【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过诱导抗肌萎缩蛋白相关蛋白调节元件内的突变增强细胞中抗肌萎缩蛋白相关蛋白表达及其治疗用途
[0001]本专利技术涉及用于通过使用基因编辑酶在包含抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)调节元件的靶序列中诱导突变来增强抗肌萎缩蛋白相关蛋白在细胞中表达的组合物。本专利技术还涉及其用于治疗抗肌萎缩蛋白病的治疗用途。
技术介绍
[0002]杜兴氏肌营养不良症(DMD)是由抗肌萎缩蛋白基因中的突变引起的致死性X连锁神经肌肉病症。该疾病影响5000名新生男性中的1名,并且是人群中最常见的隐性病症之一。在缺乏抗肌萎缩蛋白的情况下,细胞骨架和细胞外基质之间的连接受损,导致肌肉强度/柔韧性和稳定性的丧失。DMD患者在12岁时局限于轮椅,并且通常由于心肺衰竭而死于其第二至第四个十年的生命中。尽管在基于基因、基于细胞和药理学的策略中已经取得了相当大的进展,但是目前对于DMD仍没有有效的治疗。
[0003]在基于基因的策略中,外显子跳跃和终止密码子通读显示有限的功效并且仅适用于特定的DMD患者亚组。外显子跳跃的使用通常是指使用合成的反义寡核苷酸来抑制剪接增强子位点以防止特定的外显子参与剪接(Mann CJ,et al.Proc Natl Acad Sci U S A.2001Jan 2;98(1):42
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7)。外显子跳跃方法只能用于某些可能具有缺失的患者,其中阅读框可以通过跳跃邻近该缺失的额外外显子来恢复(Perry BShieh,Neurotherapeutics.2018Oct;15(4):840
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于增强细胞中抗肌萎缩蛋白相关蛋白表达的方法,其包括向细胞中引入包含至少一种基因编辑酶的组合物,所述基因编辑酶能够在靶序列内诱导位点特异性突变,所述靶序列包含至少一个选自下组的抗肌萎缩蛋白相关蛋白基因的阻遏物结合位点:Ets
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阻遏物因子(ERF)结合位点、同源盒蛋白engrailed
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1(EN1)结合位点2、Let7c结合位点和miR
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196b结合位点,其中所述突变破坏阻遏物结合位点而不缺失整个阻遏物结合位点序列。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述阻遏物结合位点选自下组:由序列CGGAA组成的ERF结合位点、由序列GTAGTGG组成的EN1结合位点2、由SEQ ID NO:1组成的Let7c结合位点和由序列SEQ ID NO:2组成的miR
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196b结合位点。3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述阻遏物结合位点是Let7c结合位点。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法,其中所述基因编辑酶选自下组:位点特异性核酸酶、碱基编辑器和引物编辑器。5.根据权利要求4所述的方法,其中所述基因编辑酶是包含向导RNA的CRISPR/Cas基因编辑酶,所述向导RNA包含与所述靶序列互补的序列,所述靶序列包含抗肌萎缩蛋白相关蛋白阻遏结合位点。6.根据权利要求5所述的方法,其中所述gRNA选自下组:SEQ ID NO:3
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17和25。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的方法,其中所述组合物包含至少两种作为序列特异性核酸酶的基因编辑酶,并且其中所述核酸酶以这样的方式连续使用:即第一序列特异性核酸酶诱导靶序列内的第一位点特异性突变事件,并且一旦修复了第一突变事件,则第二序列特异性核酸酶用于诱导靶序列内的第二位点特异性突变事件。8.用于增强抗肌萎缩蛋白相关蛋白表达的组合物,其包含至少一种能够在靶序列内诱导位点特异性突变的基因编辑酶,所述靶序列包含选自下组的抗肌萎缩蛋白相关蛋白基因的阻遏物结合位点:由序列CGGAA组成的Ets
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阻遏物因子(ERF)结合位点、由序列GTAGTGG组成的同源盒蛋白engrailed
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1(EN1)结合位点2、由SEQ ID NO:1组成的Let7c...
【专利技术属性】
技术研发人员:M,
申请(专利权)人:埃夫里瓦尔德艾松大学国家医疗保健研究所,
类型:发明
国别省市:
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