鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法技术

本发明专利技术公开了一种鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法，该方法通过CEX

【技术实现步骤摘要】
鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法


[0001]本专利技术人涉及分析化学领域，具体地，涉及鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法。

技术介绍

[0002]基于IgG的生物疗法是人类疗法中发展最快的一类。虽然IgG1亚类是最普遍的，但IgG2和IgG4亚类约占临床研究中所有分子的20％。在结构上，IgG是由两条重链(HC)和两条轻链(LC)组成的四聚糖蛋白，通过链间二硫键桥接(4条用于IgG1和IgG4；6条用于IgG2)。四个IgG亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的保守氨基酸序列、核心铰链区的长度以及，以及链间二硫键的数目和构型。HC和LC通过一个二硫键连接，HCs通过位于铰链区域的两个(对于IgG1和IgG4)或四个(对于IgG2)二硫键连接。链间二硫键构型和非共价域间相互作用调节每个IgG亚类的结构。使用标准大规模生物处理条件生产的IgG2单克隆抗体由三种共纯化链间二硫化物异构体的混合物组成，即A、A/B和B，在抗体的存储过程中，这些异构体的比例可能发生变化。由此，检测抗体异质性组分的方法有待研究。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法，该方法准确度高，灵敏性好。
[0004]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：将待测IgG2型抗体溶液分为二份，其中一份进行CEX
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HPLC检测，得到第一图谱，另一份高温20天后进行所述CEX
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HPLC检测，得到第二图谱；对所述第一图谱和所述第二图谱进行比对，基于是否差异色谱峰，确定二份所述待测IgG2型抗体溶液是否存在差异，参考图1，根据本专利技术的实施例，高温20天后，检测到新增未知杂质；利用CEX
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HPLC分别富集存在差异的组分，以便得到富集后的差异组分；对所述富集后的差异组分进行RP
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HPLC分析检测，以便得到富集组分的二硫键异构体类型；以及将所述富集后的差异组分进行理化分析和生物学活性分析，以便获得差异成分的理化和生物学活性。
[0005]根据本专利技术实施例的鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法，通过CEX
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HPLC检测，对IgG2型抗体未知电荷异质性组分进行分离和富集，通过RP
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HPLC分析检测未知电荷异质性组分的二硫键异构体类型，以及进行理化和生物活性分析，基于理化和生物活性数据可以对差异成分的成因和活性等进行鉴定。
[0006]另外，根据本专利技术上述实施例的鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法，还可以具有如下附加的技术特征：
[0007]根据本专利技术的实施例，所述CEX
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HPLC检测的检测条件为：高效液相色谱仪：Waters Acquity Arc；色谱柱：ProPac
TM Elite WCX
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10，规格为5μm，4*150mm；流速：0.6ml/min；检测波长：215nm。由此，能有效分离IgG2抗体的异构体。
[0008]根据本专利技术的实施例，所述CEX
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HPLC检测的流动相：A相：20mM磷酸二氢钠溶液，pH7.5，B相：20mM磷酸二氢钠溶液，0.5M NaCl，pH7.5，且洗脱条件为线性洗脱。
[0009]根据本专利技术的实施例，所述RP
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HPLC分析检测的检测条件为：高效液相色谱仪：Waters Acquity Arc；色谱柱：BioResolve RP mAb polyphenyl，2.7μm，2.1*150mm；流速：0.5ml/min；检测波长：280nm。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述RP
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HPLC分析检测的流动相：A相：含0.1体积％TFA的H2O，B相：含有0.1体积％TFA的异丙醇和乙腈混合溶液，其中，所述异丙醇和乙腈的体积比为80∶20，且洗脱条件为线性洗脱。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述理化分析包括脱糖完整分子量检测、分子大小异质性检测和二硫键异构体检测。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述分子大小异质性检测包括分子排阻高效液相色谱(SEC
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HPLC)和非还原毛细管电泳。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述IgG2型抗体的轻链CDR具有与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3至少80％一致性的氨基酸序列，重链CDR具有与SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6至少80％一致性的氨基酸序列。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述IgG2型抗体的轻链具有与SEQ ID NO：7至少80％一致性的氨基酸序列，重链具有与SEQ ID NO：8至少80％一致性的氨基酸序列。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述高温样品富集的条件为：高效液相色谱仪：Waters Acquity Arc；色谱柱：ProPac
TM WCX 5μm(4*150mm)流动相：A相：20mM磷酸二氢钠溶液，pH7.5，B相：20mM磷酸二氢钠溶液，0.5M NaCl，pH7.5，且洗脱条件为线性洗脱。
[0016]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0017]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0018]图1显示了根据本专利技术一个实施例的CEX
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HPLC分离IgG2型抗体未知电荷异构体组分图谱示意图；
[0019]图2显示了根据本专利技术一个实施例的0点、高温20天富集组分CEX
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HPLC纯度图谱示意图；
[0020]图3显示了根据本专利技术一个实施例的RP
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HPLC与高分辨率质谱肽图结合鉴定各组分二硫键异构体类型示意图；
[0021]图4显示了根据本专利技术一个实施例的抗体成品0点、高温20天富集组分与抗体成品二硫键异构体纯度图谱。
具体实施方式
[0022]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0023]在本专利技术的描述中，术语“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术而不是要求本专利技术必须以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。
[0024]需要说本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定IgG2型抗体未知电荷异质性组分的方法，其特征在于，包括：将待测IgG2型抗体溶液分为二份，其中一份进行CEX
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HPLC检测，得到第一图谱，另一份高温处理20天后进行所述CEX
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HPLC检测，得到第二图谱；对所述第一图谱和所述第二图谱进行比对，基于是否差异色谱峰，确定二份所述待测IgG2型抗体溶液是否存在差异；利用CEX
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HPLC分别富集存在差异的组分，以便得到富集后的差异组分；对所述富集后的差异组分进行RP
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HPLC分析检测，以便得到富集组分的二硫键异构体类型；以及将所述富集后的差异组分进行理化分析和生物学活性分析，以便获得差异成分的理化和生物学活性。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CEX
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HPLC检测的检测条件为：高效液相色谱仪：Waters Acquity Arc；色谱柱：ProPac
TM Elite WCX
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10，规格为5μm，4*150mm；流速：0.6ml/min；检测波长：215nm。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述CEX
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HPLC检测的流动相：A相：20mM磷酸二氢钠溶液，pH7.5，B相：20mM磷酸二氢钠溶液，0.5M NaCl，pH7.5，且洗脱条件为线性洗脱。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RP
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HPLC分析检测的检测条件为：高效液相色谱仪：Waters Acquity Arc；色谱柱：BioResolve RP...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙小伟，方鹏，岳会亭，曹雨霞，
申请(专利权)人：江苏迈威康新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：