抗超氧化物歧化酶抗体及其应用制造技术

本申请提供了靶向超氧化物歧化酶(SOD)的抗体或其抗原结合片段。本申请还提供了所述抗体或其抗原结合片段在检测或纯化SOD中的用途。途。途。

【技术实现步骤摘要】
抗超氧化物歧化酶抗体及其应用


[0001]本文涉及靶向超氧化物歧化酶(SOD)的抗体。本文还涉及该抗体在检测或纯化SOD中的用途。

技术介绍

[0002]超氧化物歧化酶(SOD)是一种广泛存在于动植物体内的金属酶（含铜、锌、铁或锰），是人体内最主要的抗氧化物质。外源性补充SOD，可提高血液中SOD的含量，及时分解和消除过剩自由基，从而保护机体正常细胞组织，避免了疾病的发生，使人保持身体健康。
[0003]皮肤衰老和损伤是人体衰老的重要特征，而人体衰老的一个重要原因是由于活性氧类自由基堆积或清除产生障碍的后果，体内的多余自由基会引起细胞损伤以及色素沉着。由于人的皮肤直接与氧气接触，会造成皮肤的老化和损伤。外源 SOD的补充有利于延缓皮肤衰老、抗氧化、祛色斑的功用。故国内外许多化妆品厂家都在自身产品中加入了一定比例的 SOD。另外，基于SOD是作用于超氧阴离子自由基的专一歧化反应催化剂，故 SOD作为医药产品，在治疗因自由基作用而导致的炎症、自身免疫性、心脑血管疾病等都有着显著疗效。SOD可利用其抗氧化作用抑制关节炎、胸膜炎、急性气管炎等炎症类型。
[0004]目前SOD的生产来源于动物血液和肝脏，或者从植物中提取。尽管发现和使用SOD的已经有几十年，但仍缺乏特异性的检测和纯化手段。

技术实现思路

[0005]在一方面，本文提供了靶向超氧化物歧化酶(SOD)的抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区，所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3选自如下组合之一：
[0006]1) HCDR1的氨基酸序列为SYITDMYCMG (SEQ ID NO：1)；
[0007]HCDR2的氨基酸序列为LFSRHGIERYADSVKG (SEQ ID NO：2)；
[0008]HCDR3的氨基酸序列为ARTPGNVTPRCAALLMYDY (SEQ ID NO：3)；
[0009]2) HCDR1的氨基酸序列为AYTISMCAMG (SEQ ID NO：4)；
[0010]HCDR2的氨基酸序列为MINRHGIEYYADSVKG (SEQ ID NO：5)；
[0011]HCDR3的氨基酸序列为GPTPGAELPRCATSLNYDY (SEQ ID NO：6)；以及
[0012]3) HCDR1的氨基酸序列为AYTISMCAMG (SEQ ID NO：4)；
[0013]HCDR2的氨基酸序列为MINRHGIEYYADSVKG (SEQ ID NO：5)；
[0014]HCDR3的氨基酸序列为EPTPGAESPRCATSLNYDY (SEQ ID NO：7)。
[0015]在一些实施方案中，所述重链可变区包括SEQ ID NO ：8
‑
10任一项所示序列。
[0016]在一些实施方案中，所述抗体为单域抗体。
[0017]在一些实施方案中，所述重链可变区融合有Fc片段。
[0018]在一些实施方案中，通过表面等离子共振技术测定，所述抗体或其抗原结合片段与SOD结合的KD值不高于10
‑
7 M。
[0019]在一些实施方案中，所述SOD为Cu/Zn
‑
SOD。
[0020]另一方面，本文提供了上述抗体或其抗原结合片段在检测或纯化SOD中的用途。
[0021]另一方面，本文提供了固相基质，其偶联有上述抗体或其抗原结合片段。
[0022]在一些实施方案中，所述固相基质为磁珠或层析介质形式。
[0023]本文提供的抗体或其抗原结合片段对SOD具有高亲和力，可用于SOD的检测或纯化。
附图说明
[0024]图1显示了通过ELISA测定的抗体C238
‑
Fc与 SOD结合亲和力结果。
[0025]图2显示了通过ELISA测定的抗体B33
‑
Fc与 SOD结合亲和力结果。
[0026]图3显示了通过SPR测定的抗体B33
‑
124
‑
Fc在不同pH下与SOD结合亲和力结果。
具体实施方式
[0027]除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。
[0028]本文所用术语“包含”、“含有”、“具有”以及类似的表述表示不排除未列举的要素。这些术语也包括仅由所列举的要素组成的情形。
[0029]本文使用的术语“抗体”指包括包含一个或更多个特异性结合抗原的抗原结合结构域的免疫球蛋白或其他类型分子，为对特定抗原表现出结合特异性的蛋白质或多肽。抗体的具体实例可包括完整抗体、单链抗体、单域抗体、多特异性抗体等。抗体分子通常为由 2 个相同重链和 2 个相同轻链通过二硫键相互连接组成的四聚体。根据氨基酸序列的保守性差异，将重链和轻链分为位于氨基端的可变区(V) 和位于羧基端的恒定区(C)。可变区用于识别和结合抗原，恒定区(如Fc片段)用于启动下游效应。在重链和轻链的可变区内，分别有三个局部区域的氨基酸组成和排列顺序具有更高的变异程度，为抗体与抗原结合的关键位置，因而也称为互补决定区(CDR)。CDR的氨基酸序列可以使用本领域公认的编号方案，例如Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact容易地确定。在一个具体实施方案中，已经根据IMGT编号方案确定了本文所述的抗体的CDR。三个重链互补决定区分别称为 HCDR1、HCDR2 和HCDR3，三个轻链互补决定区分别称为 LCDR1、 LCDR2 和 LCDR3。根据抗体重链恒定区的氨基酸序列，可将人抗体分为五种主要的不同类型： IgA、 IgD、 IgE、 IgG 和 IgM。这些抗体类型根据铰链区的大小，链间二硫键的位置和分子量的不同可进一步分为亚类，例如，IgGl 、IgG2a、IgG2b和 IgG3等。根据抗体轻链恒定区氨基酸组成和排列的不同，可将轻链分为κ和λ两种类型。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构象在本领域内是已知的。
[0030]抗体的“抗原结合片段”指抗体分子中参与抗原特异性结合的氨基酸片段，例如，Fab、Fab
’
和F(ab
’
)2等。本领域技术人员已知如何获得这些抗原结合片段。例如，经典抗体分子可经木瓜蛋白酶消化而得到Fab片段，经胃蛋白酶消化得到F(ab
’
)
2 ，通过以还原剂处理断开F(ab
’
)
2 铰链区之间的二硫键而形成Fab
’
片段。
[0031]单链抗体(single chain fragment variable, scFv)，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过短肽连接成一条肽链而构成。通过正确折叠，来自重链和轻链的可变区通过
非共价键相互作用形成Fv段，因而scFv能较好地保留其对抗原的亲和活性。
[0032]“本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向超氧化物歧化酶的抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区，所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3选自如下组合之一：1) HCDR1的氨基酸序列为SYITDMYCMG；HCDR2的氨基酸序列为LFSRHGIERYADSVKG；HCDR3的氨基酸序列为ARTPGNVTPRCAALLMYDY；2) HCDR1的氨基酸序列为AYTISMCAMG；HCDR2的氨基酸序列为MINRHGIEYYADSVKG；HCDR3的氨基酸序列为GPTPGAELPRCATSLNYDY；以及3) HCDR1的氨基酸序列为AYTISMCAMG；HCDR2的氨基酸序列为MINRHGIEYYADSVKG；HCDR3的氨基酸序列为EPTPGAESPRCATSLNYDY。2. 如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包括SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩天璞，陈春光，张涛，
申请(专利权)人：北京和颐林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：