动物细胞培养方法技术

本发明专利技术公开了一种动物细胞培养方法，该方法包括：利用复合培养基对所述动物细胞进行第一培养，其中，所述复合培养基为包括ExpiCHO

【技术实现步骤摘要】
动物细胞培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地，涉及动物细胞培养方法。

技术介绍

[0002]动物细胞培养技术是当今生物工程领域中的前沿技术之一，无论是在研究还是在生产实践方面都对当代生物技术有着重要的影响。虽然目前市售的商业化培养基已具有非常好的广谱性，但是却缺少针对性，并且培养成本高。
[0003]由此，用于动物细胞的培养方法有待研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种动物细胞培养方法，细胞生长速度快，产物表达量，底物的转化率，原料成本低。
[0005]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种动物细胞培养方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：利用复合培养基对所述动物细胞进行第一培养，其中，所述复合培养基为包括ExpiCHO
TM
表达培养基和Dynamis
TM AGT
TM
培养基；以及在所述第一培养后，利用培养添加剂定期进行补料，进行第二培养。
[0006]根据本专利技术实施例的动物细胞培养方法，利用复合培养基进行培养，降低了细胞培养成本，培养基的来源更充分，利于扩增产能；并且，该培养方法，细胞生长速度快，产物表达量，发酵周期短，底物的转化率高。
[0007]另外，根据本专利技术上述实施例的动物细胞培养方法还可以具有如下附加的技术特征：
[0008]根据本专利技术的实施例，所述ExpiCHO
TM
表达培养基和Dynamis
TM AGT
TM
培养基的体积比为1∶0.8
‑
1.2。
[0009]根据本专利技术的实施例，所述培养添加剂包括Sheff
‑
CHO PF Plus ACF添加剂、Cell Boost
TM 7a添加剂和Cell Boost
TM 7b添加剂。由此，细胞培养的成本低，补料的来源更充分，同时能够让细胞更优的表达。根据本专利技术的实施例，第一次进行所述补料，所述培养添加剂包括2％所述Sheff
‑
CHO PF Plus ACF添加剂、3％所述Cell Boost
TM 7a添加剂添加剂和0.5％所述Cell Boost
TM 7b添加剂；后续进行所述补料，所述培养添加剂包括2％所述Sheff
‑
CHO PF Plus ACF添加剂、5％所述Cell Boost
TM 7a添加剂和1％所述Cell Boost
TM 7b。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述定期进行补料为隔天进行所述补料。
[0011]根据本专利技术的实施例，第一次所述补料在所述第一培养开始后的18
‑
22小时。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述第一培养的条件为37℃，溶氧为8％CO2。由此，培养环境适宜，细胞的生长速度快。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述第二培养的温度为表达温度，溶氧为5％CO2。由此，培
养条件适宜，细胞的表达量高。
[0014]根据本专利技术的实施例，表达温度为30
‑
32℃，优选地，为32℃。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述动物细胞为重组哺乳动物细胞。
[0016]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
具体实施方式
[0017]下面详细描述本专利技术的实施例，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。
[0018]需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本专利技术的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
[0019]下面参考具体实施例，对本专利技术进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0020]下面将结合实施例对本专利技术的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。
[0021]实施例1
[0022]利用本专利技术实施例的动物细胞培养方法对ExpiCHO
‑
S
TM
细胞(Cat#A37785)进行培养，具体如下：
[0023]将细胞培养至密度达到6
×
106cells/ml时进行转染，在37℃，8％CO2环境中培养18
‑
22h后，按照表1中的补料信息进行补料，此时记为Day1，补料完毕后降温至对应的表达温度，溶氧为5％CO2；第7组按照ExpiCHO
TM
表达系统进行补料(Day1和Day5)；其余组别均隔天进行补料，并进行密度，细胞活率和表达量检测。
[0024]表1不同培养基和补料分组
[0025][0026][0027]实验结果如表2所示，第1组的表达量最高，即50％(ExpiCHO
TM
表达培养基)+50％(Dynamis
TM AGT
TM Medium)的培养基组合，以及Sheff
‑
CHO PF Plus ACF(PPA)+Cell Boost
TM 7a and 7b的补料组合，可以获得较理想的产物表达量。
[0028]表2转染后细胞培养情况及表达量结果汇总表
[0029][0030]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本专利技术的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0031]尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本专利技术的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由权利要求及其等同物限定。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物细胞培养方法，其特征在于，包括：利用复合培养基对所述动物细胞进行第一培养，其中，所述复合培养基为包括ExpiCHO
TM
表达培养基和Dynamis
TM AGT
TM
培养基；以及在所述第一培养后，利用培养添加剂定期进行补料，进行第二培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ExpiCHO
TM
表达培养基和Dynamis
TM
AGT
TM
培养基的体积比为1∶0.8
‑
1.2。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养添加剂包括Sheff
‑
CHO PF Plus ACF添加剂、Cell Boost
TM 7a添加剂和Cell Boost
TM
7b添加剂。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一次进行所述补料，所述培养添加剂包括2％所述Sheff
‑
CHO PF Pl...

【专利技术属性】
技术研发人员：施磊，方鹏，游猛，曹雨霞，冯庆君，朱晓红，孙小伟，
申请(专利权)人：江苏迈威康新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：