一种载抗生素微生物囊泡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种载抗生素微生物囊泡及其制备方法和应用。所述载抗生素微生物囊泡包括表皮葡萄球菌胞外囊泡和包裹在所述表皮葡萄球菌胞外囊泡内腔中的抗生素。本发明专利技术所述载抗生素微生物囊泡以表皮葡萄球菌胞外囊泡为载体，其与皮肤共生且具有纳米属性且可以作为营养物质促进细菌生长，以增加细菌的摄取，防止载抗生素微生物囊泡产生耐药性，进而能够以低剂量杀死细菌，在与抗生素结合后，可以达到有效杀菌和促进皮肤伤口愈合的技术效果。伤口愈合的技术效果。伤口愈合的技术效果。

【技术实现步骤摘要】
一种载抗生素微生物囊泡及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种载抗生素微生物囊泡及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]细菌能释放出直径为20
‑
400nm的纳米级胞外囊泡，其携带多种生物成分，包括脂多糖、肽聚糖、细胞膜、周质、胞浆蛋白、毒素和核酸等。细菌胞外囊泡影响了多种生物过程，包括毒力、水平基因转移、噬菌体感染、细胞代谢物运输以及细菌
‑
细菌或细菌
‑
宿主相互作用。就药物输送而言，细菌胞外囊泡与人工合成纳米载体脂质体类似，两者都包含生物相容性的脂质双分子层。脂质的纳米载体为药物包封提供了一个多功能平台，这使得多种药物配方得以临床转化。类似地，细菌胞外囊泡可以将各种生物活性分子运输到受体细胞，从而改变这些细胞的生理状态。值得注意的是，由于其载药能力、免疫刺激能力、易修饰性和良好的细胞间相互作用，细菌来源的胞外囊泡具有成为新型药物传递平台的巨大潜力。
[0003]近几十年来，本领域对革兰氏阴性菌胞外囊泡的研究有了长足的发展；然而，关于革兰氏阳性菌胞外囊泡的研究很少。研究者对革兰氏阳性菌胞外囊泡缺乏兴趣的主要原因是其厚细胞壁阻挡了胞外囊泡释放。直到在2009年，Lee等人首次提供了革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌可以自然产生细胞外囊泡的确凿证据。值得注意的是，革兰氏阳性菌胞外囊泡并不含有革兰氏阴性菌胞外囊泡中特有的内毒素，这使其更适合作为进行有效细胞间相互作用的药物递送载体。
[0004]创面感染是患者伤口难以愈合的重要因素。抗菌药物作为临床治疗感染性疾病的首选方式，对改善患者的病情具有非常积极的作用。现有研究中也存在将抗生素与微生物胞外囊泡结合载药的案例，杨逸等指出“抗生素治疗不但破坏人体正常菌群导致菌群失调，同时可能会引起大量囊泡的产生引起慢性炎症反应”(抗生素诱导革兰氏阴性菌外膜囊泡产生及发挥生理作用的机制[J].微生物与感染,2022,17(2):94
‑
101)，但是大多均会使皮肤产生炎症，使得微生物耐药增加，无法达到有效抗菌的作用，增加了创面修复的难度。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的提供了一种载抗生素微生物囊泡，所述载抗生素微生物囊泡可以有效杀死各类致病菌，防止细菌耐药性增加且能够促进皮肤创面的愈合。
[0006]本专利技术提供了一种载抗生素微生物囊泡，所述载抗生素微生物囊泡包括表皮葡萄球菌胞外囊泡和包裹在所述表皮葡萄球菌胞外囊泡内腔中的抗生素。
[0007]优选的，所述抗生素包括喹诺酮类抗生素或大环内酯类抗生素。
[0008]本专利技术还提供上述技术方案所述的载抗生素微生物囊泡的制备方法，包括：通过冻融法将表皮葡萄球菌胞外囊泡和抗生素进行结合，得到所述载抗生素微生物囊泡。
[0009]优选的，所述表皮葡萄球菌胞外囊泡以表皮葡萄球菌胞外囊泡悬浮液的形式使用，所述表皮葡萄球菌胞外囊泡在所述表皮葡萄球菌胞外囊泡悬浮液中的颗粒数含量为
2.33
×
10
11
～10.37
×
10
11
颗粒/mL。
[0010]优选的，所述抗生素以抗生素水溶液的形式使用，所述抗生素水溶液的浓度为1/8MIC～饱和浓度。
[0011]优选的，所述表皮葡萄球菌胞外囊泡悬浮液和所述抗生素水溶液的体积比为1：1。
[0012]优选的，所述冻融法包括：将表皮葡萄球菌胞外囊泡和抗生素混合进行冻融处理，所述冻融处理的程序为：
‑
196℃或
‑
80℃冷冻5～30min后，
‑
8～0℃冷藏20～40min，再于37～75℃解冻5～20min；循环反复2～5次。
[0013]本专利技术还提供了上述技术方案所述的载抗生素微生物囊泡或上述技术方案所述的载抗生素微生物囊泡在制备抗菌和/或促进伤口愈合的药物中的应用。
[0014]本专利技术还提供了一种抗菌和/或促进伤口愈合的药物，所述药物包括载抗生素微生物囊泡和辅料；
[0015]所述载抗生素微生物囊泡为上述技术方案所述的载抗生素微生物囊泡或上述技术方案所述的制备方法制备得到的载抗生素微生物囊泡。
[0016]优选的，以表皮葡萄球菌胞外囊泡的颗粒浓度计，所述药物中所述载抗生素微生物囊泡的有效剂量至少为9.92
×
109颗粒/mL。
[0017]有益效果：
[0018]本专利技术提供了一种载抗生素微生物囊泡，所述载抗生素微生物囊泡包括表皮葡萄球菌胞外囊泡和包裹在所述表皮葡萄球菌胞外囊泡内腔中的抗生素。本专利技术所述载抗生素微生物囊泡以表皮葡萄球菌胞外囊泡为载体，其与皮肤共生且具有纳米属性且可以作为营养物质促进细菌生长，以增加细菌的摄取，防止载抗生素微生物囊泡产生耐药性，进而能够以低剂量杀死细菌，在与抗生素结合后，可以达到有效杀菌和促进皮肤伤口愈合的技术效果。
[0019]同时，本专利技术还提供了所述载抗生素微生物囊泡的制备方法，所述制备方法以冻融法将表皮葡萄菌胞外囊泡与抗生素结合制备载抗生素微生物囊泡，载药量高且操作简单，易于应用和生产。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0021]图1为实施例1中SE
‑
EVs纳米粒子跟踪分析图；
[0022]图2为实施例2中SE
‑
EVs对HaCaT细胞无炎症作用；
[0023]图3为实施例3中Lev@SE
‑
EVs的透射电镜图；
[0024]图4为实施例4和实施例6中Lev@SE
‑
EVs和Cal@SE
‑
EVs的平均粒径图；
[0025]图5为实施例4和实施例6中Lev@SE
‑
EVs和Cal@SE
‑
EVs的电位图；
[0026]图6为实施例4和实施例6中Lev@SE
‑
EVs和Cal@SE
‑
EVs的SDS
‑
PAGE电泳图；
[0027]图7为实施例4中Lev浓度
‑
吸光度标准曲线图；
[0028]图8为实施例5中Cal@SE
‑
EVs透射电镜图；
[0029]图9为应用例1中霍乱弧菌化学发光图；
[0030]图10为应用例1中Lev@SE
‑
EVs抑制霍乱弧菌化学发光结果；
[0031]图11为应用例1中不同颗粒浓度Lev@SE
‑
EVs与金黄色葡萄球菌共培养的剂量响应曲线；
[0032]图12为应用例2中分别以无菌SE
‑
EVs溶液、Lev溶液和Lev@SE
‑
EVs处理小鼠感染伤口后的愈合效果；
[0033]图13为应用例2中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种载抗生素微生物囊泡，其特征在于，所述载抗生素微生物囊泡包括表皮葡萄球菌胞外囊泡和包裹在所述表皮葡萄球菌胞外囊泡内腔中的抗生素。2.根据权利要求1所述的载抗生素微生物囊泡，其特征在于，所述抗生素包括喹诺酮类抗生素或大环内酯类抗生素。3.权利要求1或2所述的载抗生素微生物囊泡的制备方法，其特征在于，包括：通过冻融法将表皮葡萄球菌胞外囊泡和抗生素进行结合，得到所述载抗生素微生物囊泡。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述表皮葡萄球菌胞外囊泡以表皮葡萄球菌胞外囊泡悬浮液的形式使用，所述表皮葡萄球菌胞外囊泡在所述表皮葡萄球菌胞外囊泡悬浮液中的颗粒数含量为2.33
×
10
11
～10.37
×
10
11
颗粒/mL。5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述抗生素以抗生素水溶液的形式使用，所述抗生素水溶液的浓度为1/8MIC～饱和浓度。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述表皮葡萄球菌胞外囊泡...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘卫，周洪，罗丹，洪延涵，张明浩，洪娟，
申请(专利权)人：武汉百思凯瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：