免疫刺激细菌递送平台及其用于递送治疗产物的用途制造技术

本发明专利技术提供了减毒的免疫刺激细菌，其基因组经过修饰以例如降低毒性和提高抗肿瘤活性，如通过增加在肿瘤微环境中、特别是在肿瘤驻留骨髓细胞中的积累、提高对补体失活的抗性、减少免疫细胞死亡、促进适应性免疫及增强T细胞功能进行。吞噬细胞定植的增加改良了编码的治疗产物向肿瘤微环境和肿瘤中的递送，并允许免疫刺激细菌的全身施用等途径。疫刺激细菌的全身施用等途径。疫刺激细菌的全身施用等途径。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫刺激细菌递送平台及其用于递送治疗产物的用途
[0001]相关申请
[0002]本申请要求于2020年3月16日提交的共同未决美国临时专利申请No.62/990,404的优先权权益，题目为“TUMOR
‑
SPECIFIC IMMUNOSTIMULATORY BACTERIA DELIVERY PLATFORM”，申请人是Actym Therapeutics,Inc.，以及专利技术人是Laura Hix Glickman、Christopher D.Thanos、Alexandre Charles Michel Iannello、Chris Rae和Haixing Kehoe。
[0003]本申请要求于2020年1月16日提交的共同未决美国临时专利申请No.62/962,162的优先权权益，题目为“TUMOR
‑
SPECIFIC IMMUNOSTIMULATORY BACTERIA DELIVERY PLATFORM”，申请人是Actym Therapeutics,Inc.，以及专利技术人是Laura Hix Glickman本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸构建体，其包含作为在单个启动子控制下的多顺反子序列的编码多种抗癌产物的核酸。2.权利要求1的构建体，其中所述多顺反子序列包含在编码每种产物的每个开放阅读框(ORF)之间的2A肽。3.权利要求1或2的构建体，其中所述抗癌产物是蛋白质。4.权利要求2或3的构建体，其中所述2A肽是T2A、P2A、E2A或F2A中的一种或多种。5.权利要求1至4任一项的构建体，其中所编码的产物是在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的一种或多种免疫刺激蛋白。6.权利要求5的构建体，其中在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白选自以下的一种或多种：IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12p70(IL
‑
12p40+IL
‑
12p35)、IL
‑
15、具有弱化的IL
‑
2Ra结合的IL
‑
2、IL
‑
15/IL
‑
15Rα链复合物、IL
‑
18、IL
‑
21、IL
‑
23、IL
‑
36γ、经修饰为不结合IL
‑
2Ra的IL
‑
2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、干扰素
‑
α、干扰素
‑
β、干扰素
‑
γ、CCL3、CCL4、CCL5、参与或实现或增强T细胞的募集和/或持续的蛋白质、CD40、CD40配体(CD40L)、CD28、OX40、OX40配体(OX40L)、4
‑
1BB、4
‑
1BB配体(4
‑
1BBL)、具有胞质结构域缺失或截短以消除免疫抑制反向信号传导的4
‑
1BBL、B7
‑
CD28家族的成员、CD47拮抗剂、抗
‑
IL6抗体或IL
‑
6结合诱饵受体、TGF
‑
β多肽拮抗剂以及肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员。7.权利要求5的构建体，其中在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白选自以下的一种或多种：IFN
‑
α、IFN
‑
β、GM
‑
CSF、IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
15、IL
‑
18、IL
‑
21、IL
‑
23、IL
‑
12p70(IL
‑
12p40+IL
‑
12p35)、IL
‑
15/IL
‑
15Rα链复合物、IL
‑
36γ、具有弱化的IL
‑
2Ra结合的IL
‑
2、经修饰为不与IL
‑
2Ra结合的IL
‑
2、CXCL9、CXCL10(IP
‑
10)、CXCL11、CCL3、CCL4、CCL5、参与T细胞潜在的募集和/或持续的分子、CD40、CD40配体(CD40L)、OX40、OX40配体(OX40L)、4
‑
1BB、4
‑
1BB配体(4
‑
1BBL)、具有缺失的胞质结构域(4
‑
1BBLΔcyt)或具有部分缺失的胞质结构域的4
‑
1BBL所述胞质结构域被缺失或截短以消除免疫抑制反向信号传导、B7
‑
CD28家族的成员及肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员。8.权利要求1至7任一项的构建体，其包含编码具有缺失或部分缺失的胞质结构域或部分缺失的胞质结构域和任选包括氨基酸修饰的4
‑
1BBL的核酸，由此所得4
‑
1BBL在细胞中表达时呈现正确方向。9.权利要求1至8任一项的构建体，其包含编码具有缺失或部分缺失的胞质结构域的4
‑
1BBL变体或具有截短的和经修饰的胞质结构域的经修饰的4
‑
1BBL的核酸，其中所述4
‑
1BBL的序列如SEQ ID NO:390、SEQ ID NO:391和SEQ ID NO:392所示。10.权利要求1至9任一项的构建体，其包含编码任何以下产物和产物组合的核酸：IL
‑
12、或IL
‑
15、或IL12p70、或IL
‑
15/IL
‑
15Rα链复合物中的一种或多种；细胞因子和干扰素基因刺激因子(STING)通路激动剂；细胞因子、STING通路激动剂及共刺激受体配体或免疫检查点抑制剂；细胞因子、STING通路激动剂及TGF
‑
β多肽拮抗剂；细胞因子、STING通路激动剂、TGF
‑
β多肽拮抗剂及共刺激受体配体或免疫检查点抑制剂，其中STING通路激动剂是通过激活STING通路增加I型干扰素表达的任何产物。11.权利要求1至10任一项的构建体，其包含编码干扰素基因刺激因子(STING)多肽的
核酸。12.权利要求1至11任一项的构建体，其包含编码选自以下组合的治疗产物组合的核酸：抗CTLA
‑
4抗体和STING多肽，IL
‑
15和STING多肽，4
‑
1BBL和STING多肽，TGF
‑
β受体诱饵或拮抗多肽，和STING多肽，IL
‑
12和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
15和STING多肽，TGF
‑
β受体诱饵或拮抗多肽、IL
‑
15和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
12和STING多肽，TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂、IL
‑
12和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
15、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
12、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12、IL
‑
15和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
12、IL
‑
15和STING多肽，TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂、IL
‑
12、IL
‑
15和STING多肽，TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂、IL
‑
12、IL
‑
15和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12、IL
‑
15、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
12、IL
‑
21、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12、IL
‑
15和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，4
‑
1BBL、IL
‑
12、IL
‑
21和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，IL
‑
12、IL
‑
15和STING多肽，IL
‑
15、IL
‑
21和STING多肽，IL
‑
12、IL
‑
21和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15、IL
‑
21和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12、IL
‑
21和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
15、IL
‑
21和STING多肽，4
‑
1BBL、IL
‑
12、IL
‑
21和STING多肽，抗CTLA
‑
4抗体和IL
‑
15，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，4
‑
1BBL和IL
‑
15，4
‑
1BBL、IL
‑
15和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，抗CTLA
‑
4抗体和IL
‑
12，抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，
4
‑
1BBL和IL
‑
12，4
‑
1BBL、IL
‑
12和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，抗CTLA
‑
4抗体和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，4
‑
1BBL和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，IL
‑
15和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，IL
‑
12和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，IL
‑
12、IL
‑
15和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，和IL
‑
15、IL
‑
21和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，其中：4
‑
1BBL是具有缺失的胞质结构域的4
‑
1BBL、具有经修饰的胞质结构域的4
‑
1BBL、具有截短的胞质结构域的4
‑
1BBL或具有截短的和经修饰的胞质结构域的4
‑
1BBL；抗
‑
CTLA
‑
4抗体是scFv或scFv
‑
Fc；和STING多肽是野生型STING或变体STING多肽或嵌合STING多肽或具有氨基酸置换的嵌合STING多肽。13.权利要求1至11任一项的构建体，其编码选自以下的治疗产物的组合：IL
‑
2和IL
‑
12p70；IL
‑
2和IL
‑
21；IL
‑
2、IL
‑
12p70和STING功能获得(GOF)变体；IL
‑
2、IL
‑
21和STING GOF变体；IL
‑
2、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)，其中Δcyt是缺失的胞质结构域；IL
‑
2、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；IL
‑
15/IL
‑
15Rα和STING GOF变体；IL
‑
15/IL
‑
15Rα、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
12p70；IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
21；IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70和STING GOF变体；IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21和STING GOF变体；IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；IL
‑
12p70和IL
‑
21；IL
‑
12p70、IL
‑
21和STING GOF变体；IL
‑
12p70、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；IL
‑
12p70和STING GOF变体；IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；IL
‑
12p70和IL
‑
18；IL
‑
12p70、IL
‑
18和STING GOF变体；IL
‑
12p70、IL
‑
18、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
2和IL
‑
12p70；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
2和IL
‑
21；
TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
2、IL
‑
12p70和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
2、IL
‑
21和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
2、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
2、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
12p70；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
21；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70和IL
‑
21；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70、IL
‑
21和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂，和IL
‑
12p70；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70和IL
‑
18；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70、IL
‑
18和STING GOF变体；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂、IL
‑
12p70、IL
‑
18、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；TGF
‑
β诱饵受体或TGF
‑
β多肽拮抗剂，和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
2和IL
‑
12p70；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
2和IL
‑
21；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
2、IL
‑
12p70和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
2、IL
‑
21和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
2、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
2、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
12p70；
抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
21；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70和IL
‑
21；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70、IL
‑
21和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体和IL
‑
12p70；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70和IL
‑
18；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70、IL
‑
18和STING GOF变体；抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
12p70、IL
‑
18、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；抗CTLA
‑
4抗体和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
2和IL
‑
12p70；CD40激动剂、IL
‑
2和IL
‑
21；CD40激动剂、IL
‑
2、IL
‑
12p70和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
2、IL
‑
21和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
2、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂、IL
‑
2、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
12p70；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα和IL
‑
21；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂、IL
‑
15/IL
‑
15Rα、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂、IL
‑
12p70和IL
‑
21；CD40激动剂、IL
‑
12p70、IL
‑
21和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
12p70、IL
‑
21、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂和IL
‑
12p70；CD40激动剂、IL
‑
12p70和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
12p70、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；CD40激动剂、IL
‑
12p70和IL
‑
18；CD40激动剂、IL
‑
12p70、IL
‑
18和STING GOF变体；CD40激动剂、IL
‑
12p70、IL
‑
18、STING GOF变体和4
‑
1BBL(包括4
‑
1BBLΔcyt)；和
CD40激动剂和STING GOF变体，其中：4
‑
1BBL是具有缺失的胞质结构域的4
‑
1BBL(4
‑
1BBLΔcyt)、具有经修饰的胞质结构域的4
‑
1BBL、具有截短的胞质结构域的4
‑
1BBL或具有截短的和经修饰的胞质结构域的4
‑
1BBL；及抗
‑
CTLA
‑
4抗体是scFv或scFv
‑
Fc。14.权利要求1至13任一项的构建体，其中：所述STING多肽经过修饰以导致I型干扰素(IFN)的表达增加或组成型表达，或者是一种嵌合多肽，包含来自不同物种的具有C末端尾区(CTT)的人STING多肽，其具有的NF
‑
κB信号传导活性低于人STING的NF
‑
κB信号传导活性，及其中：所述CTT中的TRAF6结合位点任选被缺失；和所述人STING蛋白具有SEQ ID NO:305
‑
309任一所示的序列。15.权利要求1至14任一项的构建体，其中所编码的治疗性蛋白质包含IL
‑
12p70和嵌合人STING多肽，所述嵌合人STING多肽具有来自袋獾的CTT和导致I型干扰素表达增加或组成型表达的氨基酸置换，或者是具有导致I型干扰素表达增加或组成型表达的氨基酸置换的STING多肽，其中导致I型干扰素表达增加或组成型表达的突变是功能获得(GOF)突变。16.权利要求15的构建体，其中参照与SEQ ID NO:305
‑
309任一的比对，所述STING多肽中的氨基置换对应于R284G。17.权利要求11至16任一项的构建体，其中所述STING多肽进一步包含置换N154S。18.权利要求1至17任一项的构建体，其包含编码IL
‑
36γ的核酸。19.权利要求1至18任一项的构建体，其编码免疫检查点抑制剂抗体或其抗原结合部分。20.权利要求19的构建体，其中所述免疫检查点是CTLA
‑
4，或PD
‑
1，或PD
‑
L1。21.权利要求1至20任一项的构建体，其中所编码的产物是抗体，其是scFv，或者是scFv
‑
Fc双链多肽。22.质粒，其包含权利要求1至21任一项的构建体。23.权利要求22的质粒，其是细菌质粒，其中所述构建体与真核转录调节序列可操作地连接。24.权利要求23的质粒，其中所述转录调节序列包含真核启动子。25.组合物，其包含由权利要求1至24任一项的构建体或质粒编码的抗癌蛋白产物的混合物。26.一种免疫刺激细菌，其包含权利要求1至24任一项的构建体或质粒。27.权利要求26的免疫刺激细菌，其中所述细菌的基因组被修饰，使得所得细菌是msbB
‑
/purI
‑
。28.权利要求26或27的免疫刺激细菌，其中所述细菌是msbB
‑
和purI
‑
，由此所述msbB
‑
和purI
‑
基因的至少编码部分的全长被缺失。29.权利要求26至28任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌的基因组被修饰，由此所述细菌缺乏鞭毛。30.权利要求26至29任一项的免疫刺激细菌，其包含基因组修饰，由此所述细菌是msbB
‑
/pagP
‑
。
31.权利要求26至30任一项的免疫刺激细菌，其包含基因组修饰，由此所述细菌不表达L
‑
天冬酰胺酶II，因此所述细菌是ansB
‑
。32.一种免疫刺激细菌，其包含编码多种治疗产物的质粒，其中所述细菌的基因组被修饰，使得细菌是msbB
‑
和purI
‑
，由此msbB和purI基因的至少编码部分的全长被缺失。33.一种免疫刺激细菌，其包含在真核启动子控制下的编码治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分而被修饰，由此所述细菌不激活分泌的天冬酰胺酶的合成。34.权利要求33的免疫刺激细菌，其中所述天冬酰胺酶是由基因asnB编码的L
‑
天冬酰胺酶II。35.权利要求34的免疫刺激细菌，其具有基因组修饰，由此所述细菌缺乏鞭毛并且是pagP
‑
、ansB
‑
和csgD
‑
。36.权利要求35的免疫刺激细菌，其是Δasd/ΔFLG/ΔpagP/ΔansB/ΔcsgD。37.权利要求33至36任一项的免疫刺激细菌，其具有基因组修饰，由此所述细菌是msbB
‑
。38.权利要求33至37任一项的免疫刺激细菌，其具有基因组修饰，由此所述细菌是腺苷营养缺陷型，或者是腺苷和腺嘌呤营养缺陷型。39.权利要求33至38任一项的免疫刺激细菌，其具有基因组修饰，由此所述细菌是purI
‑
。40.权利要求33至39任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码天冬氨酸
‑
半醛脱氢酶(asd)。41.权利要求33至40任一项的免疫刺激细菌，其是purI
‑
。42.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的多种治疗产物的质粒，其中：通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌被修饰以产生五酰化脂多糖(LPS)；与野生型细菌相比，六酰化脂多糖显著减少至少10倍，或不存在；和所述质粒编码在单个启动子控制下的多种互补抗癌治疗产物，其中互补治疗产物的每一种治疗癌症的不同方面，或通过不同机制起作用，使得组合效应至少是单独每种产物效应的累加。43.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中：通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌具有减弱的TLR2、TLR4和TLR5的识别；和所述质粒编码在单个启动子控制下的多种互补治疗产物。44.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中：通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此细菌不激活卷曲菌毛和/或纤维素的合成；和所述质粒编码在单个启动子控制下的多种互补治疗产物。45.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中：通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由
此所述细菌对嘌呤、腺苷或ATP是营养缺陷型的，并且通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分被修饰，由此所述细菌缺乏鞭毛；和所述质粒编码在单个真核启动子控制下的多种治疗产物。46.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌缺乏鞭毛；和所述质粒编码在单个启动子控制下的多种治疗产物。47.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌被修饰以特异性感染肿瘤驻留骨髓细胞；和所述质粒编码在单个启动子控制下的多种治疗产物。48.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌被修饰以特异性感染肿瘤驻留骨髓细胞，并且无法在肿瘤驻留骨髓细胞中复制。49.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组包含选自以下的两种或更多种修饰：a)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌被修饰以产生五酰化脂多糖，其中：通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌被修饰以产生五酰化脂多糖；和与野生型细菌相比，六酰化脂多糖显著减少至少10倍，或不存在；b)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌具有减弱的对TLR2、TLR4和TLR5中一种或多种的识别；c)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌不激活卷曲菌毛和/或纤维素的合成；d)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌不激活分泌的天冬酰胺酶的合成；e)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌对嘌呤、腺苷或ATP是营养缺陷型的；f)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌缺乏鞭毛；g)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌被修饰以特异性感染肿瘤驻留骨髓细胞；h)缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分，由此所述细菌被修饰以特异性感染肿瘤驻留骨髓细胞，并且不能在肿瘤驻留骨髓细胞中复制；及i)缺失或破坏lppA和lppB之一或二者以降低或消除脂蛋白在膜中的表达，从而在肿瘤微环境和/或肿瘤驻留免疫细胞中增加被编码的治疗性蛋白质的表达。50.权利要求49的免疫刺激细菌，其包含修饰a)、d)和f)，或包含修饰c)和d)。51.权利要求49的免疫刺激细菌，其包含修饰a)、c)、d)、e)和f)。52.权利要求49的免疫刺激细菌，其包含修饰a)、c)、d)、e)、f)和i)，或包含修饰a)、d)、
f)和i)，或包含修饰c)、d)和i)，或包含修改f)和i)，或包含修饰a)至i)。53.权利要求49的免疫刺激细菌，其包含修饰a)、b)、d)和f)，或包含修饰a)、b)、c)和d)。54.权利要求26至53任一项的免疫刺激细菌，其中缺失lppA和lppB。55.权利要求26至54任一项的免疫刺激细菌，其缺乏鞭毛并且是msbB
‑
/pagP
‑
，其中所述质粒编码选自共刺激分子、细胞因子、STING通路激动剂和免疫检查点抑制剂抗体中的两种或更多种治疗性蛋白质的组合。56.一种免疫刺激细菌，其包含编码治疗产物的质粒，其中所述细菌感染巨噬细胞将人M2巨噬细胞转化为M1表型巨噬细胞。57.一种免疫刺激细菌，其包含编码治疗产物的质粒，其中：所述免疫刺激细菌在其基因组中包含修饰，由此所述细菌感染肿瘤驻留巨噬细胞，而不感染上皮细胞；和所述治疗产物在巨噬细胞中的表达将人M2巨噬细胞转化为M1或M1样表型。58.权利要求26至57任一项的免疫刺激细菌，其包含编码治疗产物的质粒，其中所述治疗产物在巨噬细胞中的表达将人M2巨噬细胞转化为M1或M1样表型。59.权利要求26至58任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是导致I型干扰素(IFN)表达的胞质DNA/RNA传感器通路的一部分。60.权利要求59的免疫刺激细菌，其中I型IFN的表达是组成型的。61.权利要求59或60的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是所述治疗产物的功能获得(GOF)变体，其是胞质DNA/RNA传感器通路的一部分，其中所述GOF变体产物不需要胞质核酸、核苷酸、二核苷酸或环二核苷酸以导致I型IFN表达。62.权利要求26至61任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是变体STING蛋白。63.权利要求26至62任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌的感染将人M2巨噬细胞转化为M1样I型IFN产生细胞。64.权利要求26至63任一项的免疫刺激细菌，其缺乏鞭毛，其中所述野生型细菌具有鞭毛，及所述免疫刺激细菌是pagP
‑
/msbB
‑
。65.权利要求26至64任一项的免疫刺激细菌，其中所述免疫刺激细菌含有基因组修饰，由此所述细菌缺乏鞭毛并且不产生L
‑
天冬酰胺酶II(ansB)。66.权利要求65的免疫刺激细菌，其中所述免疫刺激细菌还具有基因组修饰，由此所述细菌是msbB
‑
和pagP
‑
。67.权利要求26至66任一项的免疫刺激细菌，其中免疫刺激细菌具有基因组的修饰，由此基因组赋予的细菌表型是Δasd/ΔFLG/ΔpagP/ΔansB/ΔcsgD或Δasd/ΔFLG/ΔpagP/ΔansB/ΔcsgD/ΔmsbB/ΔpurI，其中所述质粒任选编码天冬氨酸
‑
半醛脱氢酶(asd)。68.权利要求26至67任一项的免疫刺激细菌，其包含编码STING多肽的质粒。69.权利要求68的免疫刺激细菌，其中所述STING多肽是导致I型干扰素的表达增加或组成型表达的变体STING多肽。70.权利要求69的免疫刺激细菌，其中所述STING多肽是人嵌合STING多肽，其包含来自袋獾STING的C末端尾区(CTT)。71.权利要求69或70的免疫刺激细菌，其中参考与SEQ ID NO:305
‑
309任一的比对，所
述STING多肽包含对应于R284的置换。72.权利要求71的免疫刺激细菌，参考SEQ ID NO:305
‑
309任一，其进一步包含对应于N154S的置换。73.权利要求26至72任一项的免疫刺激细菌，其包含编码IL
‑
12、IL
‑
15和IL
‑
21中的一种或多种的质粒。74.权利要求26至73任一项的免疫刺激细菌，其是沙门氏菌(Salmonella)菌株。75.权利要求26至74任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是抗癌治疗剂。76.权利要求26至75任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌编码是免疫刺激蛋白的治疗产物。77.权利要求76的免疫刺激细菌，其中所述免疫刺激蛋白是干扰素基因刺激因子(STING)蛋白、经修饰的STING蛋白、细胞因子、趋化因子或共刺激受体或配体。78.权利要求26至77任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌包含基因组修饰，由此其缺乏鞭毛。79.权利要求26至78任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌包含基因组修饰，由此其是pagP
‑
或msbB
‑
/pagP
‑
。80.权利要求26至79任一项的免疫刺激细菌，其中：所述细菌包含基因组修饰，由此其不表达天冬酰胺酶或激活分泌的天冬酰胺酶的合成；和/或通过缺失或破坏编码L
‑
天冬酰胺酶II的基因ansB的全部或足够部分来修饰免疫刺激细菌的基因组，由此所述细菌是ansB
‑
且不表达活性L
‑
天冬酰胺酶II。81.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过缺失或破坏全部或足够部分的csgD而被修饰，由此所述细菌是csgD
‑
且不激活卷曲菌毛的合成。82.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过缺失或破坏编码L
‑
天冬酰胺酶II的基因ansB的全部或足够部分而被修饰，由此所述细菌是ansB
‑
且不表达活性L
‑
天冬酰胺酶II。83.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过缺失或破坏编码L
‑
天冬酰胺酶II的基因ansB的全部或足够部分以及通过缺失或破坏基因csgD的全部或足够部分而被修饰，由此所述细菌是ansB
‑
且不表达活性L
‑
天冬酰胺酶II，并且是csgD
‑
且不激活卷曲菌毛的合成。84.权利要求26至83任一项的免疫刺激细菌，进一步包含缺失或破坏编码鞭毛的基因的全部或足够部分，由此所述细菌是鞭毛蛋白
‑
(fliC
‑
/fljB
‑
)并且不产生鞭毛，其中野生型细菌具有鞭毛。85.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过缺失或破坏编码细菌脂蛋白的基因lppA和lppB的全部或足够部分而被修饰，由此不产生脂蛋白，并且其中所述质粒上编码的治疗产物是抗癌治疗剂。86.权利要求85的免疫刺激细菌，其中通过缺失或破坏基因csgD的全部或足够部分来进一步修饰所述细菌的基因组，由此所述细菌是csgD
‑
，或在基因组中具有另一种或额外的修饰，从而损害生物膜形成。
87.权利要求82至86任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌的基因组通过缺失或破坏基因的全部或足够部分而被进一步修饰，由此所述细菌是csgD
‑
/msbB
‑
/pagP
‑
。88.权利要求82、83和85至87任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌包含基因组的修饰，由此所述细菌缺乏鞭毛。89.一种免疫刺激细菌，其包含基因组修饰，由此所述细菌缺乏鞭毛，并且是lppA
‑
/lppB
‑
，并且任选是csgD
‑
，或缺乏鞭毛，是ansB
‑
，以及任选是csgD
‑
。90.权利要求26至89任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是嘌呤营养缺陷型的。91.权利要求26至89任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是腺苷营养缺陷型的。92.权利要求26至89任一项的免疫刺激细菌，其是腺苷、腺嘌呤和ATP营养缺陷型的。93.权利要求26至92任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是purI
‑
。94.权利要求26至93任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是pagP
‑
。95.权利要求26至94任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是asd
‑
。96.权利要求26至95任一项的免疫刺激细菌，其是天冬氨酸
‑
半醛脱氢酶
‑
(asd
‑
)，其中由于破坏或缺失编码天冬氨酸
‑
半醛脱氢酶(asd)的内源基因的全部或部分，由此内源性asd不表达，因此所述细菌是asd
‑
。97.权利要求26至96任一项的免疫刺激细菌，其在质粒上编码细菌启动子控制下的天冬氨酸
‑
半醛脱氢酶(asd)。98.权利要求26至97任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是msbB
‑
。99.权利要求26至98任一项的免疫刺激细菌，其包含基因组修饰，由此所述细菌是asd
‑
、purI
‑
、msbB
‑
、鞭毛蛋白
‑
和pagP
‑
，其中野生型细菌具有鞭毛。100.权利要求26至98任一项的免疫刺激细菌，其是asd
‑
、csgD
‑
、purI
‑
、msbB
‑
、鞭毛蛋白
‑
和pagP
‑
，其中野生型细菌具有鞭毛。101.权利要求26至98任一项的免疫刺激细菌，其是ansB
‑
、asd
‑
、csgD
‑
、purI
‑
、msbB
‑
、鞭毛蛋白
‑
(fliC
‑
/fljB
‑
)和pagP
‑
，其中野生型细菌具有鞭毛。102.权利要求96至100任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌是鞭毛蛋白
‑
(fliC
‑
/fljB
‑
)，其中野生型细菌具有鞭毛。103.权利要求26至102任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌的基因组通过缺失或破坏基因lppA和/或lppB的全部或足够部分而被修饰，由此所述细菌是lppA
‑
和/或lppB
‑
，与除了具有完整lppA和/或lppB之外相同的免疫刺激细菌相比，所述在质粒上编码的治疗性蛋白质在肿瘤微环境和/或肿瘤驻留巨噬细胞中的表达增加。104.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过缺失或破坏一个或多个基因的全部或足够部分而被修饰，由此所述细菌是ansB
‑
、asd
‑
、csgD
‑
、purI
‑
、msbB
‑
、鞭毛蛋白
‑
和pagP
‑
，其中野生型细菌具有鞭毛。105.一种免疫刺激细菌，其包含编码在真核启动子控制下的治疗产物的质粒，其中所述免疫刺激细菌的基因组通过一个或多个基因的全部或足够部分的缺失或破坏而被修饰，由此所述细菌是ansB
‑
、asd
‑
、csgD
‑
、purI
‑
、msbB
‑
、鞭毛蛋白
‑
，其中野生型细菌具有鞭毛和pagP
‑
。106.权利要求104或105的免疫刺激细菌，其中所述细菌是鞭毛蛋白
‑
(fliC
‑
/fljB
‑
)。
107.权利要求105或106的免疫刺激细菌，其中所述细菌基因组包含进一步的修饰，由此所述细菌是ansB
‑
、asd
‑
、csgD
‑
、purI
‑
、msbB
‑
、鞭毛蛋白
‑
(fliC
‑
/fljB
‑
)、pagP
‑
、lppA
‑
和lppB
‑
。108.权利要求26至107任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是抗癌治疗剂。109.权利要求26至108任一项的免疫刺激细菌，其中编码所述治疗产物的核酸与编码分泌信号的核酸可操作地连接，由此当其表达时分泌所述治疗产物。110.权利要求26至109任一项的免疫刺激细菌，其中涉及SPI
‑
1侵入的一个或多个基因或操纵子被缺失或失活，由此所述免疫刺激细菌不侵入或感染上皮细胞。111.权利要求110的免疫刺激细菌，其中缺失或失活以下一个或多个基因：avrA、hilA、hilD、invA、invB、invC、invE、invF、invG、invH、invI、invJ、iacP、iagB、spaO、spaQ、spaR、spaS、orgA、orgB、orgC、prgH、prgI、prgJ、prgK、sicA、sicP、sipA、sipB、sipC、sipD、sirC、sopB、sopD、sopE、sopE2、sprB和sptP。112.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以低拷贝数或中等拷贝数存在。113.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包含中等至低拷贝数的复制起点。114.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包含低拷贝数复制起点。115.权利要求26至111和114任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以低拷贝数存在。116.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以150或更少的拷贝数存在。117.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以大于150的拷贝数存在。118.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以高拷贝数存在。119.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以中等拷贝数存在，所述中等拷贝数介于20和150之间，包括端值，小于150或小于约150且大于20或约20，或在20至150个拷贝之间。120.权利要求26至111任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒的拷贝数大于150。121.权利要求116的免疫刺激细菌，其中所述质粒的拷贝数为150个拷贝或更少，或者小于或等于150。122.权利要求26至115任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒以低拷贝数存在，所述低拷贝数小于25，或小于20，或小于约25，或小于约20个拷贝。123.权利要求26至122任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是核酸或蛋白质。124.权利要求123的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是蛋白质。125.权利要求26至124任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码两种或更多种治疗产物。126.权利要求26至125任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒上编码的治疗产物是抗癌治疗剂。127.权利要求26至126任一项的免疫刺激细菌，其中所述细菌编码选自细胞因子、组成型诱导I型IFN的蛋白质和共刺激受体或分子的两种或更多种产物。
128.权利要求127的免疫刺激细菌，其中所述共刺激分子缺乏胞质结构域，或具有经修饰的截短的胞质结构域以确保被编码的共刺激分子在细胞中以正确方向表达，或具有截短的胞质结构域，从而消除或减少免疫抑制反向信号传导。129.权利要求26至128任一项的免疫刺激细菌，其中所述编码一种或多种治疗产物的核酸包含编码用于从包含所述细菌或质粒的细胞中分泌所述一或多种治疗产物的信号的核酸。130.权利要求26至129任一项的免疫刺激细菌，其中质粒上编码所述产物的核酸与被真核宿主识别的调节序列可操作地连接。131.权利要求26至130任一项的免疫刺激细菌，其中所述免疫刺激细菌编码两种或更多种产物，并且每种产物的表达在单独的启动子的控制下，或所有产物的表达在单个启动子的控制下，以及每种产物被编码2A肽的核酸分开以实现每种被编码的治疗产物的单独翻译。132.权利要求131的免疫刺激细菌，其中所述核酸编码T2A、F2A、E2A或P2A肽以实现在单个启动子控制下被表达的治疗产物的单独表达。133.权利要求26至132任一项的免疫刺激细菌，其中所述真核启动子是RNA聚合酶II启动子或RNA聚合酶III启动子。134.权利要求133的免疫刺激细菌，其中所述启动子是RNA聚合酶II启动子，其是病毒启动子或哺乳动物RNA聚合酶II启动子。135.权利要求134的免疫刺激细菌，其中所述启动子是选自巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、Epstein Barr病毒(EBV)启动子、疱疹病毒启动子和腺病毒启动子的病毒启动子。136.权利要求26至134任一项的免疫刺激细菌，其中控制质粒上一种或多种被编码的治疗产物或异源蛋白的表达的启动子是延伸因子
‑
1(EF
‑
1)α启动子，或MND启动子，或UBC启动子，或PGK启动子，或CAG启动子。137.权利要求26至134任一项的免疫刺激细菌，其中控制质粒上一种或多种被编码的治疗产物或异源蛋白质的表达的启动子是EF
‑
1α启动子、腺病毒2或5晚期启动子、CMV启动子、SV40启动子、MND启动子、PGK启动子、EIF4A1启动子、CAG启动子或CD68启动子。138.权利要求26至134任一项的免疫刺激细菌，其中控制质粒上一种或多种被编码的治疗产物或异源蛋白质的表达的启动子是病毒启动子，其是晚期启动子。139.权利要求26至138任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包含调节序列，所述调节序列包含选自SV40、hGH、BGH、MND、鸡β
‑
球蛋白和rbGlob(兔球蛋白)基因的终止子和/或启动子，以控制所述一或多种治疗产物的表达。140.权利要求26至139任一项的免疫刺激细菌，其中所述被编码的一或多种治疗产物与用于从含有所述质粒的细胞中分泌的信号序列可操作地连接。141.权利要求26至140任一项的免疫刺激细菌，其中所述编码治疗产物的质粒包含构建体，所述构建体包括增强子、启动子、编码所述治疗产物或异源蛋白质的开放读框和polyA尾区。142.权利要求26至141任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包含构建体，所述构建体包括增强子、启动子、IRES、编码所述治疗产物或异源蛋白质的开放读框和polyA尾区。
143.权利要求26至142任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包含构建体，所述构建体包括增强子、启动子、IRES、定位序列、编码所述治疗产物的开放读框和polyA尾区。144.权利要求26至143任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包含包括细菌终止子的构建体，所述细菌终止子被定位以减少质粒上细菌启动子的通读。145.权利要求26至144任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒上的真核启动子与质粒上的细菌启动子的方向相反。146.权利要求145的免疫刺激细菌，其中所述细菌启动子控制asd基因的表达。147.权利要求26至146任一项的免疫刺激细菌，其中编码治疗产物或异源蛋白质的质粒上的构建体包含土拨鼠肝炎病毒(WHP)转录后调节元件(WPRE)或乙型肝炎病毒转录后调节元件(HPRE)。148.权利要求26至147任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒含有编码治疗产物的核酸，所述治疗产物是导致I型干扰素(IFN)表达的胞质DNA/RNA传感器通路的一部分，或者是其变体。149.权利要求148的免疫刺激细菌，其中未修饰形式的治疗产物直接或间接感应胞质核酸、核苷酸、二核苷酸或环二核苷酸或与胞质核酸、核苷酸、二核苷酸或环二核苷酸相互作用，以诱导I型IFN的表达，并且变体蛋白在不存在感应胞质核酸、核苷酸、二核苷酸或环二核苷酸或与胞质核酸、核苷酸、二核苷酸或环二核苷酸相互作用的情况下诱导I型IFN的表达。150.权利要求148的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是变体，当其在受试者中表达时导致I型IFN的组成型表达。151.权利要求148的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是功能获得(GOF)变体，其不需要胞质核酸、核苷酸、二核苷酸或环二核苷酸以导致I型IFN的表达。152.权利要求26至151任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物选自STING、RIG
‑
1、MDA
‑
5、IRF
‑
3、IRF
‑
7、TRIM56、RIP1、Sec5、TRAF3、TRAF2、TRAF6、STAT1、LGP2、DDX3、DHX9、DDX1、DDX9、DDX21、DHX15、DHX33、DHX36、DDX60、和SNRNP200及其变体，其增加活性或增加活性以使I型干扰素活性增加或是组成型活性。153.权利要求26至152任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物选自TRIM56、RIP1、Sec5、TRAF3、TRAF2、TRAF6、STAT1、LGP2、DDX3、DHX9、DDX1、DDX9、DDX21、DHX15、DHX33、DHX36、DDX60和SNRNP200及其变体，其增加活性或增加活性以使I型干扰素活性增加或是组成型活性。154.权利要求26至153任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是变体蛋白，其具有增加的活性，导致I型干扰素(IFN)表达增加或导致I型IFN组成型表达。155.权利要求26至154任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码蛋白质的功能获得性、组成型活性变体，其在人体中促进或引起干扰素病。156.权利要求62至80和148至155任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是包含突变的变体，所述突变消除了STING蛋白中的磷酸化位点从而减少活化的B细胞(NF
‑
κB)信号传导的核因子κ
‑
轻链增强子。157.权利要求148至156任一项的免疫刺激细菌，其中所述诱导I型IFN的治疗产物是STING、RIG
‑
I、IRF
‑
3或MDA5，或其变体。
158.权利要求148至157任一项的免疫刺激细菌，其中：诱导I型IFN表达的治疗产物是其具有增加的活性或组成型活性的变体；和所述治疗产物是STING、RIG
‑
I、IRF
‑
3或MDA5，或其变体。159.权利要求148至158任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是STING、RIG
‑
1、IRF
‑
3或MDA5的变体，其包含导致I型IFN表达增加的功能获得性突变。160.权利要求148至159任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是STING、RIG
‑
1、IRF
‑
3或MDA5的变体，其中一个或多个由于病毒感染而被磷酸化的丝氨酸(S)或苏氨酸(T)残基被天冬氨酸(D)置换，由此产生的变体是组成型诱导I型IFN的磷酸模拟物。161.权利要求148至160任一项的免疫刺激细菌，其中：所述治疗产物是IRF
‑
3，参考与SEQ ID NO:312的比对，其在位置396、398、402、404和405的残基具有一个或多个置换；和所述残基被天冬氨酸残基置换。162.权利要求161的免疫刺激细菌，其中参考与SEQ ID NO:312的比对，IRF
‑
3包含置换S396D。163.权利要求161的免疫刺激细菌，其中参考与SEQ ID NO:312的比对，IRF
‑
3包含置换S396D/S398D/S402D/T404D/S405D。164.权利要求148至163任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物选自STING、RIG
‑
I、MDA
‑
5、IRF
‑
3、IRF
‑
7、TRIM56、RIP1、Sec5、TRAF3、TRAF2、TRAF6、STAT1、LGP2、DDX3、DHX9、DDX1、DDX9、DDX21、DHX15、DHX33、DHX36、DDX60和SNRNP200及其变体，其增加活性或增加活性使得I型干扰素活性增加或是组成型活性。165.权利要求148至164任一项的免疫刺激细菌，其中：所述感应胞质DNA/RNA的治疗产物是变体STING、MDA5、RIG
‑
I或IRF
‑
3；和未修饰的STING具有SEQ ID NO:305
‑
309任一所示序列，未修饰的MDA5具有SEQ ID NO:310所示的序列，未修饰的RIG
‑
I具有SEQ ID NO:311所示序列，以及未修饰IRF
‑
3具有SEQ ID NO:312所示的序列。166.权利要求148至165任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物选自STING、MDA5、IRF
‑
3和RIG
‑
I，并且包含使STING、MDA5、IRF
‑
3或RIG
‑
I是组成型活性的功能获得性突变，由此I型IFN的表达是组成型表达。167.权利要求165或166的免疫刺激细菌，其中所述突变选自以下：a)参考与SEQ ID NO:305
‑
309的比对，在STING中的选自如下的一个或多个突变：S102P、V147L、V147M、N154S、V155M、G166E、C206Y、G207E、S102P/F279L、F279L、R281Q、R284G、R284S、R284M、R284K、R284T、R197A、D205A、R310A、R293A、T294A、E296A、R197A/D205A、S272A/Q273A、R310A/E316A、E316A、E316N、E316Q、S272A、R293A/T294A/E296A、D231A、R232A、K236A、Q273A、S358A/E360A/S366A、D231A/R232A/K236A/R238A、S358A、E360A、S366A、R238A、R375A、N154S/R284G和S324A/S326A；b)参考与SEQ ID NO:310的比对，在MDA5中的选自如下的一个或多个突变：T331I、T331R、A489T、R822Q、G821S、A946T、R337G、D393V、G495R、R720Q、R779H、R779C、L372F和A452T；c)参考与SEQ ID NO:311的比对，在RIG
‑
I中的选自E373A和C268F的一个或两个突变；
及d)参考与SEQ ID NO:312的比对，在IRF
‑
3中的突变S396D。168.权利要求148至167任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是变体STING，参考与SEQ ID NO:305
‑
309任一的比对，其含有选自如下的一个或多个氨基酸置换：S102P、V147L、V147M、N154S、V155M、G166E、C206Y、G207E、S102P/F279L、F279L、R281Q、R284G、R284S、R284M、R284K、R284T、R197A、D205A、R310A、R293A、T294A、E296A、R197A/D205A、S272A/Q273A、R310A/E316A、E316A、E316N、E316Q、S272A、R293A/T294A/E296A、D231A、R232A、K236A、Q273A、S358A/E360A/S366A、D231A/R232A/K236A/R238A、S358A、E360A、S366A、R238A、R375A、S324A/S326A和N154S/R284G，及其保守置换。169.权利要求26至168任一项的免疫刺激细菌，其中：所述治疗性蛋白质增加或诱导I型IFN的表达；和所述I型IFN是干扰素
‑
α或干扰素
‑
β。170.权利要求26至169任一项的免疫刺激细菌，其中涉及SPI
‑
1侵入或SPI
‑
1独立侵入的一个或多个基因或操纵子被缺失、破坏或失活，由此所述免疫刺激细菌不侵入或感染上皮细胞，或具有降低的侵入或感染上皮细胞的能力。171.权利要求170的免疫刺激细菌，其中以下一种或多种基因被缺失、破坏或失活：avrA、hilA、hilD、invA、invB、invC、invE、invF、invG、invH、invI、invJ、iacP、iagB、spaO、spaP、spaQ、spaR、spaS、orgA、orgB、orgC、prgH、prgI、prgJ、prgK、sicA、sicP、sipA、sipB、sipC、sipD、sirC、sopB、sopD、sopE、sopE2、sprB和sptP。172.权利要求171的免疫刺激细菌，其中所述一种或多种基因选自pagN、hlyE、pefI、srgD、srgA、srgB和srgC。173.权利要求26至172任一项的免疫刺激细菌，其具有编码SPI
‑
2复合物中蛋白质的基因的缺失或破坏。174.权利要求26至173任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白。175.权利要求174的免疫刺激细菌，其中所述在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白选自以下一种或多种：IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12p70(IL
‑
12p40+IL
‑
12p35)、IL
‑
15、与IL
‑
2Ra结合减弱的IL
‑
2、IL
‑
15/IL
‑
15Rα链复合物、IL
‑
18、IL
‑
21、IL
‑
23、IL
‑
36γ、经修饰使其不与IL
‑
2Ra结合的IL
‑
2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、干扰素
‑
α、干扰素
‑
β、干扰素
‑
γ、CCL3、CCL4、CCL5、参与或实现或增强T细胞的募集和/或持续的蛋白质、CD40、CD40配体(CD40L)、CD28、OX40、OX40配体(OX40L)、4
‑
1BB、4
‑
1BB配体(4
‑
1BBL)、具有缺失或截短或以其它方式修饰的胞质结构域以消除免疫抑制反向信号传导的4
‑
1BBl、B7
‑
CD28家族的成员、CD47拮抗剂、抗IL6抗体或IL
‑
6结合诱饵受体、TGF
‑
β多肽拮抗剂和肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员。176.权利要求174或175的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码经修饰的4
‑
1BBL，其序列在SEQ ID NO:390、SEQ ID NO:391或SEQ ID NO:392中示出。177.权利要求175或176的免疫刺激细菌，进一步包含与所述共刺激蛋白连接以促进其纯化或表达的标签。178.权利要求177的免疫刺激细菌，其中所述标签是包含序列MEQKLISEEDL的c
‑
myc标
签，如SEQ ID NO:392的残基1至11所示。179.权利要求174至178任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码4
‑
1BBL多肽和至少一种另外的治疗性蛋白质。180.权利要求179的免疫刺激细菌，其中所述另外的治疗性蛋白质是IL
‑
15Rα
‑
IL
‑
15sc，或IL
‑
12，或IL
‑
15Rα
‑
IL
‑
15sc和IL
‑
12。181.权利要求174至180任一项的免疫刺激细菌，其包含在单个启动子控制下在多顺反子核酸中编码的1
‑
4BBL多肽和一种或多种另外的治疗性多肽，其中所述1
‑
4BBL多肽是所述多顺反子中第一个多肽。182.权利要求174至181任一项的免疫刺激细菌，其中：所述免疫刺激蛋白是选自CD40、CD40配体(CD40L)、CD28、OX40、OX40配体(OX40L)、4
‑
1BB和4
‑
1BB配体(4
‑
1BBL)的共刺激分子，其任选在抗原呈递细胞(APC)上表达的胞质结构域截短或缺乏胞质结构域，以消除免疫抑制反向信号传导；和截短的基因产物能够通过共刺激受体参与向T细胞发出组成型免疫刺激信号，并且由于胞质结构域的截短或缺失而不能向抗原呈递细胞(APC)发出反调节信号。183.权利要求26至182任一项的免疫刺激细菌，其中被编码的产物包含STING蛋白、经修饰的STING蛋白、嵌合STING蛋白、抗CTLA
‑
4抗体、IL
‑
15、4
‑
1BBL及其修饰或截短形式、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂、IL
‑
12和IL
‑
21中的一种或多种，和/或以下任一：IL
‑
12、或IL
‑
15、或IL12p70、或IL
‑
15/IL
‑
15Rα链复合物中的一种或多种；细胞因子和STING通路激动剂；细胞因子、STING通路激动剂和共刺激分子或免疫检查点抑制剂；细胞因子、STING通路激动剂和TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂；和/或细胞因子、STING通路激动剂、TGF
‑
β受体诱饵或多肽拮抗剂，以及共刺激分子或免疫检查点抑制剂。184.权利要求26至183任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒包括编码诱导肿瘤细胞凋亡或对肿瘤细胞具有细胞毒性的产物的核酸。185.权利要求184的免疫刺激细菌，其中：所述产物是核酸；和编码所述产物的核酸包括编码分泌信号的核酸，由此所述产物被分泌。186.权利要求183或184的免疫刺激细菌，其中所述产物诱导凋亡。187.权利要求186的免疫刺激细菌，其中所述诱导凋亡的产物是天青蛋白。188.权利要求174至187任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白，并且所述免疫刺激蛋白是细胞因子或趋化因子。189.权利要求174至188任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白，其是共刺激分子或其胞质结构域缺失的或截短的或其它经修饰的形式。190.权利要求189的免疫刺激细菌，其中所述在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白选自4
‑
1BBL、CD80、CD86、CD27L、B7RP1和OX40L，以及其胞质结构域缺失的或截短的或截短的和经修饰的形式，其中当蛋白质在细胞中表达时所述修饰促进正
确定向，以及所述胞质缺失、截短和/或修饰消除或减少免疫抑制反向信号传导。191.权利要求26至190任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码作为TGF
‑
β多肽拮抗剂的治疗产物。192.权利要求191的免疫刺激细菌，其中所述TGF
‑
β多肽拮抗剂选自抗TGF
‑
β抗体或其片段、抗TGF
‑
β受体抗体或其片段、可溶性TGF
‑
β拮抗剂多肽及TGF
‑
β结合诱饵受体。193.权利要求191或192的免疫刺激细菌，其中编码TGF
‑
β多肽拮抗剂的核酸包含编码用于分泌所编码的多肽的信号序列的核酸。194.权利要求26至193任一项的免疫刺激细菌，其中所述治疗产物是抗体或其抗原结合片段。195.权利要求194的免疫刺激细菌，其中所述抗体或其抗原结合片段是选自Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、单链Fv(scFv)、Fv、dsFv、纳米抗体、双特异抗体片段、单链抗体和scFv
‑
Fc双链抗体的抗原结合片段。196.权利要求195的免疫刺激细菌，其中所述抗体是scFV。197.权利要求195或196的免疫刺激细菌，其中所述抗体包含Fc，由此所得抗体包含两条链。198.权利要求195至197任一项的免疫刺激细菌，其中所述抗体由包含编码可变轻链、接头、可变重链和IgG Fc的核酸的核酸编码，其中所述被编码的抗体是scFv
‑
Fc。199.权利要求195至198任一项的免疫刺激细菌，其中所述抗体是抗CTLA
‑
4抗体。200.权利要求194至199任一项的免疫刺激细菌，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化抗体或其抗原结合片段或者是人抗体或其抗原结合片段。201.权利要求194至200任一项的免疫刺激细菌，其中所述抗体或其抗原结合片段是PD
‑
1、PD
‑
L1、CTLA
‑
4、VEGF、VEGFR2或IL
‑
6的拮抗剂。202.权利要求26至201任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码选自以下的两种或更多种治疗产物：a)在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白；b)一种或多种蛋白质，其是导致I型干扰素(IFN)表达的胞质DNA/RNA传感器通路的一部分，或其具有增加的活性以增加I型IFN表达的变体，或其导致I型IFN的组成型表达的变体；和c)抗癌抗体或其抗原结合部分。203.权利要求202的免疫刺激细菌，其中所述免疫刺激蛋白是缺乏在抗原呈递细胞(APC)上表达的胞质结构域或其足够部分的共刺激分子，由此截短的共刺激分子能够通过共刺激受体参与向T细胞发出组成型免疫刺激信号，并且不能向抗原呈递细胞(APC)发出反调节信号。204.一种免疫刺激细菌，其包含编码在单个启动子控制下的两种或更多种治疗产物的质粒，其中：所述治疗产物选自：a)在肿瘤微环境中赋予或有助于抗肿瘤免疫反应的免疫刺激蛋白；b)一种或多种蛋白质，其是导致I型干扰素(IFN)表达的胞质DNA/RNA传感器通路的一部分，或其具有增加的活性以增加I型IFN表达的变体，或其导致I型IFN组成型表达的变体；
和c)抗癌抗体或其抗原结合部分；及所述编码核酸由IRES序列或2A肽分开，并且编码每种产物的每种核酸任选与编码信号序列的核酸可操作地连接，由此在编码的mRNA翻译时，每种产物从包含所述细菌和/或质粒的细胞中单独表达和分泌。205.权利要求204的免疫刺激细菌，其中所述免疫刺激蛋白是缺乏在抗原呈递细胞(APC)上表达的胞质结构域或其足够部分的共刺激分子，由此截短的共刺激分子能够通过共刺激受体参与向T细胞发出组成型免疫刺激信号，并且不能向抗原呈递细胞(APC)发出反调节信号。206.权利要求26至205任一项的免疫刺激细菌，其中所述质粒编码至少两种选自以下的治疗产物：细胞因子，组成型诱导I型IFN的蛋白质，共刺激分子和抗癌抗体或其抗原结合部分。207.权利要求26至206任一项的免疫刺激细菌，其中：所述质粒编码在单个启动子控制下的两种或更多种治疗产物；和编码至少两种或所有产物的核酸的表达在单个启动子的控制下，并且编码每种产物的核酸被编码2A肽的核酸分开，由此在翻译时，每种产物单独表达。208.权利要求202至207任一项的免疫刺激细菌，其中编码一种或多种所述治疗产物的核酸与编码指导表达产物分泌的序列的核酸可操作地连接。209.权利要求26至208任一项的免疫刺激细菌，其中：所述治疗产物是具有在抗原呈递细胞(APC)上表达的胞质结构域缺失或截短或其它修饰的共刺激分子；和所述截短的基因产物能够通过共刺激受体参与向T细胞发出组成型免疫刺激信号，并且由于胞质结构域缺失、截短或其它修饰而不能向APC发出反调节信号。210.权利要求209的免疫刺激细菌，其中所述具有缺失、截短或以其它方式修饰的胞质结构域的共刺激分子是4
‑
1BBL、CD80、CD86、CD27L、B7RP1或OX40L，以及在细胞中表达时增加蛋白质正确方向的变体。211.权利要求26至210任一项的免疫刺激细菌，其编码两种或更多种治疗产物，其中至少一种产物选自a)及至少一种选自b)，其中：a)是IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12p70(IL
‑
12p40+IL
‑
12p35)、IL
‑
15、IL
‑
23、IL
‑
36γ、与IL
‑
2Ra结合减弱的IL
‑
2、IL
‑
15/IL
‑
15Rα链复合物、IL
‑
18、经过修饰使其不与IL
‑
2Ra结合的IL
‑
2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、干扰素
‑
α、干扰素
‑
β、CCL3、CCL4、CCL5、参与或实现或增强T细胞募集/持续的蛋白质、CD40、CD40配体(CD40L)、OX40、OX40配体(OX40L)、4
‑
1BB、4
‑
1BB配体(4
‑
1BBL)、B7
‑
CD28家族的成员、TGF
‑
β多肽拮抗剂或肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员；及b)是STING、RIG
‑
I、MDA
‑
5、IRF
‑
3、IRF
‑
5、IRF
‑
7、TRIM56、RIP1、Sec5、TRAF3、TRAF2、TRAF6、STAT1、LGP2、DDX3、DHX9、DDX1、DDX9、DDX21、DHX15、DHX33、DHX36、DDX60或SNRNP200。212.权利要求26至211任一项的免疫刺激细菌，其编码或进一步编码TGF
‑
β抑制性抗体或其抗原结合片段、TGF
‑
β结合诱饵受体、抗IL6抗体或其抗原结合片段和IL
‑
6结合诱饵受体中的一种或多种。
213.权利要求26至212任一项的免疫刺激细菌，其编码以下治疗产物组合中的一种或多种：IL
‑
2和IL
‑
12p70；IL
‑
2和IL
‑
21；IL
‑
2，IL
‑
12p70，和STING功能获得(GOF)变体；IL
‑
2，IL
‑
21，和STING GOF变体；IL
‑
2，IL
‑
12p70，STING GOF变体，和4
‑
1BBL(包括4
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：阿克蒂姆治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：