一种苏丹草离体保存的方法技术

本发明专利技术公开了一种苏丹草离体保存的方法，属于农业育种技术领域。该方法包括以下步骤：以苏丹草胚轴为外植体，经消毒处理后，经诱导培养、增殖培养以及根芽同期分化培养，获取离体保存的苏丹草小苗；其中，根芽同期分化阶段，所用的根芽同期分化培养基包括以下组分：1/2MS培养基+柳树皮+蔗糖+多效唑+吲哚丁酸+萘乙酸+琼脂。通过实验验证，本发明专利技术经过各阶段培养基组分和用量的优化，可以明显促进根系数量的增加和粗壮程度，提高移栽后的成活率，这对于不受环境、生长期等影响随时为家畜供应苏丹草奠定基础，具备广泛的推广和应用前景。具备广泛的推广和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种苏丹草离体保存的方法


[0001]本专利技术涉及农业育种领域，特别是涉及一种苏丹草离体保存的方法。

技术介绍

[0002]苏丹草是禾本科高粱属一年生草本植物。它抗旱能力强，能很好地适应气候温暖干旱地区的自然条件，分蘖期长，分蘖数量多，生长迅速，再生能力好，一年可刈割二次至三次，产量高而稳定，草质好、营养丰富，常用于调制干草，青贮、青饲或放牧，马、牛、羊都喜采食，也是养鱼的好饲料。
[0003]由于苏丹草是一种暖季型牧草，并且主要生长在高温高湿地区，导致现有国内外的苏丹草生长期间都出现了严重的叶斑病，并严重影响产量和供青期，以及家畜的健康。而目前多是采用常规技术选育抗叶斑病品种，此方法有效但是周期长且工作量大，而且由于缺乏近缘抗原材料，抗病育种进展缓慢。而随着细胞和转基因技术的发展，为苏丹草抗病育种提供了新的方向和途径。而根据目前关于苏丹草的相关研究，发现其通过组织培养获得再生植株比较困难，并且所获得的植株根系细弱，导致移栽后成活率低。因此，进一步优化和改进组织培养方法，促进根系生长和粗壮，提高移栽后成活率，对于解决目前苏丹草由于受环境和生长期等因素影响其产量、供青期和家畜健康等问题非常重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种苏丹草离体保存的方法，以解决上述现有技术存在的问题，通过优化各阶段培养基组分和用量，可以明显提高移栽后苏丹草的成活率，增强根数量和粗壮程度。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种苏丹草离体保存的方法，包括以下步骤：以苏丹草胚轴为外植体，经消毒处理后，经诱导培养、增殖培养以及根芽同期分化培养，获取苏丹草试管苗；所述试管苗离体保存6
‑
18个月；其中，根芽同期分化阶段，所用的根芽同期分化培养基包括以下组分：1/2MS培养基+柳树皮+蔗糖+多效唑+吲哚丁酸+萘乙酸+琼脂；离体保存阶段，所用的离体培养基包括以下组分：1/2MS+6
‑
苄氨基嘌呤+萘乙酸+蔗糖+琼脂。
[0007]优选的是，还包括将所述离体保存的苏丹草试管苗恢复生长和移栽自然条件培养的步骤。
[0008]优选的是，恢复生长阶段，所用恢复生长基包括以下组分：MS培养基+6
‑
苄氨基嘌呤1.0
‑
1.5mg/L+吲哚
‑
3乙酸0.1
‑
0.2mg/L+蔗糖8
‑
10g/L+琼脂5
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10g/L；恢复生长的条件为：25
‑
27℃、光照强度1500
‑
2000lux、光照12h/d；
[0009]所述自然条件为：白天温度为25
‑
27℃，黑夜的温度为15
‑
20℃，空气湿度70
‑
80％。
[0010]优选的是，所述根芽同期分化培养基包括以下组分：1/2MS培养基+柳树皮2.0
‑
3.0g/L+蔗糖15
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20mg/L+多效唑20
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30mg/L+吲哚丁酸3
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5mg/L+萘乙酸0.5
‑
1.0mg/L+琼脂5
‑
10g/L；培养条件为：25
‑
27℃光照培养5
‑
10天，光照强度为1500
‑
2500lux，光照/黑暗时间为
10h/14h。
[0011]优选的是，诱导培养阶段，所用的诱导培养基包括以下组分：MS培养基+2，4
‑
D 1.5
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2.0mg/L+6
‑
苄氨基嘌呤0.2
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0.5mg/L+琼脂5
‑
10g/L；培养条件为：25
‑
27℃暗培养3
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5天。
[0012]优选的是，增殖培养阶段，所用的增殖培养基包括以下组分：MS培养基+6
‑
苄氨基嘌呤1.5
‑
2.0mg/L+萘乙酸0.1
‑
0.2mg/L+琼脂5
‑
10g/L；培养条件为：25
‑
27℃光照培养5
‑
10天，光照强度为1500
‑
2500lux，光照/黑暗时间为10h/14h。
[0013]优选的是，增殖培养阶段，传代培养2
‑
3次。
[0014]优选的是，所述离体培养基包括以下组分：1/2MS+6
‑
苄氨基嘌呤2.0
‑
2.5mg/L+萘乙酸0.2
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0.35mg/L+蔗糖8
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10g/L+琼脂5
‑
10g/L，离体保存条件为：25
‑
27℃、光照强度1500
‑
2000lux、光照12h/d条件下离体保存。
[0015]优选的是，所述消毒处理为：用质量分数为75％的酒精浸泡30s，清水冲洗；再用90％酒精冲洗3
‑
5s，清水冲洗。
[0016]本专利技术公开了以下技术效果：
[0017]本专利技术公开了一种苏丹草离体保存的方法，通过对各阶段培养基的优化和改良可以生成苏丹草再生小苗，尤其采用根芽同期分化培养基，对营养组分和植物激素组分及其用量进行了优化改良之后，通过柳树皮的使用可以增加培养基内外空气交换，提供苏丹草所需求的氮、磷、钾营养元素，有效促进根生长的同时还促进根粗壮，进而在离体保存的苏丹草小苗移栽后利于成活率的提高；而多效唑、吲哚丁酸、萘乙酸的联合使用，在促进芽分化的同时还诱导大量根生成和粗壮。通过实验验证，经过本专利技术提供的方法可以使得苏丹草离体保存的小苗，移栽后成活率在80％以上，这对于不受环境、生长期等影响随时为家畜供应苏丹草奠定基础，具备广泛推广和应用的前景。
具体实施方式
[0018]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0019]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0020]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苏丹草离体保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：以苏丹草胚轴为外植体，经消毒处理后，经诱导培养、增殖培养以及根芽同期分化培养，获取苏丹草试管苗；所述试管苗离体保存6
‑
18个月；其中，根芽同期分化阶段，所用的根芽同期分化培养基包括以下组分：1/2MS培养基+柳树皮+蔗糖+多效唑+吲哚丁酸+萘乙酸+琼脂；离体保存阶段，所用的离体培养基包括以下组分：1/2MS+6
‑
苄氨基嘌呤+萘乙酸+蔗糖+琼脂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括将所述离体保存的苏丹草试管苗恢复生长和移栽自然条件培养的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，恢复生长阶段，所用恢复生长基包括以下组分：MS培养基+6
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苄氨基嘌呤1.0
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1.5mg/L+吲哚
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3乙酸0.1
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0.2mg/L+蔗糖8
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10g/L+琼脂5
‑
10g/L；恢复生长的条件为：25
‑
27℃、光照强度1500
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2000lux、光照12h/d；所述自然条件为：白天温度为25
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27℃，黑夜的温度为15
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20℃，空气湿度70
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80％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根芽同期分化培养基包括以下组分：1/2MS培养基+柳树皮2.0
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3.0g/L+蔗糖15
‑
20mg/L+多效唑20
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30mg/L+吲哚丁酸3
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5mg/L+萘乙酸0.5
‑
1.0mg/L+琼脂5
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10g/L；培养条件为：25
‑
27℃光照培养5
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10天，光照强度为150...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹明华，汪艺，柯子妍，邱梦婷，余璐，卢亚轩，再图妮古丽，
申请(专利权)人：上饶师范学院，
类型：发明
国别省市：