中药黄精的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了中药黄精的组织培养方法，涉及生物组织培养技术领域，所述中药黄精的组织培养方法包括以下步骤：步骤一：外植体消毒；步骤二：根茎芽的启动培养；步骤三：不定芽的分化培养：将培养后萌发健壮的根茎芽转接到分化培养基中，观察分化出不定芽的外植体个数；步骤四：不定芽的壮苗培养：将分化出的不定芽切成单芽，转接到壮苗培养基上进行培养；步骤五：组培苗的生根培养：将培养后的健壮无根组培苗接入生根培养基中；步骤六：炼苗与移栽。本发明专利技术利用组培快繁手段对黄精进行繁育，可以在较短时间内获得大量种苗，为黄精大面积生产、保证药源，实现其可持续利用具有十分重要的意义。实现其可持续利用具有十分重要的意义。实现其可持续利用具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
中药黄精的组织培养方法


[0001]本专利技术涉及生物组织培养
，尤其涉及中药黄精的组织培养方法。

技术介绍

[0002]黄精是百合科、黄精属植物。根状茎圆柱状，由于结节膨大，因此“节间”一头粗、一头细，在粗的一头有短分枝，直径1
‑
2厘米。茎高50
‑
90厘米，或可达1米以上。花序通常具2
‑
4朵花，似成伞形状，总花梗长1
‑
2厘米，花梗长(2.5
‑
)4
‑
10毫米，花被筒中部稍缢缩，裂片长约4毫米；花丝长0.5
‑
1毫米，花药长2
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3毫米；子房长约3毫米，花柱长5
‑
7毫米。浆果直径7
‑
10毫米，黑色，具4
‑
7颗种子。花期5
‑
6月，果期8
‑
9月。
[0003]黄精属于我国一类传统的药食两用植物，其根茎入药，具有补气养阴、健脾、等广泛药用功效，在制药和保健品开发方面具有广阔前景。然而黄精自然状态下种子具有休眠性，繁殖所需时间长，根茎繁殖所需根茎量大，两种繁殖方式均制约着黄精的大面积生产。因此需要提出中药黄精的组织培养方法解决上述问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是解决现有技术中黄精的繁殖方式制约黄精产量的缺点，而提出的中药黄精的组织培养方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]中药黄精的组织培养方法，所述中药黄精的组织培养方法具体包括以下步骤：
[0007]步骤一：外植体消毒：首先将黄精根茎上的泥土洗净，然后将其切成1cm
×
1cm的带芽根茎，然后采用多菌灵溶液浸泡，再对浸泡后的带芽根茎进行接种前的表皮消毒，最后再使用无菌刀剥去带芽根茎外面的鳞片保护层，将带芽根茎0.5
‑
1.0cm的小块接种到MS培养基上进行培养；
[0008]步骤二：根茎芽的启动培养：将步骤一中消毒后未污染的黄精外植体转接到根茎芽启动培养基中，促进根茎芽萌发；
[0009]步骤三：不定芽的分化培养：将上述步骤二中培养后萌发健壮的根茎芽转接到分化培养基中，观察分化出不定芽的外植体个数；
[0010]步骤四：不定芽的壮苗培养：将分化出的不定芽切成单芽，转接到壮苗培养基上进行培养；
[0011]步骤五：组培苗的生根培养：将上述步骤四中培养后的健壮无根组培苗接入生根培养基中；
[0012]步骤六：炼苗与移栽：选取长势好根系发达的黄精组培苗进行敞口炼苗3
‑
5d，取出用自来水洗净根部培养基，再移栽到由珍珠岩和蛭石配比的基质中，于温室中培养，观察生长状况，30d后统计成活率。
[0013]进一步地，所述步骤一中在将黄精根茎上的泥土洗净后需使用洗洁精浸泡30min，洗净后再用自来水冲洗30min，然后再将其切成带芽根茎。
[0014]进一步地，所述步骤一中在采用多菌灵溶液浸泡时的具体操作方式为将切成1cm
×
1cm的带芽根茎采用0.5g/L多菌灵浸泡处理12h。
[0015]进一步地，所述步骤一中的对浸泡后的带芽根茎进行接种前的表皮消毒具体操作方法为：先采用75％的乙醇消毒30s，然后用无菌水冲洗三遍，再使用0.2％的氯化汞灭菌6min，然后再用无菌水冲洗三遍，重复上述氯化汞灭菌和无菌水冲洗操作一次，最后再取出表皮消毒后的带芽根茎用无菌滤纸吸干水分。
[0016]进一步地，所述步骤一中的MS培养基附加30g/L的蔗糖和4g/L琼脂粉，pH5.8
‑
6.0,在121℃下灭菌20min，培养条件是(25
±
2)℃，1600lx，连续光照16h/d条件下培养。
[0017]进一步地，所述步骤二中的启动培养基采用MS为基本培养基，添加0.5mg/L的6
‑
BA细胞分裂素、0.5mg/L的NAA生长素和2,4
‑
D进行配比，并且该培养基附加30g/L的蔗糖和4g/L琼脂粉，pH5.8
‑
6.0,在121℃下灭菌20min，培养条件是(25
±
2)℃，1600lx，连续光照16h/d条件下培养。
[0018]进一步地，所述步骤三中的分化培养基采用MS为基本培养基，添加3.0mg/L的6
‑
BA细胞分裂素、0.2mg/L的NAA生长素和2,4
‑
D进行配比，且该培养基附加30g/L的蔗糖和4g/L琼脂粉，pH5.8
‑
6.0,在121℃下灭菌20min，培养条件是(25
±
2)℃，1600lx，连续光照16h/d条件下培养。
[0019]进一步地，所述步骤四中的壮苗培养基采用MS培养基作为基本培养基，添加1.5mg/L的6
‑
BA细胞分裂素、0.5mg/L的2,4
‑
D、0.5g/L的GA3和NAA生长素进行配比，且该培养基附加30g/L的蔗糖和5g/L琼脂粉，pH5.8
‑
6.0,在121℃下灭菌20min，培养条件是(25
±
2)℃，1600lx，连续光照16h/d条件下培养。
[0020]进一步地，所述步骤五中的生根培养基采用1/2MS作为基本培养基，添加1.0mg/L的NAA生长素、0.2mg/L的IBA、0.2g/L的AC和土豆泥进行配比，且该培养基附加15g/L的蔗糖和4g/L琼脂粉，pH5.8
‑
6.0,在121℃下灭菌20min，培养条件是(25
±
2)℃，暗处理条件下培养。
[0021]进一步地，所述步骤六中的珍珠岩与蛭石的配比为2∶1，且在将移苗前需使用0.1％的多菌灵溶液对由珍珠岩和蛭石配比形成的基质进行喷洒消毒，在移苗于温室培养时需每隔2d浇水一次，7d浇一次营养液，空气湿度保持在70％以上。
[0022]本专利技术的有益效果为：
[0023]通过对外植体的消毒处理能够有效的控制污染率，并且通过选取最为合适的MS作为启动培养基，使得黄精根茎芽的萌发率得到有效提高，通过向分化培养基中添加合适浓度的6
‑
BA能够提高黄精的不定芽分化率，通过向壮苗培养基中添加适当浓度的GA3对大叶黄精组培苗的壮苗有一定作用，通过向生根培养基中添加适当浓度的活性炭能够提高黄精组培苗根部的粗壮程度。
[0024]综上所述，利用组培快繁手段对黄精进行繁育，可以在较短时间内获得大量种苗，为黄精大面积生产、保证药源，实现其可持续利用具有十分重要的意义。
附图说明
[0025]图1为本专利技术的中药黄精的组织培养方法的流程框图。
具体实施方式
[0026]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.中药黄精的组织培养方法，其特征在于，所述中药黄精的组织培养方法具体包括以下步骤：步骤一：外植体消毒：首先将黄精根茎上的泥土洗净，然后将其切成1cm
×
1cm的带芽根茎，然后采用多菌灵溶液浸泡，再对浸泡后的带芽根茎进行接种前的表皮消毒，最后再使用无菌刀剥去带芽根茎外面的鳞片保护层，将带芽根茎0.5
‑
1.0cm的小块接种到MS培养基上进行培养；步骤二：根茎芽的启动培养：将步骤一中消毒后未污染的黄精外植体转接到根茎芽启动培养基中，促进根茎芽萌发；步骤三：不定芽的分化培养：将上述步骤二中培养后萌发健壮的根茎芽转接到分化培养基中，观察分化出不定芽的外植体个数；步骤四：不定芽的壮苗培养：将分化出的不定芽切成单芽，转接到壮苗培养基上进行培养；步骤五：组培苗的生根培养：将上述步骤四中培养后的健壮无根组培苗接入生根培养基中；步骤六：炼苗与移栽：选取长势好根系发达的黄精组培苗进行敞口炼苗3
‑
5d，取出用自来水洗净根部培养基，再移栽到由珍珠岩和蛭石配比的基质中，于温室中培养，观察生长状况，30d后统计成活率。2.根据权利要求1所述的中药黄精的组织培养方法，其特征在于，所述步骤一中在将黄精根茎上的泥土洗净后需使用洗洁精浸泡30min，洗净后再用自来水冲洗30min，然后再将其切成带芽根茎。3.根据权利要求2所述的中药黄精的组织培养方法，其特征在于，所述步骤一中在采用多菌灵溶液浸泡时的具体操作方式为将切成1cm
×
1cm的带芽根茎采用0.5g/L多菌灵浸泡处理12h。4.根据权利要求3所述的中药黄精的组织培养方法，其特征在于，所述步骤一中的对浸泡后的带芽根茎进行接种前的表皮消毒具体操作方法为：先采用75％的乙醇消毒30s，然后用无菌水冲洗三遍，再使用0.2％的氯化汞灭菌6min，然后再用无菌水冲洗三遍，重复上述氯化汞灭菌和无菌水冲洗操作一次，最后再取出表皮消毒后的带芽根茎用无菌滤纸吸干水分。5.根据权利要求4所述的中药黄精的组织培养方法，其特征在于，所述步骤一中的MS培养基附加30g/L的蔗糖和4g/L琼脂粉，pH5.8
‑
6.0,在121℃下灭菌20min，培养条件是(25
±
2)℃，1600lx，连续光照16h/d条件下培养。6.根据权利要求1所述的中药黄精的组织培养方法，其特征在于，所述步骤二中的启...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆静，张赤红，吴瑜，赵云，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：