【技术实现步骤摘要】
一种SFRP2甲基化检测试剂盒及其应用
[0001]本专利技术属于生物
,涉及一种SFRP2甲基化检测试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]结直肠癌(CRC)是常见的胃肠道恶性肿瘤,随着人们生活习惯的改变,结直肠癌的发病率和死亡率明显上升,严重威胁着人类健康。结肠直肠癌早期症状不明显,随着肿瘤增大而表现出排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状,晚期则发展为贫血、体重减轻等全身症状。
[0003]目前,临床主要采用粪便隐血试验(FOBT)和结肠镜检查进行结直肠癌筛查。作为常规的筛查方法,FOBT易受食物、药物和其他因素的影响,假阳性率高、稳定性较差。结肠镜检查是侵入性检查手段,需要肠道准备确保大肠管腔视野良好,同时,结肠镜检查存在一系列并发症,如肠活检部位容易出现肠穿孔、腹膜炎等。因此,结肠镜检查患者依从性较差。目前急需依从性高、检测方便、结果准确的结直肠癌检测方法以提高筛查准确性。
[0004]DNA甲基化是指在不改变DNA序列的前提下,在CpG岛5
’
端胞嘧啶修饰甲基化基团,造成DNA表达沉默,是目前公认的肿瘤发生机制之一。DNA异常甲基化的发生通常早于细胞癌变,因此及时检测DNA甲基化可以实现恶性肿瘤的早期预警,为肿瘤的早期筛查、早期诊断、预后和治疗评估提供重要依据。
[0005]最近研究发现,SFRP2基因是肿瘤发生通路—Wnt信号通路中的可溶性调整基因之一,在大肠癌、结肠腺瘤和隐窝病灶中发生频繁的甲基化,从而使基因沉默。正常肠道黏膜每天都有大 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种SFRP2甲基化检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括甲基化依赖型限制性内切酶、捕获寡核苷酸和通用引物;所述捕获寡核苷酸从5
’
端到3
’
端依次包括第一通用序列、折叠序列和结合捕获序列;所述折叠序列与SFRP2甲基化位点经甲基化依赖型限制性内切酶酶切后的5
’
末端序列至少部分相同;所述结合捕获序列与所检测的SFRP2甲基化位点所在的片段区域特异性结合。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述捕获寡核苷酸还包括核酸延伸阻断位点;优选地,所述核酸延伸阻断位点位于折叠序列的3
’
端;优选地,所述核酸延伸阻断位点修饰有Spacer、硫代基团或尿嘧啶碱基中的任意一种或至少两种的组合;优选地,所述折叠序列修饰有核酸类似物;优选地,所述核酸类似物包括肽核酸、锁核酸、转置碱基、2'
‑
O,4'
‑
C
‑
methylene bridge RNA、2
’‑
O
‑
Methyl RNA或2
’‑
Fluoro RNA中的任意一种或至少两种的组合。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述通用引物的核酸序列与捕获寡核苷酸的第一通用序列相同或部分相同;优选地,所述甲基化依赖型限制性内切酶包括GlaI、FspEI、MspJI、LpnPI、AspBHI或MseI中的任意一种或至少两种的组合。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括SFRP2甲基化特异性引物;优选地,所述试剂盒还包括检测探针;优选地,所述检测探针标记有荧光基团和/或淬灭基团;优选地,所述荧光基团标记在检测探针的5
’
端;优选地,所述淬灭基团标记在检测探针的3
’
端;优选地,所述荧光基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的任意一种;优选地,所述淬灭基团包括BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的任意一种。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐宏,杨浩,徐高连,古宏晨,
申请(专利权)人:上海慧众同康生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。