慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α-地中海贫血药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α

【技术实现步骤摘要】
慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗
α
‑
地中海贫血药物中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α
‑
地中海贫血药物中的应用。

技术介绍

[0002]地中海贫血是一种世界上最常见的单基因常染色体隐性遗传性疾病，以小细胞低色素性贫血为特征，流行于地中海国家、东南亚、非洲、中东和印度。
[0003]α
‑
地中海贫血是由于α
‑
珠蛋白基因突变或缺失致使α
‑
珠蛋白生成减少或缺如，最终导致溶血性贫血。正常人的α
‑
珠蛋白合成是由16号染色体（16p13.3）上4个α
‑
珠蛋白基因（每条染色体上有2个α
‑
珠蛋白基因，α1和α2）调控的，这种基因型通常被写为αα/αα。在胎儿和成人的血红蛋白合成中α
‑
珠蛋白链都是必不可少的。不平衡的交叉或重组引起大的α
‑
珠蛋白基因片段缺失，从而导致α
‑
地中海贫血综合症，但少数是由于突变引起的。α
‑
地中海贫血分为缺失型和非缺失型。据估计，全球约5%的人口携带至少一个α
‑
珠蛋白基因变异。
[0004]α
‑
地中海贫血临床表现包括从几乎无症状，到轻度的小细胞低色素性贫血，直到致死的溶血性贫血。临床表型严重程度与四个α
‑
珠蛋白基因变异的拷贝数直接相关。一个α
‑
珠蛋白基因缺失（
‑
α/αα）称为“静止型α
‑
地中海贫血”。两个α
‑
珠蛋白基因缺失（
‑‑
/αα或
‑
α/
‑
α）就是通常所说的
ꢀ“
轻型α
‑
地中海贫血”，表现为小细胞增多与血红蛋白减少，但很少出现贫血症状（一般无贫血）。上述这两种情况通常不需要治疗。三个α
‑
珠蛋白基因缺失（
‑‑
/
‑
α）导致HbH (β4)血红蛋白的大量产生，也被称为“HbH病
”ꢀ
，表现为低色素性中重度溶血性贫血和脾肿大。缺失型的HbH病患者需要间歇性的输血治疗，尤其在疾病间歇发作的时候，但是有些患者也需要定期的输血治疗。四个α
‑
珠蛋白基因全部缺失（
‑‑
/
‑‑
）导致Hb Bart
’
s (γ4) 血红蛋白的产生，个体无任何α
‑
珠蛋白表达，导致胎儿水肿和新生儿阶段的死亡，被称为“Hb Bart
’
s胎儿水肿综合症”。中国南方最常见的缺失类型是东南亚缺失（
‑‑
SEA
）。
[0005]非缺失型α
‑
地中海贫血是由α
‑
珠蛋白基因突变导致的α珠蛋白基因缺陷 (α
T
) 所致。非缺失型突变能够生成不稳定的血红蛋白，通常沉淀在红细胞内，形成不溶的包涵体，对红细胞有较强的破坏作用而导致溶血性贫血。中国南方常见的非缺失类型是Hb Constant Spring (HbCS)、Hb Quong Sze (HbQS) 和 Hb Westmead (HbWS)。HbCS是最普遍的非缺失型突变，高发于中国和部分东南亚国家。
[0006]非缺失型α
‑
地中海贫血的临床表现多种多样，通常比缺失型α
‑
地中海贫血更加严重。非缺失型“HbH病”（
‑‑
/α
T
α）患者经常从童年开始就有严重的贫血，脾肿大，铁负载，以及各种各样的临床并发症，包括感染，腿溃疡，胆结石，叶酸缺乏，血栓。在我国，HbH病中HbCS (
‑‑
SEA
/α
CS
α)、HbQS (
‑‑
SEA
/α
QS
α) 和 HbWS (
‑‑
SEA
/α
WS
α) 约占总数的30%，患者除了依靠长期输血或者骨髓移植治疗外，无任何治疗手段，难度及费用与输血依赖性β
‑
地中海贫血的治疗相当。
[0007]输血治疗是目前临床缓解中、重度地中海贫血症状的常规方案，但是长期大量输血却会加重患者铁离子沉积，最终因铁超载导致器官衰竭而死亡。为了防止铁超载相关风险，患者必须坚持同时接受铁螯合治疗方案。长期大量输血，不仅严重降低了患者的生存质量，而且给家庭和社会带来了巨大的负担。
[0008]异体骨髓移植也存在一些重大风险，如移植过程中的感染、移植失败和移植物抗宿主病（GvHD），其中一些甚至是致命的。但由于合适供者来源受限及费用昂贵，大部分患者难以得到及时的救治。因此基于基因治疗的自体造血干细胞移植目前正成为“一站式”治愈α
‑
地中海贫血的新希望，其最大的优势在于不需要骨髓捐赠和异体移植，而且有望实现一次治疗永久性“治愈”，可取代异体骨髓移植的治疗方案。
[0009]目前针对α
‑
地中海贫血的基因治疗，在国际上未受到重视，由于普遍认为轻型α
‑
地中海贫血无需治疗，重型α
‑
地中海贫血新生儿期无法存活，并且低估了大量输血依赖的非缺失型HbH α
‑
地中海贫血患者的治疗需求，导致研发资金投入极少，更没有相关基因治疗药物的研发。但是，在我国南方地区包括广东省，广西省和云南省等，α
‑
地中海贫血是影响最大，发病率最高的遗传病之一，并且其基因突变类型具有明显的种族特征和地域差异，临床需求迫切。

技术实现思路

[0010]解决的技术问题：针对上述技术问题，本专利技术提供一种慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α
‑
地中海贫血药物中的应用，有望能一次性治愈，使中重型α
‑
地中海贫血患者摆脱输血依赖。
[0011]技术方案：慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α
‑
地中海贫血药物中的应用，所述慢病毒载体包括pCCL
‑
SIN
‑
cPPT
‑
MCS
‑
RbPA骨架、A调控序列、第一α
‑
globin表达盒和第二α
‑
globin表达盒，且 A调控序列、第一α
‑
globin表达盒和第二α
‑
globin表达盒从5
’
端到3
’
端顺次连接，所述第一α
‑
globin表达盒包括依次连接的B启动子序列、C增强子序列和D1基因序列，所述第二α
‑
glob本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.慢病毒载体LentilAlpha在制备治疗α
‑
地中海贫血药物中的应用，其特征在于：所述慢病毒载体包括pCCL
‑
SIN
‑
cPPT
‑
MCS
‑
RbPA骨架、A调控序列、第一α
‑
globin表达盒和第二α
‑
globin表达盒，且 A调控序列、第一α
‑
globin表达盒和第二α
‑
globin表达盒从5
’
端到3
’
端顺次连接，所述第一α
‑
globin表达盒包括依次连接的B启动子序列、C增强子序列和D1基因序列，所述第二α
‑
globin表达盒包括依次连接的B启动子序列、C增强子序列和D2基因序列，所述A调控序列为2.7kb β
‑
LCR调控序列，其中β
‑
LCR为β
‑
globin locus control region的简写；所述B启动子序列为β
‑
globin启动子序列；所述C增强子序列为chimeric intron增强子序列；所述D1基因序列为经氨基酸密码子优化的人α
‑
globin基因编码区序列，所述D2基因序列为人α
‑
globin基因编码区序列。2.根据权利要求1所述的慢病毒载体LentilA...

【专利技术属性】
技术研发人员：董文吉，张艳君，刘子瑾，董祖伊，赵忠亮，
申请(专利权)人：中吉智药南京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：