用于治疗扩张型心肌病的NRF2激活剂制造技术

本发明专利技术涉及扩张型心肌病的治疗，特别涉及NRF2激活剂的用途。NRF2激活剂的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗扩张型心肌病的NRF2激活剂


[0001]本专利技术涉及扩张型心肌病的治疗，特别涉及NRF2激活剂的用途。

技术介绍

[0002]尽管进行了治疗，心肌病和心力衰竭仍然是全世界发病率和死亡率的主要病因之一。扩张型心肌病(DCM或CMD)的特征在于心肌运动功能减退和心腔扩张。扩张型心肌病期间发生的心脏重塑包括与存在纤维化相关的心肌细胞损伤，它们彼此密不可分。对心肌细胞的损伤包括收缩能力的降低和结构的改变，这会导致细胞凋亡和纤维化的扩大，从而取代坏死的心肌细胞。成纤维细胞的增殖阻止了心肌细胞的代偿性肥大。这些表现在临床上将转化为心脏功能的下降。这种严重的并发症可能导致死亡。
[0003]病因特别包括遗传，以及多种毒性剂、代谢剂或感染剂。冠状动脉疾病和高血压可能起作用，但不是主要病因。在许多情况下，病因仍不清楚。涉及心肌细胞的确切机制取决于疾病的病因。在遗传诱导的扩张型心肌病中，涉及的大部分基因编码心肌细胞的结构元件，包括涉及细胞粘附和信号传导途径的细胞外基质或高尔基体蛋白(层粘连蛋白、fukutin)；涉及细胞连接的桥粒蛋白(桥粒糖蛋白、斑珠蛋白)；涉及钙稳态的肌质网蛋白(RYR2、ATP2A2、受磷蛋白)；涉及心肌结构组织的核包膜蛋白(核纤层蛋白A/C)；涉及细胞骨架完整性和肌力传递的细胞骨架蛋白(肌营养不良蛋白、肌钙蛋白、α
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辅肌动蛋白、结蛋白、肌聚糖)；以及涉及肌力的产生和传递的肌节蛋白(肌联蛋白、肌钙蛋白、肌球蛋白、肌动蛋白)。在杜兴氏肌营养不良症(DMD)中，其是一种由抗肌萎缩蛋白基因突变引起的肌肉疾病，临床上在15岁左右出现扩张型心肌病并且几乎影响所有20岁以后的患者。就贝克尔肌营养不良症(BMD)(DMD的等位基因形式)而言，心脏损伤在20岁时出现，并且70％的患者在35岁后受到影响。肌联蛋白(肌节的一种巨大蛋白质)引起的DMC与1/250例心力衰竭有关(Burke et al.,JCI Insight.2016；1(6):e86898)。
[0004]目前可用于治疗获得性扩张型心肌病的药物将改进症状但不治疗疾病的致病机制。开具的治疗是针对心力衰竭的那些治疗，伴随有卫生和饮食措施，例如减少酒精消耗、减少水和盐摄取以及适度和定期的体育锻炼。在药物治疗中，转化酶抑制剂(ACE抑制剂)血管紧张素II阻止血管紧张素II的产生以降低血管收缩和血压。利尿药通过抑制肾钠重吸收从体内除去过量的盐和水。β
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阻断剂或β
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肾上腺素能受体拮抗剂阻断扩张型心肌病期间刺激的肾上腺素能系统介质的作用并降低心率。盐皮质激素受体拮抗剂阻断醛固酮的结合并降低血压。当心律紊乱严重时，开具抗心律失常药物如胺碘酮。也可以考虑植入起搏器和/或自动除颤器。在最严重的病例中，患者可受益于心脏移植(Ponikowski,et al.2016,European Heart Journal,37,2129
‑
2200)。
[0005]因此，这些方法对于治疗DMD和肌联蛋白病的扩张型心肌病也是有效的。目前对于这些病理没有治愈性治疗。通常在DMD中开具的皮质类固醇治疗由于减少炎症而允许改进中期肌肉表型，但是其对心脏表型的作用是有争议的。与肌营养不良蛋白和肌联蛋白相关的DMD的治疗需要每年和系统的心脏检查(心电图和超声)。特别地，当作为从儿童期起的预
防性治疗时，培哚普利(一种血管紧张素转化酶抑制剂)已经显示出降低DMD患者的死亡率(Duboc,D.,et al.2005.Journal of the American College of Cardiology 45,855
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857)。
[0006]在治疗DMD的心脏损伤中测试的分子主要是已经用于治疗心力衰竭的分子。其它疗法旨在通过减少纤维化来治疗肌肉和心脏损伤。这是潘瑞鲁单抗(II期试验NCT02606136)，一种抗结缔组织生长因子的单克隆抗体，和他莫昔芬(I期试验NCT02835079和III期试验NCT03354039)，一种抗雌激素的情况。因此，医学上需要开发用于扩张型心肌病的新治疗策略。
[0007]核因子红细胞相关因子2(NRF2)也称为核因子红细胞衍生
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样2，是由NFE2L2基因编码的转录因子。NRF2是碱性亮氨酸拉链蛋白，其调节防止由损伤和炎症引发的氧化损伤的抗氧化蛋白的表达(Baird,L.and Dinkova
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Kostova,A.T,2011,Arch Toxicol 85,241
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272)。在正常条件下，通过Keap1和cullin3(Cul3)将NRF2保持在细胞质中，其通过蛋白酶体中的泛素化降解NRF2。氧化应激或亲电应激破坏Keap1中的关键半胱氨酸残基，这导致Keap1
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Cul3泛素化系统的破坏。当NRF2未被泛素化时，它被转运到核中，在核中它可以与小的Maf蛋白(MAFF、MAFG、MAFK)之一结合，并与许多抗氧化基因的上游启动子区域中的ARE结合，以刺激抗氧化基因的转录(Zhi
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Dong Ge et al.2019,Int Heart J；60(3):512
‑
520)。
[0008]NRF2活性由许多机制调节，表明严格控制对于正常细胞功能是必需的，并且NRF2的低活化和高活化二者均表明在心血管疾病的不同方面发挥作用。特别地，一些研究已经显示NRF2活化可以减少纤维化，特别是通过抑制ROS/TGFβ1/Smad2/3途径(Cai,S.A.,et al.2018,Frontiers in pharmacology 9；Chen,R.
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R.,et al.2019,Chemico
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Biological Interactions 302,11
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21；Xian,S.et al.2020.Exp Ther Med 19,2067
‑
2074)。已表明NRF2降解与小鼠中扩张型心肌病表型有关(Jiang,X.et al.2018.Redox Biol,19,134
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146)。然而，NRF2激活剂用于治疗特定扩张型心肌病的用途从未被公开。
[0009]专利技术概述
[0010]本专利技术人开发并表征了遗传诱导的扩张型心肌病DeltaMex5的小鼠模型，其中缺失肌联蛋白的倒数第二个外显子。使用作为扩张型心肌病的严重模型的DeltaMex5小鼠模型，本专利技术人已经表明NRF2的过表达诱导心脏纤维化和心脏肥大的显著改进，表明NRF2的活化代表扩张型心肌病的治疗方法，特别是遗传诱导的心肌病(如肌联蛋白病)，对于遗传诱导的心肌病如肌联蛋白病，由于基因的大小，基因转移方法是不可能的。
[0011]本专利技术涉及用于治疗扩张型心肌病的NRF2激活剂，优选包含编码人NRF2或变体的转基因的核酸构建体。在一个优选实施方案中，所述核酸构建体包含选自下组的心脏启本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.NRF2激活剂，其用于治疗扩张型心肌病。2.根据权利要求1所述的用于用途的NRF2激活剂，其是包含编码人NRF2或其变体的转基因的核酸构建体。3.根据权利要求2所述的用于用途的NRF2激活剂，其中所述核酸构建体包含选自下组的心脏启动子：人心肌肌钙蛋白T启动子(TNNT2)、α肌球蛋白重链启动子(α
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MHC)、肌球蛋白轻链2v启动子(MLC
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2v)、肌球蛋白轻链2a启动子(MLC
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2a)、CARP基因启动子、α
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心肌肌动蛋白启动子、α
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原肌球蛋白启动子、心肌肌钙蛋白C启动子、心肌肌球蛋白结合蛋白C启动子和肉瘤/内质网Ca
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ATP酶(SERCA)启动子、结蛋白启动子、MH启动子、CK8启动子和MHCK7启动子；优选包含人心肌肌钙蛋白T启动子。4.根据权利要求3所述的用于用途的NRF2激活剂，其中所述启动子是人心肌肌钙蛋白T启动子。5.根据权利要求2
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4任一项所述的用于用途的NRF2激活剂，其中所述核酸构建体被包装到病毒颗粒中。6.根据权利要求5所述的用于用途的NRF2激活剂，其中所述病毒颗粒是腺相关病毒(AAV)颗粒。7.根据权利要求6所述的用于用途的NRF2激活剂，其中被包装入AAV颗粒的所述核酸构建体包含AAV
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2血清型的5
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ITR和3
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ITR或对应于所选AAV颗粒血清型的5

【专利技术属性】
技术研发人员：I，
申请(专利权)人：埃夫里瓦尔德艾松大学国家医疗保健研究所，
类型：发明
国别省市：