RPMI
‑
1640培养基终止裂解，PBS洗涤即获得骨髓细胞。将骨髓细胞以2
×
106个/mL浓度重悬于RPMI
‑
1640完全培养基(含15％血清、1％青链霉素和0.1％β
‑
巯基乙醇的RPMI
‑
1640培养基)中，使用20ng/mLrmGM
‑
CSF和10ng/mLrmIL
‑
4诱导，于5％CO2、37℃培养箱培养，隔日半量换液，第6d收集悬浮细胞即得imDCs。
[0033]2、分组和诱导方案
[0034]将imDCs随机分为3组：对照组、新琼四糖Ⅰ组和新琼四糖Ⅱ组，诱导方案如下：
[0035]新琼四糖Ⅰ组：用含25μg/mL新琼四糖的RPMI
‑
1640完全培养基继续培养24h诱导成熟；
[0036]新琼四糖Ⅱ组：用含50μg/mL新琼四糖的RPMI
‑
1640完全培养基继续培养24h诱导成熟；
[0037]对照组：用RPMI
‑
1640完全培养基培养24h，不进行诱导。
[0038]3、细胞增殖活性测定
[0039]将imDCs以1
×
105个/mL浓度重悬于RPMI
‑
1640完全培养基，并接种于96孔板中，每孔100μL。4h后，新琼四糖Ⅰ组加入100μL含50μg/mL新琼四糖的RPMI
‑
1640完全培养基(新琼四糖终浓度为25μg/mL)，新琼四糖Ⅱ组加入100μL含100μg/mL新琼四糖的RPMI
‑
1640完全培
养基(新琼四糖终浓度为50μg/mL)，对照组加入100μLRPMI
‑
1640完全培养基。轻轻混匀后，继续培养24h，每孔加入10μL CCK
‑
8试剂，继续培养4h，酶标仪检测各孔OD450。
[0040]4、NO释放测定
[0041]将imDCs以1
×
106个/mL浓度重悬于RPMI
‑
1640完全培养基，并接种于96孔板中，每孔100μL。4h后，新琼四糖Ⅰ组加入100μL含50μg/mL新琼四糖的RPMI
‑
1640完全培养基(新琼四糖终浓度为25μg/mL)，新琼四糖Ⅱ组加入100μL含100μg/mL新琼四糖的RPMI
‑
1640完全培养基(新本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新琼四糖用于树突状细胞体外培养促进其成熟的用途。2.一种新琼四糖用于制备促进树突状细胞成熟的培养基用途，该培养基以新琼四糖为促进树突状细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二N五零七八四，
申请(专利权)人：谷文忠，
类型：发明
国别省市：