System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种Pfu DNA聚合酶抗体R9C8及其应用制造技术_技高网

一种Pfu DNA聚合酶抗体R9C8及其应用制造技术

技术编号:40898911 阅读:2 留言:0更新日期:2024-04-18 11:15
本发明专利技术提供一种Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8及其应用,其重链可变区序列如SEQ ID NO:1所示;其轻链可变区序列如SEQ ID NO:2所示。该R9C8抗体能在65℃封闭Pfu DNA聚合酶5’‑3’聚合酶活性,且封闭效率均95%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种pfu dna聚合酶抗体r9c8及其应用,属于pfu dna聚合酶。


技术介绍

1、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,pcr)是体外酶促合成特异dna片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的pcr由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的dna得以迅速扩增。它具有特异性强、灵敏℃高、快速、简便及重复性好等特点,是分子生物学研究最基础、最重要的工具之一。

2、pfu dna聚合酶(简称,pfu酶)是科学家从激烈火球菌(pyrococcus furiosus,pfu)分离出的一种dna聚合酶,该酶分子量为90kda,具有出色的热稳定性。同时该酶具有5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性,而3’-5’外切酶活性的主要功能是校正作用,这让pfu酶拥有极高的保真性。由于高保真性和高稳定性让pfu酶成为最广泛应用的dna聚合酶之一。

3、在pcr的过程中,pfu酶通常与其他dna聚合酶一样,在低温条件下,仍然具有一定聚合酶活性,从而产生非特异性扩增以及形成引物二聚体。目前可以通过很多途径以达到热启动的目的,如对酶进行基因突变、物理隔绝、化学修饰、核酸引物修饰等。但是这些方法均有不利的因素,如酶活封闭不完全、影响pcr的复杂性、影响酶的续进性、忠实性或方法比较繁琐等。

4、针对上述中的相关技术的缺点,采用单克隆抗体修饰pfu酶是一种相对更好的方法。pfu酶抗体是热启动pcr抗pfu酶的抗体,其与pfu酶结合后抑制dna聚合酶活性。在pcr扩增时,高温变性前pfu酶抗体与pfu酶结合抑制dna聚合酶活性,能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增,提高扩增的特异性及目的dna产量。但是,现有的pfu dna聚合酶抗体在65℃以上时对pfu dna聚合酶的封闭效率较低,导致仍然有一些非特异性扩增。


技术实现思路

1、本专利技术提供了一种pfu dna聚合酶抗体r9c8及其应用,可以有效解决上述问题

2、本专利技术是这样实现的:

3、一种pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8,其重链可变区序列如seq id no:7所示;其轻链可变区序列如seq id no:8所示。

4、在一些实施例中,所述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8的重链可变区序列的cdr1序列如seq id no:1所示,cdr2序列如seq id no:2所示,cdr3序列如seq id no:3所示。

5、在一些实施例中,所述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8的轻链可变区序列的cdr1序列如seq id no:4所示,cdr2序列如seq id no:5所示,cdr3序列如seq id no:6所示。

6、在一些实施例中,所述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8的重链序列如seq idno:9所示。

7、在一些实施例中,所述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8的轻链序列如seq idno:10所示。

8、一种降低pfu dna聚合酶非特异性扩增的方法,应用上述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8。

9、一种细胞,其产生上述的单克隆抗体r9c8。

10、本专利技术的有益效果是:

11、本专利技术的r9c8抗体能在65℃封闭pfu dna聚合酶5’-3’聚合酶活性,且封闭效率均95%以上。

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【技术保护点】

1.一种Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8,其特征在于,其重链可变区序列如SEQ ID NO:7所示;其轻链可变区序列如SEQ ID NO:8所示。

2.根据权利要求1所述的Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8,其特征在于,其重链可变区序列的CDR1序列如SEQ ID NO:1所示,CDR2序列如SEQ ID NO:2所示,CDR3序列如SEQ IDNO:3所示。

3.根据权利要求1所述的Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8,其特征在于,其轻链可变区序列的CDR1序列如SEQ ID NO:4所示,CDR2序列如SEQ ID NO:5所示,CDR3序列如SEQ IDNO:6所示。

4.根据权利要求1所述的Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8,其特征在于,其重链序列如SEQ ID NO:9所示。

5.根据权利要求1所述的Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8,其特征在于,其轻链序列如SEQ ID NO:10所示。

6.一种降低Pfu DNA聚合酶非特异性扩增的方法,其特征在于,应用权利要求1至5任一项所述的Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述的Pfu DNA聚合酶单克隆抗体R9C8与Pfu DNA聚合酶的质量比为1.5-2.5:1。

8.一种细胞,其特征在于,其产生权利要求1至5任一项所述的单克隆抗体R9C8。

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【技术特征摘要】

1.一种pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8,其特征在于,其重链可变区序列如seq id no:7所示;其轻链可变区序列如seq id no:8所示。

2.根据权利要求1所述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8,其特征在于,其重链可变区序列的cdr1序列如seq id no:1所示,cdr2序列如seq id no:2所示,cdr3序列如seq idno:3所示。

3.根据权利要求1所述的pfu dna聚合酶单克隆抗体r9c8,其特征在于,其轻链可变区序列的cdr1序列如seq id no:4所示,cdr2序列如seq id no:5所示,cdr3序列如seq idno:6所示。

4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨萍萍江荣成李萌萌邓海霞杨志伟江溪成范进华陈易超章永垒
申请(专利权)人:厦门康基生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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