一种基于内源CRISPR-Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统及应用技术方案

本发明专利技术公开了一种基于内源CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统及应用


[0001]本专利技术属于基因工程和生物
，具体涉及一种基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统及应用。

技术介绍

[0002]越来越多的研究和临床实践证明乳酸菌及其菌剂具有良好的促进健康作用，在医药和健康领域具有广泛应用前景，但是乳酸菌相关菌株编辑研究开展缓慢，主要面临两个难题，一是乳酸菌菌株种类繁多，常规的乳酸菌筛选是一项耗时耗力的工作；二是随着越来越多乳酸菌基因组被测序，大量未知基因需要进行功能解析，传统的乳酸菌基因操作手段过程繁琐、效率低下，亟待开发快速高效的遗传操作工具。传统的乳酸菌基因操作手段多是基于基因同源重组原理开发的，比如基于染色体和质粒的同源重组方法即利用乳酸菌内源的同源重组系统、Red/RecET介导的双链DNA(dsDNA)重组即利用外源噬菌体辅助重组系统、单链DNA(ssDNA)重组和基于CRISPR
‑
Cas系统的基因编辑等。
[0003]最广泛使用的是经典的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统，其特征在于，包括：在穿梭质粒载体pTRKH2上插入mini
‑
CRISPR阵列表达框，所述mini
‑
CRISPR阵列表达框从5
’
到3
’
方向依次包括：启动子、带有两个Bsa1酶切位点的crRNA插入位点碱基序列、LpCas9 SgRNA Scaffold碱基序列和终止子。2.如权利要求1所述的基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统，其特征在于，所述带有两个Bsa1酶切位点的crRNA插入位点碱基序列来自靶标位点，为基因组上任意PAM序列的5
’
端上游紧邻的一段20bp的碱基序列。3.如权利要求1所述的基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统，其特征在于，所述LpCas9 SgRNA Scaffold碱基序列如SEQ ID NO:2所示，所述启动子为副干酪乳杆菌源的乳酸脱氢酶启动子，其碱基序列如SEQ ID NO:3所示，所述终止子为非ρ因子依赖性终止子TTTTTT。4.如权利要求1所述的基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统，其特征在于，所述穿梭质粒载体pTRKH2上还负载有氨苄青霉素基因序列和其启动子，碱基序列如SEQ ID NO:4所示。5.如权利要求1所述的基于内源CRISPR
‑
Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统，其特征在于，所述穿梭质粒载体pTRKH2上还负载有根据靶标位点的上下游分别设计的上游同源修复模板和下游同源修复模板。6.基于内源CRISPR
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Cas系统的副干酪乳杆菌基因编辑系统的应用，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、找出副干酪乳杆菌基因组上的靶标位点附近的PAM序列，选择PAM序列的5
’
端上游紧邻的一段20bp的碱基序列做SgRNA，步骤二、将步骤一所述的SgRN...

【专利技术属性】
技术研发人员：逄晓阳，朱青，吕加平，张书文，徐琛，王筠钠，谢宁，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：