PRiMEHLB-高效液相色谱-串联质谱法测定兽药制剂中β-内酰胺类含量的方法技术

本发明专利技术属于兽药制剂质量检测技术领域，本发明专利技术提供了PRiMEHLB

【技术实现步骤摘要】
PRiME HLB
‑
高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中
β
‑
内酰胺类含量的方法


[0001]本专利技术涉及兽药制剂质量检测
，尤其涉及PRiME HLB
‑
高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中β
‑
内酰胺类含量的方法。

技术介绍

[0002]β
‑
内酰胺是指一类含有四元内酰胺环的有机结构。β
‑
内酰胺结构常出现在抗生素中，包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类、碳青霉烯和青霉烯类酶抑制剂等以及新发展的头霉素类、硫霉素类、单环β
‑
内酰胺类等其他非典型β
‑
内酰胺类抗生素。基本上所有在其分子结构中包括β
‑
内酰胺核的抗生素均属于β内酰胺类抗生素。它是抗生素中使用广泛的一类。
[0003]β内酰胺类药物在兽医临床上应用十分广泛，主要用来治疗动物的呼吸道、胃肠道和尿道等感染和乳房炎等，其特点是抗菌性强、毒性低、品种多、抗菌范围广、适应症广等。但由于这类药物有严重地过敏反应和细菌耐药性及菌群失调等问题，再加上使用时不遵守休药期，导致药物残留超标，药物就会通过食物链影响人类的饮食健康。
[0004]兽药制剂是传统兽医学的重要组成部分，具有多方位调节和治疗作用，可提高动物机体的免疫力和抗应激能力，同时还能促进生产性能的发挥，并有效降低体内的药物残留，从而满足日益严格的食品安全需求。但是一些不法兽药生产企业受经济利益的驱使，在兽药制剂中非法添加该类化学药物。由于这种添加往往是隐形的，虽然可能增强药效，但存在与其他药物配伍使用时出现药量叠加导致中毒的风险和药物残留的隐患。
[0005]目前抗生素的检测方法主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法、免疫分析法、液相色谱
‑
质谱联用法等。检测样本种类较多，包括食品(牛乳、鸡蛋、肉类、鱼及水产品等)、保健品、生物样本(血、尿等)和环境样本(土壤、水等)等。目前，国家相关检测标准方法主要涉及乳及乳制品、动物源性食品、生活饮用水和饲料等，并没有适用于兽药制剂中β
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内酰胺类药物测定的标准和检测方法，而兽药制剂中β
‑
内酰胺类药物检测标准的缺乏也造成了药品安全监测的盲区。由于兽药制剂成分复杂，提取和分离困难，基质干扰的物质多，一般的饲料、动物组织中的化学成分分析方法难以直接用于兽药制剂的分析。因此，需要建立一种简单、快速、准确的测定兽药制剂中β
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内酰胺类药物的方法，对规范兽药制剂产业，保证用药质量安全，维护人民生命健康，扩大对外贸易，加强兽药制剂的安全检测监督具有十分重要的意义，能为打击在兽药制剂中β
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内酰胺类药物的违法使用提供强有力的技术支持。

技术实现思路

[0006]为克服现有技术中存在的上述缺陷，本专利技术提供了PRiME HLB
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高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中β
‑
内酰胺类含量的方法。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了PRiME HLB
‑
高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中β
‑
内酰胺类
含量的方法，包括如下步骤：
[0009](1)将待测样品与乙腈
‑
甲醇溶液混合，依次进行振荡提取、离心，得上清液；
[0010](2)将上述所得上清液转移到PRiME HLB固相萃取柱，控制流速为1～2mL/min，收集滤液；
[0011](3)将上述所得滤液用甲酸水溶液稀释定容，将定容后的滤液过0.2～0.8μm滤膜，得供试品溶液；
[0012](4)分别将不同种类的β
‑
内酰胺类药物标准品用乙腈
‑
水溶液溶解并定容，得标准品溶液；
[0013](5)分别对上述所得供试品溶液和标准品溶液进行液相色谱
‑
串联质谱仪测定，若供试品溶液的参考保留时间与标准品溶液的参考保留时间偏差在
±
2.5％之间；且供试品溶液中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准品溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，当相对离子丰度＞50％时，相对偏差在
±
20％之间，或当相对离子丰度为20～50％时，相对偏差在
±
25％之间，或当相对离子丰度为10～20％时，相对偏差在
±
30％之间，或当相对离子丰度≤10％时，相对偏差在
±
50％之间，则说明供试品溶液中存在对应的β
‑
内酰胺类待测物，可用于进行下一步测定，否则说明供试品溶液中不存在对应的β
‑
内酰胺类待测物；
[0014](6)按照公式X＝(A
×
V1
×
V3)/(AS
×
V2
×
m
×
1000)
×
C计算待测样品中β
‑
内酰胺类待测物的含量，其中，X为待测样品中待测物的含量，单位为mg/kg，A为供试品溶液中待测物的峰面积，AS为标准品溶液中待测物的峰面积，C为标准品溶液中待测物的质量浓度，单位为ng/mL，V1为步骤(1)中提取溶剂总体积，单位为mL，V2为步骤(3)中用于稀释滤液的体积，单位为mL，V3为步骤(3)中滤液定容后的体积，单位为mL，m为待测样品的质量，单位为g。
[0015]优选的，步骤(1)中所述待测样品与乙腈
‑
甲醇溶液的比例为0.5～1.5g:20mL，所述乙腈
‑
甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为1～2:1～2。
[0016]优选的，步骤(1)中所述振荡提取的频率为110～130r/min，所述振荡提取的时间为25～35min，所述离心的转速为3500～4500r/min，所述离心的时间为3～7min。
[0017]优选的，步骤(2)中所述PRiME HLB固相萃取柱的填料为N
‑
乙烯基吡咯烷酮
‑
二乙烯苯共聚物。
[0018]优选的，步骤(3)中所述甲酸水溶液的体积浓度为0.05～0.15％，所述滤液与定容后的滤液的体积比为1:1.5～2.5。
[0019]优选的，步骤(4)中所述β
‑
内酰胺类药物标准品与乙腈
‑
水溶液的比例为1～2mg:1～2mL，所述乙腈
‑
水溶液中乙腈与水的体积比为1～2:1～2。
[0020]优选的，步骤(5)中所述供试品溶液和标准品溶液中的母离子个数独立为＞1，子离子个数独立为＞2。
[0021]优选的，步骤(5)中所述液相色谱的条件为：色谱柱：C
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PRiMEHLB
‑
高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中β
‑
内酰胺类含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将待测样品与乙腈
‑
甲醇溶液混合，依次进行振荡提取、离心，得上清液；(2)将上述所得上清液转移到PRiMEHLB固相萃取柱，控制流速为1～2mL/min，收集滤液；(3)将上述所得滤液用甲酸水溶液稀释定容，将定容后的滤液过0.2～0.8μm滤膜，得供试品溶液；(4)分别将不同种类的β
‑
内酰胺类药物标准品用乙腈
‑
水溶液溶解并定容，得标准品溶液；(5)分别对上述所得供试品溶液和标准品溶液进行液相色谱
‑
串联质谱仪测定，若供试品溶液的参考保留时间与标准品溶液的参考保留时间偏差在
±
2.5％之间；且供试品溶液中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准品溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，当相对离子丰度＞50％时，相对偏差在
±
20％之间，或当相对离子丰度为20～50％时，相对偏差在
±
25％之间，或当相对离子丰度为10～20％时，相对偏差在
±
30％之间，或当相对离子丰度≤10％时，相对偏差在
±
50％之间，则说明供试品溶液中存在对应的β
‑
内酰胺类待测物，可用于进行下一步测定，否则说明供试品溶液中不存在对应的β
‑
内酰胺类待测物；(6)按照公式X＝(A
×
V1×
V3)/(A
S
×
V2×
m
×
1000)
×
C计算待测样品中β
‑
内酰胺类待测物的含量，其中，X为待测样品中待测物的含量，单位为mg/kg，A为供试品溶液中待测物的峰面积，A
S
为标准品溶液中待测物的峰面积，C为标准品溶液中待测物的质量浓度，单位为ng/mL，V1为步骤(1)中提取溶剂总体积，单位为mL，V2为步骤(3)中用于稀释滤液的体积，单位为mL，V3为步骤(3)中滤液定容后的体积，单位为mL，m为待测样品的质量，单位为g。2.根据权利要求1所述的PRiMEHLB
‑
高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中β
‑
内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测样品与乙腈
‑
甲醇溶液的比例为0.5～1.5g:20mL，所述乙腈
‑
甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为1～2:1～2。3.根据权利要求1或2所述的PRiMEHLB
‑
高效液相色谱
‑
串联质谱法测定兽药制剂中β
‑
内酰胺类含量的方法，其特征在于，步骤(1)中所述振荡提取的频率为110～130r/min，所述振荡提取的时间为25～35min，所述离心的转速为3500～4500r/min，所述离心的时间为3～7min。4.根据权利要求3所述的PRiMEHLB
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【专利技术属性】
技术研发人员：王敬，张海超，于趁，贾海涛，张婧雯，郄俊青，黄雪静，刘宝如，
申请(专利权)人：石家庄海关技术中心，
类型：发明
国别省市：