一种斑马鱼心肌特异表达钙离子信号指示探针品系的构建方法及其应用技术

本发明专利技术属于动物模型构建和钙离子检测分析技术领域，具体涉及一种斑马鱼心肌特异表达钙离子信号指示探针品系的构建方法及其应用。具体的，本发明专利技术利用tol2转基因系统，在GCaMP6s报告基因的前面加一段心肌组织中特异性表达的启动子序列(myl7)，构建了心肌特异表达钙离子浓度的指示探针品系鱼，可以在心肌组织中表达荧光探针，结合斑马鱼活体成像技术，实时监测心肌组织中钙离子的浓度情况，因此可用于研究生物体心肌细胞钙信号的变化、系统的生理功能和发育机制以及相关药物筛选，因此具有良好的实际应用之价值。的实际应用之价值。的实际应用之价值。

【技术实现步骤摘要】
一种斑马鱼心肌特异表达钙离子信号指示探针品系的构建方法及其应用


[0001]本专利技术属于动物模型构建和钙离子检测分析
，具体涉及一种斑马鱼心肌特异表达钙离子信号指示探针品系的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]GCaMP6s是单个绿色荧光蛋白(GFP)、钙调蛋白(CaM)和平滑肌细胞肌球蛋白轻链激酶片段M13融合的产物。其中GFP是环状序列改变的增强型绿色荧光蛋白(EGPF)，用六肽GGTGGS将EGFP的N末端与C末端连接起来，同时将EGFP氨基酸序列上特定位置的肽键断开，产生新的N末端与C末端。C末端结合CaM，N末端结合M13片段，作为CaM结合的靶序列。
[0004]CaM结合钙离子后发生变构，环绕在M13肽周围，以其铰链区和M13结合，Ca
2+
‑
CaM
‑
M13相互作用，引起EGFP生色基团环本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种斑马鱼心肌特异表达钙离子信号指示探针品系的构建方法，所述方法包括：S1、构建重组质粒myl7:GCaMP6s
‑
CAAX，具体的，以转座载体pTol2为骨架，将myl7
‑
GCamp6s片段插入其中获得；S2、将上述重组质粒myl7:GCaMP6s
‑
CAAX与Tol2转座酶mRNA转入斑马鱼胚胎，筛选并鉴定得稳定遗传的转基因斑马鱼品系即为斑马鱼心肌特异表达钙离子指示探针品系。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中，GCamp6s基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；myl7基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述重组质粒myl7:GCaMP6s
‑
CAAX的核苷酸序列如SEQ.ID NO 3所示。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中，筛选并鉴定的具体方法包括：利用荧光显微镜斑马鱼胚胎进行筛选，在胚胎内表达绿色荧光蛋白的个体被认定为疑似F0个体，饲养疑似F0个体至具备繁殖能力，并将具备繁殖能力的F0代个体与野生型个体进行交配，获得F1代个体；利用荧光显微镜对F1代个体进行筛选，筛选出在心肌细胞内表达绿色荧光蛋白的个体，确定F1代阳性个体，并通过western blot鉴定GCaMP6s基因是否插入到F1代阳性个体基因组中，以便得到稳定遗传的转基因斑马鱼品系。4.权利要求1
‑
3任一项所述构建方法在斑马鱼钙成像分析及钙离子浓度监测中的应用。5.一种斑马鱼心肌组织钙成像分析及钙离子浓度监测的方法，其特征在于，所述方法包括：S1、将携带有GCaMP6s和DsRed表达的斑马鱼(Tg(myl7:GCaMP6s,myl7:DsRed
‑
NLS))胚胎首先置于2,3
‑
丁烷二酮一肟溶液中，然后再摆放入甲基纤维素中；S2、选择特定激发激光波长并设定延时成像条件参数，对步骤S1处理后的斑马鱼胚胎的心脏区域进行延...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雷，李娜，董一洁，艾康，陈秀丽，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：