一种安全有效的同种异体免疫细胞组合物及其制备方法和其用途技术

本发明专利技术涉及一种安全有效的免疫细胞组合物，所述组合物由(1

【技术实现步骤摘要】
一种安全有效的同种异体免疫细胞组合物及其制备方法和其用途


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种安全有效的同种异体免疫细胞组合物及其制备方法和其用途。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤成为威胁人类生命健康的主要疾病之一，其发病率呈现逐年增高趋势。手术、放疗和化疗成为肿瘤治疗的三大常规手段，但均存在特异性不足的缺陷，导致在清除肿瘤细胞的同时，造成正常组织和器官不同程度的损伤。手术切除在一定程度上能解除癌症患者遭受癌症带来的痛苦，但对于位于体内深部的癌症和已扩散的肿瘤无能为力。放疗和化疗临床使用多年，但存在选择性低、副作用大、大剂量致死、呕吐、恶心等潜在风险和毒副作用。20世纪80年代，Rosenberg SA等观察到患非免疫系统肿瘤的动物给予重组IL
‑
2治疗后，动物的淋巴细胞可以导致肿瘤的消退和转移。免疫细胞治疗逐步成为第四种肿瘤综合治疗模式。
[0003]CAR
‑
T细胞疗法包括自体CAR
‑
T和同种异体CAR
‑
T。自体CAR
‑
T细胞的制备需从患者自身血液中分离和培养免疫细胞，再将其用于患者自身的肿瘤免疫治疗。因癌症患者尤其是肿瘤晚期患者、化疗治疗患者的细胞(如PBMC)活性极低、细胞活化困难、扩增慢等问题，因其免疫治疗效果有效而限制其临床应用。同种异体CAR
‑
T细胞疗法采用健康人T细胞或干细胞来源的T细胞培养制备免疫细胞，再将其用于肿瘤免疫治疗。同种异体CAR
‑
T细胞疗法解决了自体CAR
‑
T疗法存在的肿瘤患者自体PMBC细胞活力差、细胞活化困难、扩增慢(扩增倍数低)等问题，但仍存在异体细胞被宿主免疫细胞识别并吞噬、培养周期长(20
‑
60天)、生产成本高、免疫细胞活力低、免疫治疗效果有待提升等问题，而影响其免疫治疗靶向性和精准性。为此，亟需研究开发靶向性好、杀伤效率高、安全有效的免疫细胞，以满足临床精准治疗的迫切需求。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种安全有效的免疫细胞组合物，所述组合物由(1
‑
10)
×
107个/ml的免疫细胞、0.5
‑
2％的人血白蛋白和生理盐水组成，其中，所述免疫细胞由第一同种异体免疫细胞和第二同种异体免疫细胞用生理盐水制成密度为(1
‑
10)
×
107个/ml后，按照第一同种异体免疫细胞：第二同种异体免疫细胞的体积比为1:1
‑
2配置，所述免疫细胞活率≥95％。
[0005]本专利技术的优选技术方案中，所述组合物由(2
‑
8)
×
107个/ml的免疫细胞、1
‑
1.5％人血白蛋白浓度和注射用生理盐水组成，其中，免疫细胞活率≥98％。
[0006]本专利技术的优选技术方案中，所述第一同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：
[0007](1)用肿瘤患者血浆浸润培养瓶后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下静置4h
‑
5h，制得肿瘤患者血浆包被的培养瓶；
7.02
‑
7.76。
[0021]本专利技术的优选技术方案中，所述免疫细胞的扩增倍数≥900倍，优选≥1000倍，更优选≥1100倍。
[0022]本专利技术的优选技术方案中，所述免疫细胞活率≥95％，优选≥98％。
[0023]本专利技术的优选技术方案中，有效期内，组合物中免疫细胞活率≥85％。
[0024]本专利技术的优选技术方案中，组合物置于15
‑
25℃条件下放置≤12h，组合物中免疫细胞活率≥85％。
[0025]本专利技术的优选技术方案中，所述组合物中不含防腐剂和抗生素。
[0026]本专利技术的优选技术方案中，所述健康人为患者的五代以内直系亲属。
[0027]本专利技术的另一目的在于提供一种安全有效的免疫细胞组合物的制备方法，所述组合物由(1
‑
10)
×
107个/ml的免疫细胞、0.5
‑
2％的人血白蛋白和生理盐水组成，其中，所述免疫细胞由第一同种异体免疫细胞和第二同种异体免疫细胞用生理盐水制成密度为(1
‑
10)
×
107个/ml后，按照第一同种异体免疫细胞：第二同种异体免疫细胞的体积比为1:1
‑
2配置，所述免疫细胞活率≥95％，将所需量的第一同种异体免疫细胞和第二同种异体免疫细胞、人血白蛋白与生理盐水均匀混合，即得。
[0028]本专利技术的优选技术方案中，所述组合物由(2
‑
8)
×
107个/ml的免疫细胞、1
‑
1.5％人血白蛋白浓度和注射用生理盐水组成，其中，免疫细胞活率≥98％。
[0029]本专利技术的优选技术方案中，所述第一同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：
[0030](1)用肿瘤患者血浆浸润培养瓶后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下静置4h
‑
5h，制得肿瘤患者血浆包被的培养瓶；
[0031](2)在肿瘤患者血浆包被的培养瓶中加入健康人PBMC和无血清培养基，将其制成密度为(1
‑
5)
×
106个/ml的细胞培养液后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h，其中，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合；
[0032](3)每间隔24
‑
72h，按照培养体系中的无血清培养基与肿瘤患者血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中间歇补充所需量的无血清培养基和肿瘤患者血浆，离心，收集CD
3+
≥40％、CD
56+
≥60％的免疫细胞，即得，其中，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合。
[0033]本专利技术的优选技术方案中，所述第二同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：
[0034](1)将健康人PBMC按照密度为(0.2
‑
1.6)
×
106个/ml与淋巴细胞活化剂置于无血清培养基中，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h，其中，所述淋巴细胞活化剂选自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种安全有效的免疫细胞组合物，所述组合物由(1
‑
10)
×
107个/ml的免疫细胞、0.5
‑
2％的人血白蛋白和生理盐水组成，其中，所述免疫细胞由第一同种异体免疫细胞和第二同种异体免疫细胞用生理盐水制成密度为(1
‑
10)
×
107个/ml后，按照第一同种异体免疫细胞：第二同种异体免疫细胞的体积比为1:1
‑
2配置，所述免疫细胞活率≥95％。2.如权利要求1所述的组合物，所述组合物由(2
‑
8)
×
107个/ml的免疫细胞、1
‑
1.5％人血白蛋白浓度和注射用生理盐水组成，其中，免疫细胞活率≥98％。3.如权利要求1
‑
2任一项所述的组合物，所述第一同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：(1)用肿瘤患者血浆浸润培养瓶后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下静置4h
‑
5h，制得肿瘤患者血浆包被的培养瓶；(2)在肿瘤患者血浆包被的培养瓶中加入健康人PBMC和无血清培养基，将其制成密度为(1
‑
5)
×
106个/ml的细胞培养液后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h，其中，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551 H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合；(3)每间隔24
‑
72h，按照培养体系中的无血清培养基与肿瘤患者血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中间歇补充所需量的无血清培养基和肿瘤患者血浆，离心，收集CD
3+
≥40％、CD
56+
≥60％的免疫细胞，即得，其中，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的组合物，所述第二同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：(1)将健康人PBMC按照密度为(0.2
‑
1.6)
×
106个/ml与淋巴细胞活化剂置于无血清培养基中，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h，其中，所述淋巴细胞活化剂选自抗人CD2抗体、抗人CD3抗体、抗人CD28抗体、植物血凝素(PHA)的任一种或其组合或将其固化在载体上的含抗体载体，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551 H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合；(2)按照培养体系：健康人血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中补充所需量的无血清培养基和健康人血浆，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h；(3)每间隔24h
‑
72h，按照培养体系：肿瘤患者血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中间歇补充所需量的无血清培养基和肿瘤患者血浆，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养，离心，收集CD
3+
≥40％、CD
56+
≥60％的免疫细胞，即得。5.一种安全有效的免疫细胞组合物的制备方法，所述组合物由(1
‑
10)
×
107个/ml的免疫细胞、0.5
‑
2％的人血白蛋白和生理盐水组成，其中，所述免疫细胞由第一同种异体免疫细胞和第二同种异体免疫细胞用生理盐水制成密度为(1
‑
10)
×
107个/ml后，按照第一同种异体免疫细胞：第二同种异体免疫细胞的体积比为1:1
‑
2配置，所述免疫细胞活率≥95％，将所需量的第一同种异体免疫细胞和第二同种异体免疫细胞、人血白蛋白与生理盐水均匀混合，即得。6.如权利要求5所述的制备方法，所述第一同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：
(1)用肿瘤患者血浆浸润培养瓶后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下静置4h
‑
5h，制得肿瘤患者血浆包被的培养瓶；(2)在肿瘤患者血浆包被的培养瓶中加入健康人PBMC和无血清培养基，将其制成密度为(1
‑
5)
×
106个/ml的细胞培养液后，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h，其中，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551 H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合；(3)每间隔24
‑
72h，按照培养体系中的无血清培养基与肿瘤患者血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中间歇补充所需量的无血清培养基和肿瘤患者血浆，离心，收集CD
3+
≥40％、CD
56+
≥60％的免疫细胞，即得，其中，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合。7.如权利要求5
‑
6任一项所述的制备方法，所述第二同种异体免疫细胞的制备包括下述步骤：(1)将健康人PBMC按照密度为(0.2
‑
1.6)
×
106个/ml与淋巴细胞活化剂置于无血清培养基中，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h，其中，所述淋巴细胞活化剂选自抗人CD2抗体、抗人CD3抗体、抗人CD28抗体、植物血凝素(PHA)的任一种或其组合或将其固化在载体上的含抗体载体，所述无血清培养基选自KBM 581、GT
‑
T551 H3、X
‑
VIVO15、IMSF100的任一种或其组合；(2)按照培养体系：健康人血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中补充所需量的无血清培养基和健康人血浆，再将其置于37.0℃
±
1.0℃、7.5％
±
1.0％CO2条件下培养24h
‑
48h；(3)每间隔24h
‑
72h，按照培养体系：肿瘤患者血浆的体积比为100
‑
200：1，向培养体系中间歇...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宇，高文勇，陈琳，李建军，王利，
申请(专利权)人：北京达尔文细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：