一种利用CRISPR-Cas13敲降目的基因的载体及其应用方法技术

本发明专利技术公开了一种同时表达Cas13b和针对拟下调靶基因sgRNA的载体及其在制备转基因动物中的应用。针对目的基因，运用CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种利用CRISPR
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Cas13敲降目的基因的载体及其应用方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种CRISPR/Cas13敲降目的基因的载体，其包含DNA片段Rosa
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26
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U6
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Luc3.12 gRNA1
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Ins
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CAG
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Cas13b
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WPRE
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polyA，与利用其构建动物模型的方法及其在下调目的基因的应用。

技术介绍

[0002]聚簇规则间隔短回文重复序列(Clustered regular interspaced short palindromic repeats,CRISPRs)是一种规则间隔短重复序列，包含21
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37nt直接重复序列(Direct repeats,DR)，其广泛存在于原核生物中，包括几乎所有的古生菌和许多细菌基因组。它与CRISPR相关蛋白(Cas)的蛋白质家族一起，形成了原核生物的获得性免疫系统，以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因片段，包括Rosa
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26基因同源序列、Cas13b表达框、sgRNA1表达框。2.根据权利要求1所述的基因片段，所述Cas13b表达框包含如下元件：启动子1，Cas13b蛋白，终止序列；所述sgRNA1表达框包含如下元件：启动子2，sgRNA1，crRNA。3.根据权利要求1所述基因片段，其特征在于，所述Rosa
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26基因同源序列为Rosa
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26基因exon1与exon2之间区域上下游同源的序列。4.根据权利要求2或3所述启动子1、2选自CMV启动子、CAG启动子、Trp启动子、U6启动子、Lac启动子、T7启动子之一。5.根据权利要求1
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4之一所述的基因片段，所述基因片段结构可以为Rosa
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26
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U6
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Luc3.12 gRNA1
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Ins
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CAG
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Cas13b
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WPRE
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polyA。6.一种特异性靶向Rosa
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26基因的sgRNA2，其特征在于，所述sgRNA2的靶位点序列如SEQ NO:2所示。7.一种用于定点插入如...

【专利技术属性】
技术研发人员：费俭，刘宇慧，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：