一种TaqDNA聚合酶的单克隆抗体F12H12及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12，其重链可变区序列的CDR1序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，CDR2序列为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CDR3序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；其轻链可变区序列的CDR1序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，CDR2序列为SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，CDR3序列为SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。该抗体在广泛的非扩增温度范围内具有良好的封闭Taq DNA

【技术实现步骤摘要】
一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12及其应用


[0001]本专利技术涉及一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12及其应用，属于Taq DNA聚合酶


技术介绍

[0002]Taq DNA聚合酶是最初由Saiki等从温泉中分离的一株水生噬热杆菌(thermus aquaticus)中提取获得，分子量约65kD。此酶能耐高温，在70℃反应2h后其残留活性大于原来的90％，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60％，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40％；在分子克隆中Taq DNA聚合酶可用于DNA序列测定并可利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)对DNA的特定片段进行体外扩增。在PCR过程中，由于Taq DNA聚合酶在变性步骤中(约94℃)不失活，可直接进入第二轮循环，因此不必每轮循环时重新加入新酶，这使得Taq DNA聚合酶成为PCR反应中的独特用酶。
[0003]然而，在PCR预变性前，Taq DNA聚合酶5
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外切活性能够引起引物、探针或模板的降解；而其5
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聚合活性在PCR预变性前阶段即可引起模板或引物错配而产生非特异性的扩增；非特异性产物在后续的扩增循环中将进一步被放大，从而造成目的产物扩增产量降低，甚至扩增失败。
[0004]目前，有效解决上述问题的方法是热启动。热启动是即在PCR预变性阶段可逆地使Taq DNA聚合酶失去活性。目前常用的热启动方法有抗体法、化学修饰法、适体法等。化学修饰法较为常用，活性封闭较为完全、不会引入外源污染，但是其Taq DNA聚合酶活性较难完全激活，需要高温孵育较长时间。而适体法则无法彻底封闭Taq DNA聚合酶活性，当温度升高至45℃以上即可恢复酶活性，很难达到严格的热启动。抗体法是在热启动PCR中，Taq DNA聚合酶抗体与Taq DNA聚合酶可逆性结合，与Taq DNA聚合酶维持动态平衡；高温变性前，Taq DNA聚合酶抗体结合在Taq DNA聚合酶活性位点上，封闭其酶活性；变性阶段，Taq DNA聚合酶抗体失活，Taq DNA聚合酶快速释放。退火阶段，Taq DNA聚合酶抗体恢复活性，封闭Taq DNA聚合酶活性。延伸阶段，Taq DNA聚合酶抗体再次失活，Taq DNA聚合酶以目的基因为模板、引物为出发点合成完整双链DNA。抗体法中应用的Taq DNA聚合酶抗体可以封闭Taq DNA聚合酶活性位点，包括聚合活性位点和外切活性位点，抑制非特异性产物及引物二聚体的产生，提高检测灵敏度、引物与模板的结合效率和目的基因的扩增产率。
[0005]但是，现有的Taq DNA聚合酶抗体大多于预变性阶段前的广泛的温度范围(0070℃)内只有较窄的温度范围(如30037℃)内具有较好的聚合酶活性的封闭效果，在其他温度范围内的封闭效果不佳，这也将影响到聚合酶的热启动效果。因此，本领域亟需一种能够在广泛的非扩增温度范围内可以完全抑制Taq DNA聚合酶的聚合活性的Taq DNA聚合酶抗体。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12及其应用，可以有效解决上述问题。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12，其重链可变区序列的CDR1序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，CDR2序列为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CDR3序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；其轻链可变区序列的CDR1序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，CDR2序列为SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，CDR3序列为SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。该单克隆抗体F12H12可以特异结合Taq DNA聚合酶，封闭其5
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聚合活性和/或5
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外切活性，尤其是5
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聚合活性，可用于制备热启动Taq DNA聚合酶。
[0009]优选地，所述单克隆抗体F12H12的重链可变区序列为SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
[0010]优选地，所述单克隆抗体F12H12的轻链可变区序列为SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
[0011]优选地，所述单克隆抗体F12H12的重链序列为SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
[0012]优选地，所述单克隆抗体F12H12的轻链序列为SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
[0013]一种所述的单克隆抗体F12H12在降低Taq DNA聚合酶的非特异性扩增中的应用。所述单克隆抗体F12H12能够在不影响Taq DNA聚合酶活性前提下，在广泛的非扩增温度条件下(0070℃)能够充分封闭Taq DNA聚合酶的活性区域，有效降低非特异性扩增和引物二聚体产生。
[0014]一种细胞，其能生产上述的单克隆抗体F12H12，包括不限于杂交瘤、CHO细胞和293细胞
[0015]本专利技术的有益效果是：
[0016]本专利技术单克隆抗体F12H12，在广泛的非扩增温度条件下(0070℃)能够充分封闭Taq DNA聚合酶的活性，其封闭效果均能到达97％以上，能有效降低非特异性扩增和引物二聚体产生。随着温度升高至75℃，单克隆抗体开始与Taq DNA聚合酶解离，恢复Taq DNA聚合酶聚合活性。与未封闭的Taq DNA聚合酶相比，特异性扩增效率显著提高。
[0017]本专利技术抗体酶能很好的扩增出低浓度15copies/反应的样本，相比野生Taq酶，其扩增灵敏度显著提升；扩增CT值与商品抗体酶有一定的升高，但荧光终值有较大提高，说明其扩增效率显著提高。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0019]图1是本专利技术实施例2提供的Taq DNA聚合酶单克隆抗体聚合酶活性封闭检测。
[0020]图2是本专利技术实施例3提供的Taq DNA聚合酶抗体外切酶活性封闭检测结果。
[0021]图3是是本专利技术实施例4提供的Taq酶抗体的扩增效果图。
具体实施方式
[0022]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施
方式中的附图，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12，其特征在于，其重链可变区序列的CDR1序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，CDR2序列为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CDR3序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；其轻链可变区序列的CDR1序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，CDR2序列为SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，CDR3序列为SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F12H12，其特征在于，其重链可变区序列为SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：章永垒，李旸欣，罗兰兰，杨志伟，姚荣星，林榕榕，
申请(专利权)人：厦门康基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：