本发明专利技术公开了一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组及其应用，包括，外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术提供的引物组可以用于检测鲍曼不动杆菌，其特异性良好，该引物灵敏度高，稳定性良好。稳定性良好。稳定性良好。
【技术实现步骤摘要】
一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组及其应用
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及到一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组及其应用。
技术介绍
[0002]鲍曼不动杆菌(学名：Acinetobacter baumannii，俗称：AB菌)，又称鲍氏不动杆菌，属于革兰氏阴性菌，是一种严格需氧、非乳糖发酵的条件致病菌，不具鞭毛，移动性不高，但生命力极强，可广泛地存在于大自然中。该菌是不动杆菌属细菌中在医院感染中常见的一种，也是水产养殖业动物的病原菌。它通常会引起菌血症，肺炎，脑膜炎，腹膜炎，心内膜炎，以及泌尿道和皮肤感染。
[0003]鲍曼不动杆菌已经成为医院感染的主要来源，尤其是重症监护室。该病菌因为抗生素的滥用，导致鲍曼不动杆菌产生抗药性，变成“多重抗药性鲍曼不动杆菌”。对抗多重抗药性鲍曼不动杆菌的方法只有用后线抗生素像老虎霉素。感染的病人多是老年患者、危重疾病及机体抵抗力弱的患者，以及使用各种侵入性操作和长期使用广谱抗生素治疗的患者。又因为该菌对湿热紫外线及化学消毒剂有较强抵抗力，常规消毒只能抑制其生长而不能杀灭，而抵抗力弱或有创伤的患者可能被从医务人员的手或消毒不彻底的医疗器械所带有的细菌感染的机会较多。
[0004]目前，尚无鲍曼不动杆菌的快速诊断方法。
技术实现思路
[0005]本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
[0006]鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本专利技术。
[0007]因此，本专利技术的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组，包括，
[0009]外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0010]外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0011]内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
[0012]内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0013]作为本专利技术所述引物组的一种优选方案，其中：所述LAMP引物组还包括，
[0014]环状加速引物LF，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；
[0015]环状加速引物LB，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0016]本专利技术的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种引物组在制备检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌试剂盒中的应用。
[0017]作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述试剂盒包括反应液、甜菜碱、阴性对照品和引物组混合物。
[0018]作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述引物组混合物，其中，外引物F3、B3的使用浓度为10μM，所述内引物FIP、BIP的使用浓度为100μM，所述环状加速引物LF、LB的使用浓度为10μM。
[0019]作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述反应液包括Bst大片段DNA聚合酶、荧光染料Eva Green、dNTPs、Tris
‑
HCl、KCl、MgSO4、(NH4)2SO4和ddH2O。
[0020]作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述阴性对照品为1xTE缓冲液。
[0021]本专利技术的另一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的方法，包括，
[0022]提取待检样品中的核酸基因组作为环介导恒温扩增LAMP反应体系的模板；
[0023]配置LAMP反应体系总体积为25μl，其中具体的LAMP反应体系为：环介导恒温反应液为12.5μl，外引物F3、B3分别加入0.5μl、0.5μl；
[0024]内引物FIP、BIP分别加入0.4μl、0.4μl；
[0025]环状引物LF、LB各加入2μL；
[0026]待检样品中提取的DNA模板加入2.2μl，阴性对照样本为1XTE缓冲液；ddH2O加入4.5μl补足至25μl；
[0027]LAMP反应的条件为在63℃下恒温反应60min。
[0028]本专利技术有益效果：
[0029]本专利技术提供了一套LAMP引物组，包括环状引物LF、LB在内的F3、B3、FIP、BIP，该引物组可以用于检测鲍曼不动杆菌，其特异性良好，该引物灵敏度高，稳定性良好；
[0030]本专利技术在该LAMP引物组中引入环引物LF、LB，使反应出峰时间减少；应用本专利技术建立的环介导等温扩增引物及体系来检测呼吸道病原微生物的鲍曼不动杆菌，在特异性、灵敏度和重复性方面都可以得到良好的效果。
附图说明
[0031]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
[0032]图1为本专利技术实施例中LAMP引物组检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌时的扩增结果图。
[0033]图2为本专利技术实施例中LAMP引物组检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的灵敏度试验扩增图。
[0034]图3为本专利技术实施例中LAMP引物组检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的特异性试验扩增图。
[0035]图4为本专利技术实施例中LAMP引物组检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的重复性
试验扩增图。
具体实施方式
[0036]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。
[0037]在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。
[0038]其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本专利技术至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
[0039]实施例1
[0040]本实施例提供一种基于LAMP技术检测病原微生物鲍曼不动杆菌的方法，主要步骤为：
[0041](1)引物设计
[0042]LAMP引物设计采用Primer ExplorerV5软件进行设计，筛选得到合适的引物，由上海生工生物工程股份有限公司进行引物合成。取不同体积的引物进行混匀后进行鲍曼不动杆菌的检测，经上述操作本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌的LAMP引物组，其特征在于：包括，外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述LAMP引物组还包括，环状加速引物LF，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；环状加速引物LB，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.权利要求1或2所述引物组在制备检测呼吸道病原微生物鲍曼不动杆菌试剂盒中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒包括反应液、甜菜碱、阴性对照品和引物组混合物。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述引物组混合物，其中，外引物F3、B3的使用浓度为10μM，所述内引物FIP、BIP的使用浓度为100μM，所述环状加速引物LF、LB的使用浓度为10μM。6....
【专利技术属性】
技术研发人员：胡江，韩克兵，张迅，肖可，王磊，罗杰，周泽波，周庭波，陈汉柒，张思宇，代艺虹，
申请(专利权)人：贵州金玖生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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