一种紫色杆菌素pH敏感脂质体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及纳米材料应用领域，提供了一种紫色杆菌素pH敏感脂质体，包括包裹材料脂质体以及包裹于所述脂质体内的紫色杆菌素；其中，所述脂质体由磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂和胆固醇制备而成。本发明专利技术还提供了一种上述紫色杆菌素pH敏感脂质体的制备方法与应用。本发明专利技术通过制备pH敏感脂质体包裹紫色杆菌素，增加紫色杆菌素在水中的分散性，增加紫色杆菌素作为药剂使用的应用前景；同时，本发明专利技术提供的紫色杆菌素pH敏感脂质体，制备方法简单，容易实施，能够有效提高紫色杆菌素稳定性，增强了其抑菌及抗肿瘤作用。抑菌及抗肿瘤作用。抑菌及抗肿瘤作用。

【技术实现步骤摘要】
一种紫色杆菌素pH敏感脂质体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及纳米材料应用领域，尤其涉及一种紫色杆菌素pH敏感脂质体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]紫色杆菌素是微生物以色氨酸分子为前体物质氧化缩合得到的一种非水溶性次级代谢产物，其不仅可用做染色剂，还具有多种生物活性：(1)对白血病、淋巴瘤细胞和结肠癌细胞等具有很强的抑制效果；通过增加线粒体的膜电位使MRC
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5细胞(人胚肺成纤维细胞)和HeLa细胞(子宫颈癌细胞的细胞系)凋亡；(2)能够抑制细菌和真菌的生长，对芽孢杆菌(Bacillus sp.)、金黄色葡萄球菌(Staploylococcous aureus)、分枝杆菌(Mycobacterium)及链球菌(Streptococcussp.)等革兰氏阳性菌有明显的抗菌活性。基于上述特性，紫色杆菌素在食品、生物医药、印染工业等领域具有广阔的应用前景。但由于色杆菌素是一种非水溶性物质，当后续用于生物医药领域作为药剂使用时，这一特性将大大抑制其发展。
[0003]脂质体是球形的小囊泡，其可以由胆固醇、鞘脂、糖脂或长链脂肪酸甚至膜蛋白等制成。当脂质体分散在水中时，磷脂双分子层会自发形成封闭的结构，内部含水环境受到磷脂双分子层膜的限制。据此，若能将脂质体作为载体，将紫色杆菌素包裹于其内，将进一步提高色杆菌素在水中的分散性，解决其作为非水溶性物质不溶于水的难题。
[0004]同时，结合紫色杆菌素的抗肿瘤功效，可进一步选择具有pH敏感的类脂材料来合成pH敏感脂质体。由于肿瘤间质的pH比正常组织细胞低，可设计一种pH敏感脂质体，使其在pH降低的肿瘤环境中，更好地与膜融合释放药物，进而增加其靶向性。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种紫色杆菌素pH敏感脂质体及其制备方法与应用，通过制备新型pH敏感脂质体包裹紫色杆菌素，从而增加紫色杆菌素在水中的分散性，同时设计pH敏感材料在弱酸环境下释放内部的生物活性物质，为抗肿瘤药物研发提供新思路。
[0006]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0007]一种紫色杆菌素pH敏感脂质体，包括脂质体以及包裹于所述脂质体内的紫色杆菌素；其中，所述脂质体由磷脂酰乙醇胺(PE)、胆固醇琥珀酸单脂(CHEMS)和胆固醇(CHOL)制备而成。
[0008]作为本专利技术的优选方式之一，所述脂质体的组成成分中：
[0009]磷脂酰乙醇胺为pH敏感材料，pKa为5.0～6.0；当pH值偏向酸性时，磷脂酰乙醇胺发挥其pH敏感作用；
[0010]胆固醇琥珀酸单脂用作乳化剂和脂质体载体材料；
[0011]胆固醇在脂质体中起到生物膜材料。
[0012]作为本专利技术的优选方式之一，所述脂质体的组成成分中：磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂和胆固醇的质量比为(6～8)：(2～4)：(1～2)。
[0013]作为本专利技术的优选方式之一，所述紫色杆菌素作为被包裹的生物活性成分，其添加量为磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂和胆固醇三者总质量的2％～5％。
[0014]一种如权利要求1～4任一所述的紫色杆菌素pH敏感脂质体的制备方法，包括如下步骤：
[0015](1)称取紫色杆菌素溶于氯仿中，至完全溶解；
[0016](2)分别取磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂、胆固醇溶于步骤(1)获得的溶液中；
[0017](3)将步骤(2)获得的混合液置于真空旋转蒸发仪去除有机溶剂，直至在瓶壁上形成透明薄膜；
[0018](4)放置于真空干燥箱中一定时间，去除残留有机溶剂；
[0019](5)加入缓存溶液，在常温下水化至所述透明薄膜能脱落；接着，使用探针超声15～30min，即得目标所需的紫色杆菌素pH敏感脂质体。
[0020]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，紫色杆菌素直接购买获得，称取量为0.9～3.5mg，溶解紫色杆菌素的氯仿体积为5～8mL。
[0021]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)中，磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂、胆固醇的加入量分别是30～40mg、10～20mg、5～10mg。
[0022]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(3)中，真空旋蒸仪的温度为30～45℃；
[0023]所述步骤(4)中，真空干燥箱的温度在30～45℃，放置时间为8～15h。
[0024]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(5)中，缓存溶液为超纯水，加入量为5～10mL。
[0025]一种如权利要求1～4任一所述的紫色杆菌素pH敏感脂质体的应用，将所述紫色杆菌素pH敏感脂质体用于HeLa宫颈癌治疗。
[0026]本专利技术相比现有技术的优点在于：
[0027](1)针对紫色杆菌素作为脂溶性物质不溶于水的问题，本专利技术通过制备新型pH敏感脂质体包裹紫色杆菌素，增加紫色杆菌素在水中的分散性，增加紫色杆菌素作为药剂使用的应用前景；其中，pH敏感脂质体可以促进膜不透性分子的细胞溶质释放，当与靶向配体组合时，该性质可以促进受体介导的内吞作用，用于靶向细胞溶质递送生物活性物质；
[0028](2)本专利技术选择胆固醇琥珀酸单脂为pH敏感材料，当pH值偏向酸性时才会发挥其pH敏感作用，使包裹材料特异性释放里面的紫色杆菌素，从而起到紫色杆菌素抗肿瘤的功能，发挥抗肿瘤作用；为基于抗肿瘤药物脂质体的研发提供新的研究思路；
[0029](3)磷脂酰乙醇胺在药剂中主要用作乳化剂和脂质体载体材料，由于紫色杆菌素包裹在内，不仅解决了紫色杆菌素见光易分解的问题，显著提高该脂质体的稳定性，而且生物利用度极高，可延缓脂质体的释放性能，进一步提高复合脂质体的应用性能；
[0030](4)本专利技术制备的紫色杆菌素pH敏感脂质体，大小均匀，且制备方法简单，易操作，绿色环保。
附图说明
[0031]图1是试验例1中紫色杆菌素的扫描电镜图；
[0032]图2是试验例1中紫色杆菌素pH敏感脂质体的透射电镜图；
[0033]图3是试验例2中紫色杆菌素和紫色杆菌素pH敏感脂质体的紫外吸收图谱结果(图中，violacein表示紫色杆菌素，violacein
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Lip表示紫色杆菌素pH敏感脂质体)；
[0034]图4是试验例2中紫色杆菌素和紫色杆菌素pH敏感脂质体的红外吸收图谱结果(图中，violacein表示紫色杆菌素，violacein
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Lip表示紫色杆菌素pH敏感脂质体)；
[0035]图5是试验例3中紫色杆菌素pH敏感脂质体的体外释放曲线；
[0036]图6是试验例4中不同浓度的紫色杆菌素对金黄葡萄球菌S.aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和四联球菌Micrococcus tetragenus的抑制结果；
[0037]图7是试验例4中不同浓度的紫色杆菌素脂质体溶液对金黄葡萄球菌S.aureus、枯草芽孢杆菌Baci本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种紫色杆菌素pH敏感脂质体，其特征在于，包括脂质体以及包裹于所述脂质体内的紫色杆菌素；其中，所述脂质体由磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂和胆固醇制备而成。2.根据权利要求1所述的紫色杆菌素pH敏感脂质体，其特征在于，所述脂质体的组成成分中：磷脂酰乙醇胺为pH敏感材料，pKa为5.0～6.0；胆固醇琥珀酸单脂为乳化剂和脂质体载体材料；胆固醇为生物膜材料。3.根据权利要求1所述的紫色杆菌素pH敏感脂质体，其特征在于，所述脂质体的组成成分中：磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂和胆固醇的质量比为(6～8)：(2～4)：(1～2)。4.根据权利要求1所述的紫色杆菌素pH敏感脂质体，其特征在于，所述紫色杆菌素作为被包裹的生物活性成分，其添加量为磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂和胆固醇三者总质量的2％～5％。5.一种如权利要求1～4任一所述的紫色杆菌素pH敏感脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)称取紫色杆菌素溶于氯仿中，至完全溶解；(2)分别取磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸单脂、胆固醇溶于步骤(1)获得的溶液中；(3)将步骤(2)获得的混合液置于真空旋转蒸发仪去除有机溶剂，直至在瓶壁上形成透明薄膜；...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨恩东，钱海萍，祁莹莹，徐莉，刘静，汪泽坤，孙冬冬，汪维云，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：