一种提高乳酸发酵液过滤效率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高乳酸发酵液过滤效率的方法，涉及生物工程技术领域。本发明专利技术通过敲除乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)的肽链内切酶基因，使乳酸片球菌的细胞壁裂解酶的酶系不全，降低菌体裂解效率，从而使菌体个体变大，同时不易造成菌体内含物的释放，简化发酵液后道提取工艺中的菌体去除工序。改造后的乳酸片球菌菌体产酸能力没有影响(甚至略有提升)，同时使发酵液后道提取工艺中的菌体去除工序得到简化，节省了能耗和时间，最终节约了生产成本。了生产成本。了生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种提高乳酸发酵液过滤效率的方法


[0001]本专利技术属于生物工程领域，具体是涉及一种提高乳酸发酵液过滤效率的方法。

技术介绍

[0002]乳酸是世界公认三大有机酸之一，是生物界中广泛存在的一种代谢产物，可以应用于制备聚乳酸、乳酸烷基酯以及丙烯酸等生物材料和化学品，在食品、医药、化妆品和化工等领域有着悠久的使用历史。尤其是聚乳酸，其做为一种具有生物可降解性、生物相容性和环境友好性的生物聚合物，可替代石油化工原料塑料，其需求逐年增加，因此作为生产原料的乳酸需求也越来越大。目前，全球生产的乳酸几乎都是通过发酵途径生产的。
[0003]作为乳酸工业生产菌株主要有根霉属和细菌中的乳酸菌属。根霉菌因为是好氧菌的原因，存在一些缺点：发酵温度不高，糖酸转化率低，发酵过程需通气和搅拌，能耗高等不足限制了其生产乳酸的发展。随着对细菌发酵生产乳酸各种优点的认识，比如代谢快，可以缩短发酵周期；耐受和发酵温度范围广，可以减少发酵过程中对冷却水的消耗，同时也减少了染菌概率等各种好处。因此，国内外基本以细菌发酵生产乳酸为主。其中，细菌发酵产乳酸的菌种集中在乳酸杆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高乳酸发酵液过滤效率的方法，其特征在于，通过敲除乳酸片球菌Pediococcusacidilactici的肽链内切酶基因，使乳酸片球菌的细胞壁裂解酶的酶系不全，降低菌体裂解效率，从而使菌体个体变大，同时不易造成菌体内含物的释放，简化发酵液后道提取工艺中的菌体去除工序。2.根据权利要求1所述的一种提高乳酸发酵液过滤效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取乳酸片球菌肽链内切酶基因的上下游基因片段：使用MRS培养基培养菌株，提取菌体基因放置
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20℃冰箱保存备用；根据乳酸片球菌菌株肽链内切酶基因序列设计上下游基因序列引物，通过pcr的方法获取上下游基因片段，放置
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20℃冰箱保存备用；(2)将肽链内切酶基因上下游基因片段装进pSET4e温敏型敲除质粒：把乳酸片球菌的肽链内切酶基因上下游基因片段通过无缝克隆的方式连接进pSET4e敲除质粒，形成新的敲除质粒pSET4e
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endop；(3)将敲除质粒pSET4e
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endop转化进乳酸片球菌：制备乳酸片球菌感受态细胞后，将敲除质粒pSET4e
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endop电转化进乳酸片球菌感受态细胞；将转化后的感受态细胞稀释不同倍数，涂布于带质粒抗生素抗性的MRS培养皿，30℃培养3天至菌落出现，选用菌落数量在10～50的培养皿进行阳性克隆验证，选择含有敲除质粒pSET4e
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endop的乳酸片球菌备用；(4)将含有敲除质粒pSET4e
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endop的乳酸片球菌进行单交换，使敲入质粒进入乳酸片球菌基因组：将含有敲除质粒pSET4e
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endop的乳酸片球菌接入带质粒抗生素抗性的MRS液体试管，30℃培养至OD
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【专利技术属性】
技术研发人员：贺建龙，谢文斌，邱忠洋，夏军，刘晓燕，仇叶娟，李相前，
申请(专利权)人：淮阴师范学院，
类型：发明
国别省市：