一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法技术

本申请涉及真菌发酵技术领域，提出了一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，在食用菌液体菌种添加无菌的冬虫夏草菌发酵营养液或固体营养物作为纤维素酶诱导物，24h后接种到灭菌菌包，得到食用菌菌包，然后将所得食用菌菌包发菌；其中所述食用菌菌包在制作过程中添加冬虫夏草菌发酵营养物作为纤维素酶诱导物，进行灭菌处理。本发明专利技术的有益效果为：在食用菌液体菌种培养阶段和菌包制备种添加可溶性的冬虫夏草菌发酵营养液和固体营养物能够缩短食用菌发菌期，缩短食用菌生长周期，同时做到了冬虫夏草菌发酵滤液废水的“零”排放，杜绝了环境污染的可能性，节约了环保成本。节约了环保成本。

【技术实现步骤摘要】
一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法


[0001]本专利技术涉及微生物发酵的
，具体的，涉及一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法。

技术介绍

[0002]纤维素酶是指一类能水解纤维素中β
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1,4
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葡萄糖苷键的多组分酶系的总称，主要由外切葡聚糖苷酶、内切葡聚糖苷酶、β
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葡萄糖苷酶组成。纤维素酶是木质
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纤维素原料资源化利用过程中的关键酶。真菌所产生的纤维素酶大部分都是诱导酶，通过添加诱导物及对纤维素酶合成途径进行调控是提高纤维素酶活性的有效方法。研究发现木霉属、曲霉属等丝状真菌中纤维素酶诱导物主要有微晶纤维素、纤维二糖及其衍生物、槐糖、龙胆二糖、乳糖、山梨糖，D
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半乳糖、D
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木糖、D
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甘露糖、L
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山梨糖等。
[0003]冬虫夏草(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)是冬虫夏草菌寄生在鳞翅目(Lepidoptera)蝙蝠蛾科昆虫(Hepialus Armoricanus Oberthur)幼虫上的子座及幼虫尸体上的复合体(包括子座和虫体)。冬虫夏草是一类珍贵的传统真菌药材资源，具有代谢产物和生物活性多样性特点。目前，液体深层发酵技术已用于冬虫夏草菌的人工发酵培养并实现规模产业化。在业内，考虑到生产成本以及发酵过程的复杂性，没有对中国被毛孢的发酵滤液和其中有效成分进行研究，发酵滤液一般被当成废水处理。由于发酵滤液中有机物含量非常高，若直接当废水排放会对环境造成一定的危害，必须经过废水处理后达标排放，污水处理费用高。
[0004]众所周知，冬虫夏草发酵滤液中富含氨基酸、虫草多糖、甘露醇等活性成分以及其他营养成分。为了更好的利用冬虫夏草发酵滤液，我们对其进行了分析检测，发现冬虫夏草发酵滤液含有丰富的D
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葡萄糖、D
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半乳糖、D
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木糖、D
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甘露糖、海藻糖等都是非常好的丝状真菌中纤维素酶的诱导物。
[0005]使用液体菌种原种具有接种方便，容易实现接种过程的完全自动化，同时有效地减少人为污染风险的优势。然而，不同于固体原种(谷物种或锯末屑种)，液体菌种作为原种的弊端是接种到固体基质中后出现延滞期较长，常常超过3天。菌丝体在接种初期生长缓慢，吃料速度慢，致使菌包发菌期较长。

技术实现思路

[0006]本申请提出一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，在食用菌液体菌种培养阶段和菌包制备种添加可溶性的冬虫夏草菌发酵营养液和固体营养物能够缩短食用菌发菌期，缩短食用菌生长周期；同时做到了冬虫夏草菌发酵滤液废水的“零”排放，杜绝了环境污染的可能性，节约了环保成本。
[0007]为此，本申请一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法采用的技术方案如下：
[0008]一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，包括以下步骤：食用菌液体菌
种添加无菌的冬虫夏草菌发酵营养液或固体营养物作为纤维素酶诱导物，24h后接种到灭菌菌包，得到食用菌菌包，然后将所得食用菌菌包发菌；
[0009]其中所述食用菌菌包在制作过程中添加冬虫夏草菌发酵营养物作为纤维素酶诱导物，进行灭菌处理。
[0010]优选的，所述冬虫夏草菌发酵营养液的添加量为10ml/L～50ml/L；
[0011]或所述冬虫夏草发酵固体营养物的添加量为5g/L～30g/L。
[0012]优选的，所述冬虫夏草菌发酵营养液采用以下方法制备：
[0013]S1、获得斜面菌体；
[0014]S2、将上述斜面菌体接种至液体培养基中获得种子液；
[0015]S3、将种子液接种到种子罐进行三级种子扩大培养；
[0016]S4、取三级种子培养罐种子液接种到发酵罐中进行发酵培养；
[0017]S5、将发酵罐发酵液进行固液分离，收集发酵液过滤后的滤液，即为冬虫夏草菌发酵滤液原液A；
[0018]S6、收集冬虫夏草菌发酵滤液原液A并利用其制备浓缩液B；
[0019]S7、利用浓缩液B制备发酵营养液或营养物。
[0020]优选的，步骤S1中方法如下：将中国被毛孢菌接种于斜面培养基，在16～20℃培养10～25天，获得斜面菌体；
[0021]其中，斜面培养基质量组成为：葡萄糖2.2～2.6％、玉米粉1.2～1.5％、土豆汁0.6～0.8％、酵母粉0.2～0.4％、酵母抽提物0.3～0.6％、蛋白胨1.2～1.5％、硫酸镁0.02～0.04％、磷酸二氢钾0.02～0.04％、溶剂为纯化水，pH值5.5～6.5。
[0022]优选的，所述步骤S2的获得方法如下：将斜面菌体接种至液体培养基，在100～200rmp、18～20℃条件下，振荡培养10～30天，获得种子液。
[0023]优选的，所述步骤S3中，每级种子液接种量为8～18％，种子罐通气量为0.8～1.2vvm，培养温度18～20℃，种子罐培养基配制为：种子培养基为：葡萄糖2.2～2.6％、玉米粉1.2～1.5％、土豆汁0.6～0.8％、酵母膏0.6～0.8％、酵母粉0.2～0.4％、酵母抽提物0.1～0.3％、蚕蛹粉0.1～0.3％、蛋白胨1.2～1.5％、硫酸镁0.02～0.04％、磷酸二氢钾0.02～0.04％、溶剂为纯化水，pH值5.5～6.5。。
[0024]优选的，所述步骤S4中，接种量为10～18％，种子罐通气量为0.8～1.2vvm，培养温度18～20℃，种子罐培养基配制为：种子培养基为：葡萄糖2.2～2.6％、玉米粉1.2～1.5％、酵母膏0.6～0.8％、酵母粉0.2～0.4％、酵母抽提物0.3～0.6％、蚕蛹粉0.5～0.1.5％、蛋白胨0.8～1.2％、硫酸镁0.02～0.04％、磷酸二氢钾0.02～0.04％、溶剂为纯化水，pH值6.0～7.0。
[0025]优选的，所述S6中，采用5～100μm袋式过滤器做前处理，在流量为1000～10000L/h，温度为15～60℃，pH值为4.5～9.5的条件下用孔径为50nm～300nm陶瓷膜或超滤膜进行预处理，收集陶瓷膜或超滤膜透过液，在流量为1000～10000L/h，温度为15～60℃，pH值为4.5～9.5的条件下用规格型号为300～800D的纳滤膜处理，收集透过液，在流量为1000～10000L/h，温度为15～60℃，pH值为4.5～9.5的条件下用规格型号为100～300D的纳滤膜处理，浓缩至浓度为6％～25％，收集浓缩液即为浓缩液B。
[0026]优选的，所述步骤S7包括收集冬虫夏草菌发酵滤液浓缩液B，调节pH值至3.5～
5.5，反应温度45～60℃，加入纤维素酶，同时加入葡萄糖转苷酶5～20IU，反应时间20～40h，80℃以上灭酶，然后用蒸发器进一步浓缩至比重1.05～1.25(或浓度30％以上)即为中国被毛孢菌发酵营养液，喷雾干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，其特征在于，包括以下步骤：向食用菌液体菌种添加无菌的冬虫夏草菌发酵营养液或固体营养物作为纤维素酶诱导物，24h后接种到灭菌菌包，得到食用菌菌包，然后将所得食用菌菌包发菌；其中所述食用菌菌包在制作过程中添加冬虫夏草菌发酵营养物作为纤维素酶诱导物，进行灭菌处理。2.根据权利要求1所述的一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，其特征在于，所述冬虫夏草菌发酵营养液的添加量为10ml/L～50ml/L；或所述冬虫夏草发酵固体营养物的添加量为5g/L～30g/L。3.根据权利要求1所述的一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，其特征在于，所述冬虫夏草菌发酵营养液采用以下方法制备：S1、获得斜面菌体；S2、将上述斜面菌体接种至液体培养基中获得种子液；S3、将种子液接种到种子罐进行三级种子扩大培养；S4、取三级种子培养罐种子液接种到发酵罐中进行发酵培养；S5、将发酵罐发酵液进行固液分离，收集发酵液过滤后的滤液，即为冬虫夏草菌发酵滤液原液A；S6、收集冬虫夏草菌发酵滤液原液A并利用其制备浓缩液B；S7、利用浓缩液B制备发酵营养液或营养物。4.根据权利要求3所述的一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，其特征在于，步骤S1中方法如下：将中国被毛孢菌接种于斜面培养基，在16～20℃培养10～25天，获得斜面菌体；其中，斜面培养基质量组成为：葡萄糖2.2～2.6％、玉米粉1.2～1.5％、土豆汁0.6～0.8％、酵母粉0.2～0.4％、酵母抽提物0.3～0.6％、蛋白胨1.2～1.5％、硫酸镁0.02～0.04％、磷酸二氢钾0.02～0.04％、溶剂为纯化水，pH值5.5～6.5。5.根据权利要求3所述的一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，其特征在于，所述步骤S2的获得方法如下：将斜面菌体接种至液体培养基，在100～200rmp、18～20℃条件下，振荡培养10～30天，获得种子液。6.根据权利要求3所述的一种缩短食用菌液体菌种接种菌包发菌期的方法，其特征在于，所述步骤S3中，每级种子液接种量为8～18％，种子罐通气量为0.8～1.2vvm，培养温度18～20℃，种子罐培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊林，王玉华，李永芬，马永珍，刘惠艳，李洪梅，
申请(专利权)人：青海珠峰冬虫夏草原料有限公司，
类型：发明
国别省市：