一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用。本发明专利技术首先构建了过表达CXCR6的质粒并将其转染至293T细胞中，使293T细胞膜表面过表达CXCR6，最后提取293T细胞膜作为药物载体，从而构建通过CXCR6靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体（Membrane

【技术实现步骤摘要】
一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医用领域，尤其涉及一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]膝骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是老年人群中常见的关节退行性疾病，导致下肢功能障碍，极大地影响患者的生活质量。目前正逐步进入老龄化社会，65岁及以上人群膝OA的患病率约为50.0%，而在75岁及以上人群中，膝OA的患病率则达到80.0%，将面对巨大的OA患者的社会经济压力。然而目前并没有针对OA的特效药物，晚期OA患者只能接受手术治疗。
[0003]OA被认为是一种“全关节疾病”，其病变包括软骨退变磨损、半月板变形、韧带撕裂、软骨下骨硬化以及滑膜组织的炎症等。滑膜组织炎症是OA的典型表现，包括关节周围红、肿、热、痛。关节软骨出现形态学改变之前，滑膜组织已存在明显的炎症反应，巨噬细胞是滑膜组织中的主要炎症反应细胞，滑膜组织炎症刺激巨噬细胞产生MMP13、ADAMTS5降解软骨加剧OA进展；另外，巨噬细胞分泌大量可溶性促炎因子，包括IL
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1β，TNF
‑
α等，作用于滑膜细胞、免疫细胞等，进一步加重关节内的炎症反应，招募更多的巨噬细胞，从而形成关节内炎症反应的恶性循环。因此，靶向OA早期滑膜巨噬细胞，是延缓OA进展的有效途径。
[0004]单细胞转录组测序结果显示，在OA的进展过程中，滑膜中巨噬细胞大量增加，并特异性高表达CXCL16，而CXCL16可以表达于细胞膜表面，并与CXCR6特异性结合，因此，本专利技术通过构建过表达CXCR6质粒，并将此质粒转染至293T细胞中，使293T细胞膜表面高表达CXCR6，提取该细胞膜作为药物载体（Membrane
CXCR6
），可达到靶向CXCL16+巨噬细胞的目的，Membrane
CXCR6
可进一步负载抗炎药物，从而制备靶向巨噬细胞抗炎药物，减轻膝关节内炎症反应及OA进展。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提出一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用，以解决现有技术中的膝骨关节炎缺乏特异性靶向抗炎药物的问题，同时提供了一种新的膝关节滑膜组织炎症的治疗靶点。
[0006]本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：本专利技术一方面提供了一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体的制备方法，包括以下步骤：步骤1、构建过表达CXCR6的重组质粒；步骤2、将步骤1得到的重组质粒转染至293T细胞中，使293T细胞膜高表达CXCR6；步骤3、提取293T细胞膜作为药物载体，得到靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体Membrane
CXCR6
。
[0007]进一步的，所述步骤1具体包括：
以初始骨架载体pKD
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EF1a
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IRES2
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Puro为基础，将标签基因HA和绿色荧光基团EGFP以PCR方法扩增，构建pKD
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EF1a
‑
HA
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EGFP
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IRES2
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Puro空载质粒；pKD
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EF1a
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HA
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EGFP
‑
IRES2
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Puro经限制性内切酶BamH I和EcoR I 双酶切后回收，DNA重组连接酶将小鼠CXCR6基因插入到线性化的空载质粒上，构建pKD
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EF1a
‑
HA
‑
EGFP
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mCXCR6
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IRES2
‑
Puro重组质粒。
[0008]进一步的，所述步骤2具体包括：进行慢病毒包装，将步骤1得到的重组质粒转染入293T细胞中，使293T细胞膜表面过表达CXCR6。
[0009]进一步的，所述pKD
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EF1a
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HA
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EGFP
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IRES2
‑
Puro空载质粒的上游引物如 SEQ ID No .1所示，所述pKD
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EF1a
‑
HA
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EGFP
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IRES2
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Puro的下游引物如SEQ ID No .2所示。
[0010]进一步的，所述CXCR6的引物如SEQ ID No .1、SEQ ID No .3、SEQ ID No .4和SEQ ID No .5所示。
[0011]本专利技术另一方面提供了上述的制备方法得到的靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体Membrane
CXCR6
。
[0012]本专利技术另一方面提供了上述的制备方法得到的靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体Membrane
CXCR6
在制备治疗膝关节骨性关节炎的药物或药物组合物中的应用。
[0013]进一步的，在所述靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体Membrane
CXCR6
上偶联抗炎药物。
[0014]本专利技术的突出效果为：本专利技术首先构建了过表达CXCR6的质粒并将其转染至293T细胞中，使293T细胞膜表面过表达CXCR6，最后提取293T细胞膜作为药物载体，从而构建通过CXCR6靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体（Membrane
CXCR6
）。Membrane
CXCR6
可进一步负载抗炎药物。本专利技术有助于推动相关靶向抗炎药物的制备，提高骨性关节炎相关药物的疗效，并为新药物研发提供线索。
[0015]以下便结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步的详述，以使本专利技术技术方案更易于理解、掌握。
附图说明
[0016]图1A为本专利技术实施例1中正常及OA小鼠滑膜炎HE染色及评分；图1B为本专利技术实施例2中合并分析正常及OA小鼠滑膜组织单细胞转录组测序后整合分析UMAP分群图；图1C为本专利技术实施例2中各群细胞的标志基因表达；图2A为本专利技术实施例3中正常及OA小鼠滑膜组织单细胞转录组测序后分开分析UMAP图；图2B为本专利技术实施例3中正常及OA小鼠UMAP图整合分析，显示各细胞群的差异情况；图2C为本专利技术实施例3中正常及OA小鼠小提琴图，显示相比于Normal组，OA组巨噬细胞中CXCL16表达增加；图2D为本专利技术实施例3中正常及OA小鼠UMAP图分析，显示相比于Normal组，OA组巨噬细胞中CXCL16表达增加；
图3为本专利技术实施例3中Control及OA小鼠滑膜组织中CXCL16的免疫荧光染色结果图；图4为本专利技术实施例3中Control及OA患者滑膜组织中CXCL16的免疫荧光染色结果图；图5为本专利技术实施例4空载质粒图谱；图6为本专利技术实施例4 pKD
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EF1a...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1、构建过表达CXCR6的重组质粒；步骤2、将步骤1得到的重组质粒转染至293T细胞中，使293T细胞膜高表达CXCR6；步骤3、提取293T细胞膜作为药物载体，得到靶向CXCL16+巨噬细胞的药物载体Membrane
CXCR6
。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1具体包括：以初始骨架载体pKD
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EF1a
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IRES2
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Puro为基础，将标签基因HA和绿色荧光基团EGFP以PCR方法扩增，构建pKD
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EF1a
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HA
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EGFP
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IRES2
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Puro空载质粒；pKD
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EF1a
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HA
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EGFP
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IRES2
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Puro经限制性内切酶BamH I和EcoR I 双酶切后回收，DNA重组连接酶将小鼠CXCR6基因插入到线性化的空载质粒上，构建pKD
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EF1a
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HA
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EGFP
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mCXCR6
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IRES2
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Puro重组质粒。3.如权利要求1所述的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：桂涛，彭睿，余波，许一迪，杨清均，黄训，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：