一种苦瓜离体再生的培养基及培养方法技术

本发明专利技术涉及植物组织培养技术领域，具体提供一种苦瓜离体再生的培养基及培养方法。培养基包括不定芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，均是在MS培养基内添加生长激素，具体为：不定芽诱导培养基是在每升MS培养基内添加IBA和6

【技术实现步骤摘要】
一种苦瓜离体再生的培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，尤其涉及一种苦瓜离体再生的培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]苦瓜为葫芦科苦瓜属一年生草本植物，不仅营养丰富，且可入药，具有清热解毒、补肾阳、祛寒湿、降血糖等功效，是一种食药兼用的植物，深受消费者喜爱。在热带、亚热带地区广泛种植，已成为海南省的支柱蔬菜种类之一，同时在我国的湖南、湖北、福建、四川、广东、广西、山东等省份大面积种植，因此丰产优质、广适应性新品种的选育具有重要意义。
[0003]与传统育种技术相比，转基因育种是更高效、更准确的现代育种技术，可有效加速育种进程，稳定高效的遗传转化体系是培育转基因作物新品种的关键步骤，同时也是基因功能研究、创新种质的重要方法。但目前，苦瓜愈伤组织诱导困难、不定芽分化率低，再生体系效率低、不稳定成为限制遗传转化的瓶颈。另外因苦瓜繁殖系数低，导致种子价格居高不下，如能通过组织培养实现工厂化育苗，将有效解决苦瓜生产成本较高的问题。如上所述，高效再生体系的建立是实现这些工作的基础，突破这个难题，将有助于加速育种进程，实现定向育种，有助于丰富苦瓜种质资源，有助于苦瓜功能基因组学的研究，推动苦瓜产业的快速发展。

技术实现思路

[0004]本专利技术为解决目前苦瓜再生体系不稳定、再生率低的问题，提供一种苦瓜离体再生的培养基及培养方法。
[0005]本专利技术第一目的在于提供一种苦瓜离体再生的培养基，包括不定芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；所述不定芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基pH=5.8
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6.0，均是在MS培养基内添加生长激素，具体为：所述不定芽诱导培养基是在每升MS培养基内添加0.01
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0.05mg IBA和2
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3mg 6
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BA；所述增殖培养基是在每升MS培养基内添加0.001
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0.01mg IBA和0.5
‑
1.5mg 6
‑
BA；所述生根培养基是在每升MS培养基内添加0.1
‑
0.2mg NAA和0.1mg IBA。
[0006]优选的，每升MS培养基包括4.4
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4.5g MS粉、25
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35g蔗糖、2.5
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3.5g植物凝胶，余量为水。
[0007]优选的，MS粉添加量为4.42g，蔗糖添加量为30g，植物凝胶添加量为3g。
[0008]优选的，不定芽诱导培养基中IBA为0.01mg、6
‑
BA为2.5mg；所述增殖培养基中IBA为0.005mg、6
‑
BA为1mg；所述生根培养基中NAA为0.15mg。
[0009]本专利技术第二目的在于提供一种苦瓜离体再生的培养方法，采用所述的苦瓜离体再生的培养基，包括如下步骤：S1、获取无菌材料：选取新鲜、具有活性的苦瓜种子，去除种皮，消毒；播种于种子
萌发培养基上，在25
‑
30℃下暗处理6
‑
8 d；所述种子萌发培养基为MS培养基；S2、选取外植体：当种子下胚轴伸长2
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3cm时选取外植体；S3、不定芽的诱导：将外植体接种到不定芽诱导培养基上，在25
‑
30℃下暗处理2
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4d；取出，置于每天光照16h、黑暗8h、光照强度为1800
‑
2200lx的环境中，培养18
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25d，得到不定芽；S4、不定芽的伸长：将不定芽接种于增殖培养基，每日按照光周期为16h光照、8h黑暗交替进行，光照强度为1800
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2200lx，温度为25
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30℃，培养18
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25d；期间应观察不定芽的生长速度、伸长长度、有无玻璃化褐化和不定芽个数；S5、生根培养：将不定芽分离成单株，分别接种于生根培养基，每日按照光周期为16h光照、8h黑暗交替进行，光照强度为1800
‑
2200lx，温度为25
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30℃，培养13
‑
17d；S6、炼苗处理：当根长到2.5
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3cm后，移至培养箱培养2
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3d，再转移到无菌培养土中避光培养3
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4d，再移出到室外正常光下培养。
[0010]优选的，步骤S1中的消毒具体包括：用75%的乙醇溶液消毒1
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2min，在浓度为3
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5%的次氯酸钠溶液中浸泡8
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10 min，无菌水冲洗4
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6次。
[0011]优选的，次氯酸钠溶液的浓度为3.6%。
[0012]优选的，步骤S2中选取的外植体是带柄子叶。
[0013]优选的，带柄子叶是切除所述种子下胚轴的远轴端三分之一的子叶，剔除下胚轴和生长点，纵切为二后得到的。
[0014]优选的，步骤S2中的暗处理时间为3d。
[0015]优选的，暗处理的温度为28℃；所述光照强度为2000lx。
[0016]优选的，无菌培养土中包括基质、珍珠岩和肥料，质量比为6：3：1。
[0017]本专利技术有益效果：采用本专利技术的操作方法再生率高，组培方法易于操作，能够减少种质材料的消耗和实验成本，缩短生长周期，处理药品易购买、对人体损害小。离体再生能缩短植物的生长周期，固定杂种优势，利于实现工厂化育苗，在苦瓜的生产和基因功能研究中具有重要的作用。
附图说明
[0018]图1是本专利技术实施例提供的苦瓜不定芽器官发生诱导再生苗的过程示意图；A为带柄子叶作为外植体的示意图；B为不定芽分化示意图；C为伸长培养的不定芽示意图；D为伸长的不定芽诱导生根图；E为生根的再生苗；F为移栽后的再生苗。
[0019]图2为本专利技术实施例提供的不同生根培养基中再生苗的生长情况；S1
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S6依次是以0.1mg/L IBA添加0、0.05、0.1、0.15、0.2以及0.25 mg/L NAA对再生苗生根情况的影响示意图。
具体实施方式
[0020]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，而不构成对本专利技术的限制。
[0021]实施例1一种苦瓜离体再生的培养方法，包括如下步骤：S1、获取无菌材料：选取新鲜、具有活性的苦瓜种子，去除种皮，用75%的乙醇溶液消毒1 min，在浓度为3.6%的次氯酸钠溶液中浸泡10 min，无菌水冲洗4
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6次；播种于种子萌发培养基上，28℃下暗处理6
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8 d；所述每升种子萌发培养基（MS培养基）包括4.42g MS粉、30g蔗糖、3g植物凝胶，余量为水；S2、选取外植体：当种子下胚轴伸长大约2
‑
3cm时，切除本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苦瓜离体再生的培养基，其特征在于：包括不定芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；所述不定芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基pH=5.8
‑
6.0，均是在MS培养基内添加生长激素，具体为：所述不定芽诱导培养基是在每升MS培养基内添加0.01
‑
0.05mg IBA和2
‑
3mg 6
‑
BA；所述增殖培养基是在每升MS培养基内添加0.001
‑
0.01mg IBA和0.5
‑
1.5mg 6
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BA；所述生根培养基是在每升MS培养基内添加0.1
‑
0.2mg NAA和0.1mg IBA。2. 根据权利要求1所述的一种苦瓜离体再生的培养基，其特征在于：所述每升MS培养基包括4.4
‑
4.5g MS粉、25
‑
35g蔗糖、2.5
‑
3.5g植物凝胶，余量为水。3.根据权利要求2所述的一种苦瓜离体再生的培养基，其特征在于：所述MS粉添加量为4.42g，蔗糖添加量为30g，植物凝胶添加量为3g。4.根据权利要求1
‑
3任意一项所述的一种苦瓜离体再生的培养基，其特征在于：所述不定芽诱导培养基中IBA为0.01mg、6
‑
BA为2.5mg；所述增殖培养基中IBA为0.005mg、6
‑
BA为1mg；所述生根培养基中NAA为0.15mg。5.一种苦瓜离体再生的培养方法，采用权利要求1所述的苦瓜离体再生的培养基，其特征在于：包括如下步骤：S1、获取无菌材料：选取新鲜、具有活性的苦瓜种子，去除种皮，消毒；播种于种子萌发培养基上，在25
‑
30℃下暗处理6
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8 d；所述种子萌发培养基为MS培养基；S2、选取外植体：当种子下胚轴伸长2
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3cm时选取外植体；S3、不定芽的诱导：将外植体接种到不定芽诱导培养基上，在25
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30℃下暗处理2
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4d；取出，置于每天光照16h、黑...

【专利技术属性】
技术研发人员：田丽波，张子艳，商桑，李许真，廖道龙，
申请(专利权)人：海南大学三亚研究院，
类型：发明
国别省市：