本发明专利技术涉及基因诊断技术领域，尤其是涉及SFRP2基因单一特定位点甲基化检测的应用、肿瘤诊断试剂及系统。本发明专利技术首次将SFRP2基因单一特定位点chr4:153781309的甲基化作为生物标志物用于检测、预测或监测肿瘤发展产品的制备中，与其他已知的甲基化位点相比，可有效检测肿瘤患者。进一步地，在上述位点chr4:153781309甲基化检测的基础上，本发明专利技术将该特定位点甲基化和SFRP2基因其他位点甲基化组合检测，可显著提高检测灵敏度和特异性。可显著提高检测灵敏度和特异性。可显著提高检测灵敏度和特异性。
【技术实现步骤摘要】
SFRP2基因单一特定位点甲基化检测的应用、肿瘤诊断试剂及系统
[0001]本专利技术涉及基因诊断
，尤其是涉及SFRP2基因单一特定位点甲基化检测的应用、肿瘤诊断试剂及系统。
技术介绍
[0002]近年来，DNA甲基化被认为是最有前景的肿瘤标志物。DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶作用下，胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团，从而改变DNA的功能。诸多研究证实，DNA甲基化参与调控肿瘤的发生发展全过程，正常细胞中抑癌基因启动子区域处于低甲基化状态，下游DNA正常表达抑癌蛋白，而肿瘤细胞中启动子区域表现为高甲基化，抑制了抑癌基因正常表达，所以学界普遍认为DNA甲基化改变往往是先于肿瘤的发生，或是最早能检测到的肿瘤相关指标。
[0003]SFRP2甲基化已被证实与肠癌具有相关性，具备肠癌标志物的潜力；然而，其临床诊断效果却参差不齐，例如，(1)采用不同方法对SFRP2基因进行检测时其灵敏度特异性有明显差异，在已见报道中，杂交方法的检测灵敏度和特异性分别为61.1％和77.7％，而荧光法检测时，对应的灵敏度和特异性则分别为86.3％和77.3％；(2)不同研究中SFRP2甲基化用于肠癌诊断的灵敏度和特异性存在明显差异，灵敏度和特异性浮动范围较大；有研究报道SFRP2甲基化用于肠癌检测的灵敏度为77％～90％，特异性为77％，也有研究结果显示SFRP2启动子区域甲基化用于肠癌检测的灵敏度为57％，特异性为90％。
[0004]导致上述灵敏度和特异性差异的原因，主要是因为现有检测技术实际检测的是SFRP2基因上一段区域的整体甲基化水平，而随着对甲基化研究的深入，越来越多的研究发现基因不同区域DNA甲基化表现出的临床特异性有很大差别，甚至是同一区段内，单一甲基化位点就表现出显著的生物学意义。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于，提供特异性和灵敏度足够明显的SFRP2基因定点甲基化作为第一生物标志物在制备检测、预测或监测肿瘤发展产品中的应用，以提高检测的稳定性。
[0007]本专利技术的另一个目的在于，基于上述应用，提供检测SFRP2基因定点甲基化的试剂、试剂盒以及检测系统，用于实现肿瘤的早期快速筛查。
[0008]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供了SFRP2基因单一特定位点甲基化作为第一生物标志物在制备检测、预测或监测肿瘤发展产品中的应用，所述SFRP2基因单一特定位点为chr4:153781309。
[0010]第二方面，本专利技术提供了SFRP2基因特定位点chr4:153781309甲基化和第二生物标志物在制备检测、预测或监测肿瘤发展产品中的应用，所述第二生物标志物选自以下(
ⅰ
)
和/或(
ⅱ
)：
[0011](
ⅰ
)(a)～(d)中至少一个SFRP2基因的特定位点甲基化，(a)SFRP2基因特定位点chr4:153789201，(b)SFRP2基因特定位点chr4:153789431，(c)SFRP2基因特定位点chr4:153788844，(d)SFRP2基因特定位点chr4:153788604；
[0012](
ⅱ
)(e)～(f)中至少一段SFRP2基因区域甲基化，(e)SFRP2基因区域chr4:153786860～153789009，(f)SFRP2基因区域chr4:153789010～153789700。
[0013]第三方面，本专利技术提供了一种肿瘤诊断试剂，所述试剂包含用于检测SFRP2基因单一特定位点chr4:153781309、chr4:153789201、chr4:153789431、chr4:153788844或chr4:153788604甲基化水平的特异性引物对，特异性引物对包括正向引物和捕获引物：
[0014]其中检测SFRP2基因特定位点chr4:153781309的正向引物具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；
[0015]检测SFRP2基因特定位点chr4:153789201的正向引物具有SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.19所示的核苷酸序列；
[0016]检测SFRP2基因特定位点chr4:153789431的正向引物具有SEQ ID No.10所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.20所示的核苷酸序列；
[0017]检测SFRP2基因特定位点chr4:153788844的正向引物具有SEQ ID No.13所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.21所示的核苷酸序列；
[0018]检测SFRP2基因特定位点chr4:153788604的正向引物具有SEQ ID No.16所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.22所示的核苷酸序列；
[0019]优选地，所述诊断试剂还包括反向引物。
[0020]进一步优选地，所述反向引物的核苷酸序列包含：GCCTGTCAGCCAACGGTATTCATC(SEQ ID No.3)。
[0021]可选实施方式中，用于检测SFRP2基因特定位点chr4:153781309的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0022]可选实施方式中，所述试剂还包含用于检测第二生物标志物的特异性引物对和探针，所述用于检测第二生物标志物的特异性引物对和探针包括(Ⅰ)～(
Ⅵ
)中至少一种：
[0023](Ⅰ)用于检测(a)SFRP2基因特定位点chr4:153789201甲基化的捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；
[0024](Ⅱ)用于检测(b)SFRP2基因特定位点chr4:153789431甲基化的捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；
[0025](Ⅲ)用于检测(c)SFRP2基因特定位点chr4:153788844甲基化的捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示；
[0026](Ⅳ)用于检测(d)SFRP2基因特定位点chr4:153788604甲基化的捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示。
[0027]可选实施方式中，所述探针序列标记有至少一个荧光基团；所述荧光基团选自FAM、VIC、CY5、HEX、JOE、ROX、TAMRA、TET、TexasRed或CY3。
[0028]基于第三方面，第四方面，本专利技术提供了一种本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.SFRP2基因单一特定位点甲基化作为第一生物标志物在制备检测、预测或监测肿瘤发展产品中的应用，所述SFRP2基因单一特定位点为chr4:153781309。2.SFRP2基因特定位点chr4:153781309甲基化和第二生物标志物在制备检测、预测或监测肿瘤发展产品中的应用，所述第二生物标志物选自以下(
ⅰ
)和/或(
ⅱ
)：(
ⅰ
)(a)～(d)中至少一个SFRP2基因的特定位点甲基化，(a)SFRP2基因特定位点chr4:153789201，(b)SFRP2基因特定位点chr4:153789431，(c)SFRP2基因特定位点chr4:153788844，(d)SFRP2基因特定位点chr4:153788604；(
ⅱ
)(e)～(f)中至少一段SFRP2基因区域甲基化，(e)SFRP2基因区域chr4:153786860～153789009，(f)SFRP2基因区域chr4:153789010～153789700。3.一种肿瘤诊断试剂，其特征在于，所述试剂包含用于检测SFRP2基因单一特定位点chr4:153781309、chr4:153789201、chr4:153789431、chr4:153788844或chr4:153788604甲基化水平的特异性引物对，特异性引物对包括正向引物和捕获引物：其中检测SFRP2基因特定位点chr4:153781309的正向引物具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；检测SFRP2基因特定位点chr4:153789201的正向引物具有SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.19所示的核苷酸序列；检测SFRP2基因特定位点chr4:153789431的正向引物具有SEQ ID No.10所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.20所示的核苷酸序列；检测SFRP2基因特定位点chr4:153788844的正向引物具有SEQ ID No.13所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.21所示的核苷酸序列；检测SFRP2基因特定位点chr4:153788604的正向引物具有SEQ ID No.16所示的核苷酸序列，捕获引物具有SEQ ID No.22所示的核苷酸序列；优选地，还包括反向引物；进一步优选地，所述反向引物的核苷酸序列包含：GCCTGTCAGCCAACGG...
【专利技术属性】
技术研发人员：甄林青，杨浩，徐高连，徐宏，古宏晨，钱晓华，
申请(专利权)人：上海慧众同康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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