基于dCas9-VP64的转录激活系统构建的A549稳定表达细胞系及其应用技术方案

本发明专利技术公开了基于dCas9

【技术实现步骤摘要】
基于dCas9
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VP64的转录激活系统构建的A549稳定表达细胞系及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及基于dCas9
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VP64的转录激活系统构建的A549稳定表达细胞系及其应用。

技术介绍

[0002]CRISPR
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Cas是一种RNA介导的适应性免疫系统，存在于细菌和古细菌中，可保护宿主细胞免受外源DNA的入侵。根据Cas蛋白序列结构的不同，CRISPR
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Cas系统主要分为I、II和III三类。其中第I和第III两种类型的CRISPR
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Cas系统在切割外源DNA时需要多种Cas蛋白参与，过程较为复杂。而II型系统只需要一个蛋白即可完成剪切工作，相对较为简单、省时省力，在基因组工程中应用最为广泛。
[0003]对Cas蛋白HNH和RuvC两个结构域中的D10A和H840A氨基酸进行点突变可以获得剪切失活的Cas9蛋白。由此产生的核酸酶缺陷型dCas9不能切割DNA，但在sgRNA的引导下仍能与DNA特异性结合。基于此，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.激活肺癌细胞中LTR5Hs序列表达的物质在如下1)
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4)任一种中的应用：1)制备预防和/或治疗肺癌的产品；2)制备抑制肺癌细胞增殖的产品；3)预防和/或治疗肺癌；4)抑制肺癌细胞增殖；所述LTR5Hs序列如序列1所示。2.一种激活肺癌细胞中LTR5Hs序列表达的方法，包括如下步骤：将激活肺癌细胞中LTR5Hs序列表达的物质导入肺癌细胞。3.根据权利要求1所述的应用或权利要求2所述的方法，其特征在于：所述激活肺癌细胞中LTR5Hs序列表达的物质包括dCas9
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VP64融合蛋白、MS2
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P65
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HSF1融合蛋白和靶向LTR5Hs序列第83
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89位的sgRNA。4.根据权利要求3所述的应用或方法，其特征在于：所述sgRNA的靶序列如序列10所示。5.根据权利要求2
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4任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：(1)将能够表达所述dCas9
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VP64融合蛋白的重组慢病毒A感染所述肺癌细胞，得到阳性细胞系；(2)向步骤(1)所得阳性细胞系中导入能够表达所述sgRNA和所述MS2
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P65
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HSF1融合蛋白的重组慢病毒B，进而实现激活肺癌细胞中LTR5Hs序列表达。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述能够表达所述dCas9
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VP64融合蛋白的重组慢病毒A为将含有所述dCas9
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VP64融合蛋白编码基因的慢病毒载体进行包装后得到的慢病毒。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述能够表达所述sgRNA和所述MS2
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P65
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HSF1融合蛋白的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：李林，贾磊，刘梦莹，郭星，张伯寒，李韩平，刘永健，韩婧婉，王晓林，李敬云，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：