本发明专利技术涉及基因诊断技术领域，尤其是涉及SDC2基因单一特定位点甲基化检测的应用、肠癌诊断试剂及系统。本发明专利技术首次将选自SDC2基因的四个单一特定位点：chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590或chr8：96494113的甲基化作为生物标志物用于检测、预测或监测结直肠癌发展产品的制备中，具有显著的测灵敏度和特异性，可有效检测结直肠癌及结直肠进展期腺瘤患者。瘤患者。瘤患者。
【技术实现步骤摘要】
SDC2基因单一特定位点甲基化检测的应用、肠癌诊断试剂及系统
[0001]本专利技术涉及基因诊断
，尤其是涉及SDC2基因单一特定位点甲基化检测的应用、肠癌诊断试剂及系统。
技术介绍
[0002]近年来，DNA甲基化被认为是最有前景的肿瘤标志物。DNA甲基化是指，在DNA甲基化转移酶作用下使DNA胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团，从而改变DNA的功能。
[0003]诸多研究证实，DNA甲基化参与调控肿瘤的发生发展全过程。正常细胞中抑癌基因启动子区域处于低甲基化状态，下游DNA正常表达抑癌蛋白，而肿瘤细胞中启动子区域表现为高甲基化，抑制了抑癌基因正常表达，所以学界普遍认为DNA甲基化改变往往是先于肿瘤的发生，或是最早能检测到的肿瘤相关指标。
[0004]现有技术已利用检测基因的甲基化水平来检测结直肠癌或其早期病变，然而现有技术均是对目标基因的一段区域内的平均甲基化水平进行检测，存在操作繁琐、灵敏度和特异性不高等问题。例如Niu F et al.2017，对SDC2基因进行甲基化检测，在特异性为93.3％的条件下，对肠癌的检测灵敏度仅为81.1％。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于，提供将选自SDC2基因的单一特定位点甲基化作为生物标志物应用于制备检测、预测或监测结直肠癌发展的产品中，同时提供配套的结直肠癌诊断试剂、结直肠癌诊断试剂盒和检测、预测或监测结直肠癌发展的系统，以缓解了现有技术中具有广泛推广潜力的结直肠癌早筛技术的空白。
[0007]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供SDC2基因单一特定位点甲基化在制备检测、预测或监测结直肠癌发展产品中的应用，所述SDC2基因单一特定位点选自chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590或chr8：96494113。
[0009]第二方面，本专利技术提供结直肠癌诊断试剂，所述结直肠癌诊断试剂包含用于检测SDC2基因中的单一特定位点chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590或chr8：96494113甲基化水平的特异性引物对和探针，特异性引物对包括正向引物和捕获引物；
[0010]其中检测SDC2基因特定位点chr8：96494187的第一正向引物具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，第一捕获引物具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；
[0011]检测SDC2基因特定位点chr8：96493501的第二正向引物具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，第二捕获引物具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；
[0012]检测SDC2基因特定位点chr8：96493590的第三正向引物具有SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，第三捕获引物具有SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；
[0013]检测SDC2基因特定位点chr8：96494113的第四正向引物具有SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，第四捕获引物具有SEQ ID No.8所示的核苷酸序列。
[0014]优选地，还包括反向引物。
[0015]进一步优选地，所述反向引物具有SEQ ID No.9所示的核苷酸序列。
[0016]在可选的实施方式中，用于检测SDC2基因特定位点chr8：96494187的第一正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，第一捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，第一探针的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。
[0017]在可选的实施方式中，用于检测SDC2基因特定位点chr8：96493501的第二正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，第二捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示，第二探针的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示。
[0018]在可选的实施方式中，用于检测SDC2基因特定位点chr8：96493590的第三正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，第三捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示，第三探针的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示。
[0019]在可选的实施方式中，用于检测SDC2基因特定位点chr8：96494113的第四正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，第四捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示，第四探针的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示。
[0020]在可选的实施方式中，所述探针序列标记有至少一个荧光基团；所述荧光基团选自FAM、VIC、CY5、HEX、JOE、ROX、TAMRA、TET、TexasRed或CY3。
[0021]第三方面，本专利技术提供结直肠癌或结直肠进展期腺瘤诊断试剂盒，所述试剂盒包括前述实施方式任一项所述的结直肠癌诊断试剂。
[0022]第四方面，本专利技术提供检测、预测或监测结直肠癌发展的系统，所述系统包括：
[0023]检测模块，用于使用前述实施方式任一项所述试剂或前述实施方式所述试剂盒检测已知样本和待测样本基因甲基化水平；
[0024]比对模块，用于根据已知样本的甲基化状态数据确定判断参考数据，将检测模块获得的待测样本的SDC2基因甲基化状态与判断参考数据对比，根据二者的接近程度输出结直肠癌发展的评估结果；
[0025]所述参考数据来源于以下至少一种人群：(a)非结直肠癌患者，(b)结直肠癌患者。
[0026]在可选的实施方式中，所述待测样本来源于检测人群的粪便、组织或体液。
[0027]优选地，所述待测样本来源于结直肠癌进展期腺瘤。
[0028]本专利技术首次将选自SDC2基因的四个单一特定位点：chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590或chr8：96494113的甲基化作为生物标志物用于检测、预测或监测肿瘤发展产品的制备中，具有显著的测灵敏度和特异性，可有效检测肿瘤患者。
[0029]本专利技术还提供了用于肿瘤诊断的试剂、试剂盒和系统，用于检测包含四个位点chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590和chr8：96494113在内的任一位点甲基化，能够实现对SDC2基因定点甲基化的检测，与现有技术中检测SDC2基因片段甲基化的方法相比，无需进行甲基化转化，显著地提高了检测效率，同时降低了检测成本。
[0030]本专利技术发现，检测目标基因的某个与结直肠癌或结直肠进展期腺瘤相关的单一特定位点的甲基化水平相较于检测目标基因的一段区域内的平均甲基化水平，对检测、预测或监测结直肠癌发展具有更高的灵敏度和特异性，这可能是因为检测多甲基化位点的平均
甲基化水平会在一定程度上掩盖单位点的检测性能。
附图说明
[0031]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.SDC2基因单一特定位点甲基化在制备检测、预测或监测结直肠癌发展产品中的应用，所述SDC2基因单一特定位点选自chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590或chr8：96494113。2.结直肠癌诊断试剂，其特征在于，所述结直肠癌诊断试剂包含用于检测SDC2基因中的单一特定位点chr8：96494187、chr8：96493501、chr8：96493590或chr8：96494113甲基化水平的特异性引物对和探针，特异性引物对包括正向引物和捕获引物；其中检测SDC2基因特定位点chr8：96494187的第一正向引物具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，第一捕获引物具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；检测SDC2基因特定位点chr8：96493501的第二正向引物具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，第二捕获引物具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；检测SDC2基因特定位点chr8：96493590的第三正向引物具有SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，第三捕获引物具有SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；检测SDC2基因特定位点chr8：96494113的第四正向引物具有SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，第四捕获引物具有SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；优选地，还包括反向引物；进一步优选地，所述反向引物具有SEQ ID No.9所示的核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的结直肠癌诊断试剂，其特征在于，用于检测SDC2基因特定位点chr8：96494187的第一正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，第一捕获引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，第一探针的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。4.根据权利要求2所述的结直肠癌诊断试剂，其特征在于，用于检测SDC2基因特定位点chr8：9649...
【专利技术属性】
技术研发人员：甄林青，杨浩，徐高连，徐宏，古宏晨，钱晓华，
申请(专利权)人：上海慧众同康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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