靶向GUCY2C的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，提供了一种靶向GUCY2C的抗体及其应用。本发明专利技术所提供的抗体能够高特异性与GUCY2C抗原结合，从而用于靶向治疗癌症。疗癌症。疗癌症。

【技术实现步骤摘要】
靶向GUCY2C的抗体及其应用
[0001]优先权信息
[0002]本申请请求2022年01月04日向中国国家知识产权局提交的专利申请号为202210003065.6，专利技术名称为靶向GUCY2C的抗体及其应用的优先权及权益，并且通过参照将其全文并入此处。


[0003]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种靶向GUCY2C的抗体及其应用。

技术介绍

[0004]胃肠道肿瘤(胃癌、结肠癌等)是国内的高发癌症(第二、三大高发)，是治疗需求高度未被满足的癌症，目前大多数结直肠癌是微卫星稳定的(约占晚期CRC的95％)，并伴有KRAS或BRAF突变，预后非常差，且不适用于目前获批的大部分免疫疗法(例如：Keytruda和Opdivo治疗的是微卫星高度不稳定的结直肠癌；EGFR产品对存在KRAS突变的CRC患者无效)；目前辉瑞开发的GUCY2C产品(PF
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07062119)肿瘤抑制疗效与KRAS和BRAF的突变无关，这提升了药物的开发价值。
[0005]GUCY2C在各种胃肠道恶性肿瘤中均有表达，包括95％以上的大肠癌和50％以上的胃或胃食管交界癌，GUCY2C在包括肝转移在内的所有阶段的大多数结肠癌中都具有高表达，中等分化和高分化的胃肠道肿瘤往往与GUCY2C的更高的膜表达相关，但在其他非胃肠道肿瘤中基本不表达，转移性结直肠癌细胞中GUCY2C的表达为正常肠上皮细胞的2～10倍。
[0006]GUCY2C由于很大程度上限制性表达于正常组织肠上皮紧密连接的顶端，而由于肿瘤破坏了正常的紧密连接结构，将GUCY2C更彻底地暴露出来，与正常组织相比，肿瘤只结合GUCY2C抗体，从而不会对正常组织产生影响。因此，GUCY2C靶点特异性好，适合开发靶向GUCY2C的CAR
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T细胞来治疗结直肠癌。
[0007]嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，简称CAR
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T技术，是通过体外改造病人的T细胞，使病人的T细胞具备识别肿瘤细胞的能力，体外扩大培养后回输到病人体内进行治疗的一种方法。例如，以CD19为靶点的CAR
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T在治疗B细胞血液肿瘤方面取得了巨大的成果。
[0008]目前，CAR
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T治疗在胃肠道肿瘤中的应用仍有待进一步开发。

技术实现思路

[0009]本专利技术旨在一定程度上解决相关技术问题的至少之一。因此，本专利技术的一个目的在于提出一种靶向GUCY2C的抗体及其应用。为此，本专利技术提供了一种抗GUCY2C抗体或抗原结合片段，以及分离的核苷酸、表达载体、重组细胞等。
[0010]根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种GUCY2C抗体或抗原结合片段，其包括：(i)具有SEQ ID NO:1所示重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，以及具有SEQ ID NO:2所示轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述CDR按照IMGT定义方式、Kabat定义方式、Chothia定义方式、AbM定义方式或Contact定义方式确定；或者与(i)相比，具有一个以上保守氨基
酸取代的氨基酸序列。本专利技术所提供的抗体或抗原结合片段，能够特异性结合GUCY2C蛋白。
[0011]根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种抗GUCY2C抗体或抗原结合片段，其包括下列至少之一：(1)具有SEQ ID NO:3、4和5所示的重链CDR序列，以及具有SEQ ID NO:6、7和氨基酸序列RAS所示的轻链CDR序列；或者与(1)相比，具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
[0012]根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码本专利技术第一方面或第二方面所述的抗体或抗原结合片段。
[0013]根据本专利技术的第四方面，本专利技术提供了一种表达载体，包含本专利技术第三方面所述的多核苷酸。
[0014]根据本专利技术的第五方面，本专利技术提供了一种重组细胞，包含本专利技术第四方面所述的表达载体。
[0015]根据本专利技术的第六方面，本专利技术提供了一种制备抗体或其抗原结合片段的方法，包括培养本专利技术第五方面所述的重组细胞，其中所述抗体或抗原结合片段为本专利技术第一方面或第二方面所述的抗体或抗原结合片段。
[0016]根据本专利技术的第七方面，本专利技术提供了一种抗体或抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症，所述抗体或抗原结合片段为本专利技术第一方面或第二方面所述的抗体或抗原结合片段。
[0017]根据本专利技术的第八方面，本专利技术提供了一种抗体或抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于GUCY2C抗原的诊断检测，所述抗体或抗原结合片段为本专利技术第一方面或第二方面所述的抗体或抗原结合片段。
[0018]在本专利技术的一些实施例中，所述试剂盒可用于免疫印迹、免疫沉淀、ELISA检测。
[0019]根据本专利技术的第九方面，本专利技术提供了一种药物组合物，包括本专利技术第一方面或第二方面所述的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。
[0020]根据本专利技术的第十方面，本专利技术提供了一种试剂盒，包括本专利技术第一方面或第二方面所述的抗体或抗原结合片段。
[0021]根据本专利技术的第十一方面，本专利技术提供了一种抗GUCY2C的嵌合抗原受体，包括：胞外区、跨膜区和胞内区，所述胞外区包括单链抗体的重链可变区和轻链可变区以及CD8铰链区，所述单链抗体特异性识别GUCY2C。
[0022]在本专利技术的一些实施例中，所述单链抗体包括如第一方面或第二方面所述的抗GUCY2C抗体或抗原结合片段。
[0023]在本专利技术的一些实施例中，所述单链抗体包括如SEQ ID NO:10中第22
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266位氨基酸所示的氨基酸序列。
[0024]根据本专利技术的第十二方面，本专利技术提供了一种CAR
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T细胞，所述CAR
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T细胞表达本专利技术第十一方面所述的抗GUCY2C的嵌合抗原受体或含有编码第十一方面所述的嵌合抗原受体的核酸。
[0025]本专利技术所取得的有益效果为：本专利技术提供了一种靶向GUCY2C的抗体，其亲和力高，能够很好结合过表达GUCY2C的肿瘤细胞，可以用于抗体药物的研发。而且利用该抗体的可变区构建的CAR慢病毒载体，制备的CAR
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T细胞在体外具有非常好的杀瘤效果。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0027]图1是根据本专利技术的实施例提供的抗人GUCY2C抗体2A1与T84细胞和K562
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hGUCY2C肿瘤细胞膜上表达的人GUCY2C结合的结果；
[0028]图2是根据本专利技术的实施例提供的抗人GUCY2C抗体2A1与humanGUC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗GUCY2C抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：(i)具有SEQ ID NO:1所示重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，以及具有SEQ ID NO:2所示轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述CDR按照IMGT定义方式、Kabat定义方式、Chothia定义方式、AbM定义方式或Contact定义方式确定；或者与(i)相比，具有一个以上保守氨基酸取代的氨基酸序列。2.一种抗GUCY2C抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括下列至少之一：(1)具有SEQ ID NO:3、4和5所示的重链CDR序列，以及具有SEQ ID NO:6、7和氨基酸序列RAS所示的轻链CDR序列；或者与(1)相比，具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括下列至少之一：(a)具有SEQ ID NO:1所示的重链可变区和SEQ ID NO:2所示的轻链可变区；与(a)相比，序列同一性至少在85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的氨基酸序列。4.根据权利要求1～3中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体含有重链恒定区和/或轻链恒定区，所述重链恒定区和轻链恒定区来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一；任选地，所述重链恒定区和轻链恒定区均来自于人源IgG抗体或其突变体；任选地，所述重链恒定区和轻链恒定区均来自于人源IgG1、IgG2或IgG4。5.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段为多聚体抗体、CDR移植抗体或小分子抗体；任选地，所述抗体为小分子抗体；任选地，所述小分子抗体包括Fab抗体、Fv抗体、单链抗体以及最小识别单位的至少之一。6.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1～5中任一项所述的抗体或抗原结合片段。7.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：王先进，彭亮，叶立军，黄倩，
申请(专利权)人：深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：