ATRX抗原表位肽及其在检测脑胶质瘤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了ATRX抗原表位肽及其在检测脑胶质瘤中的应用。所述ATRX抗原表位肽氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。本发明专利技术的ATRX抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。本发明专利技术的人ATRX体外诊断试剂盒可以有效地检测脑组织样本中的ATRX表达水平，可用于评估脑胶质瘤患病风险。可用于评估脑胶质瘤患病风险。可用于评估脑胶质瘤患病风险。

【技术实现步骤摘要】
ATRX抗原表位肽及其在检测脑胶质瘤中的应用


[0001]本专利技术属于免疫学
，具体涉及一种ATRX抗原表位肽及其在检测脑胶质瘤中的应用。

技术介绍

[0002]脑胶质瘤是中枢神经系统较为常见的原发性肿瘤，在我国的发病率约为万分之零点七。脑胶质瘤的不同组织学亚型如下：星形细胞瘤占所有病例的70％，少突神经胶质瘤为9％，其中包括经典少突神经胶质瘤以及混合性寡视神经细胞瘤，以及6％的室管膜瘤。
[0003]ATRX基因是调节染色体重塑、核小体装配以及维持端粒长度的位于Xq21.1的基因，编码280kDa的核蛋白，其突变最早在X连锁的a地中海贫血及智力发育障碍中被发现，最近研究至少在15类癌症中均发现ATRX突变，包括神经母细胞瘤，骨肉瘤和胰腺神经内分泌肿瘤。ATRX蛋白起重要的表观遗传学作用，它可将组蛋白沉积在异染色质和端粒DNA上，其还与端粒长度维持有密切的关系。
[0004]ATRX蛋白可与早幼粒白血病髓核体强结合，当ATRX与DAXX相互作用时，该复合物以组蛋白伴侣复合物形式，将组蛋白变体H3.3沉积在包括端粒和核糖体DNA重复序列的异染色重复序列中心周围。该基因的功能突变与其姐妹染色单体构成缺陷，与异常DNA甲基化以及非依赖性端粒的端粒酶维持具有相关性，可导致替代延长端粒。IDH突变胶质瘤，IDH突变型GBM和儿科高级胶质瘤的II级和III级星形胶质细胞瘤中均观察到ATRX突变和ATRX核表达降低。31％的原发性GBM患者存在ATRX突变，并同时伴TP53突变和编码组蛋白H3.3变体H3F3A的基因的点突变。
[0005]ATRX基因在神经系统发育中起着关键性的作用。Berube NG等人发现ATRX基因突变与中枢神经系统肿瘤的侵袭性密切相关。NB作为一种外周神经外胚层来源的肿瘤，也需要确定NB患者有无ATRX突变以及伴有ATRX基因突变的NB是否有更长的端粒。对于ATRX蛋白表达缺失在神经母细胞瘤发生发展和侵袭进展的作用机制，需要更深入的研究。WadaT等人的病案报道指出ATRX基因突变影响两个功能性的重要区域：ADD域和解旋酶域。
[0006]ATRX作为生物标志物已经反复被证实具有潜在的价值，检测血清中的ATRX水平的最理想的方法为免疫检测，利用ATRX抗体和先进的酶免疫、化学发光技术，通过常规抽血即可检查ATRX水平。然而，由于ATRX蛋白分子量较大，采用其全抗原制备抗体较为困难，制备出来的抗体专一性较差，因此，寻找合适的具有免疫原性的ATRX抗原表位肽、制备特异性的ATRX抗体成为研究的一个重点。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种ATRX抗原表位肽及其在检测脑胶质瘤中的应用。
[0008]一种ATRX抗原表位肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
[0009]一种抗原，所述抗原为所述的ATRX抗原表位肽与载体蛋白偶联而成。
[0010]本专利技术还提供所述抗原制备而成的ATRX单克隆抗体或多克隆抗体。
[0011]所述ATRX抗体在制备检测脑胶质瘤的试剂中的应用。
[0012]所述ATRX抗体用于检测体内ATRX蛋白的表达量；相对于正常人，ATRX蛋白的表达量在脑胶质瘤患者中表达量降低。
[0013]一种检测脑胶质瘤的试剂盒，包含所述ATRX单克隆抗体或多克隆抗体。
[0014]优选的，其用于定量检测血清中的人ATRX蛋白。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术的ATRX抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。本专利技术的人ATRX体外诊断试剂盒可以有效地检测脑组织样本中的ATRX表达水平，可用于评估脑胶质瘤患病风险。
附图说明
[0016]图1为单克隆抗体和多克隆抗体的western blot检测图；
[0017]图中，1为单克隆抗体，2为多克隆抗体。
[0018]图2为脑胶质瘤组织样本和正常脑组织样本中ATRX蛋白的浓度。
具体实施方式
[0019]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0020]实施例中未注明的具体技术或者条件，均按照本领域内的文献所记载或本领域常规技术手段进行操作。
[0021]实施例1抗原表位肽筛选
[0022]采用antheprot软件，根据NCBI公布的人ATRX蛋白序列，进行序列分析，分析内容包括跨膜区分，信号肽分析，修饰位点分析和全序列分析，从中找出可能的抗原表位，并将上述抗原表位中不含有半胱氨酸的序列末端加上半胱氨酸。最终筛选得到的ATRX抗原表位肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
[0023]抗原表位肽采用人工合成的方法合成，由金斯瑞生物科技股份有限公司通过氨基酸直接合成法合成。
[0024]抗原表位肽与载体蛋白的偶联：
[0025]1)将20mg SMCC溶于2ml DMF，0.8ml KLH加入到25ml圆底烧瓶中，补加1
×
PBS使蛋白终浓度为15mg/ml；
[0026]2)将溶解好的SMCC溶液缓慢滴加到120mg KLH蛋白体系中，室温搅拌反应1h；
[0027]3)用1L的1
×
PBS溶液于4℃下透析6h，除去游离的SMCC；
[0028]4)将透析后的KLH蛋白倒入50ml离心管中，通过离心管的刻度确定其体积，根据反应前加入的KLH蛋白的量来计算透析后蛋白的浓度，然后根据其浓度将2.5mg KLH
‑
SMCC溶液转移到5ml离心管中；加入KLH蛋白的量为120mg，透析后的KLH蛋白体积为20ml；
[0029]5)将3.0mg抗原表位肽用0.6ml 1
×
PBS溶液溶解；
[0030]6)用Ellman试剂检测多肽中的巯基：在96孔板中加入100μl Ellman试剂储备液，再加入10μl抗原表位肽溶液，用Nano分光光度计在λ＝412nm下测其紫外吸收值，如果OD值>0.15做下一步；OD值＜0.05补加抗原表位肽，直至达到要求；OD值<0.03说明抗原表位肽和
KLH蛋白交联率已达到80％以上；OD值>0.03则再补加SMCC活化好的KLH蛋白继续交联；如果Ellman试剂显黄色说明抗原表位肽与KLH蛋白偶联不完全；如果Ellman试剂不显黄色则说明抗原表位肽已经全部与KLH蛋白偶联。
[0031]实施例2多克隆抗体制备
[0032]免疫动物选择年龄在3个月、体重2.5
±
0.1kg，健康的雄性新西兰大白兔，以实施例1中制备的抗原，进行动物免疫。
[0033]首次免疫前，经耳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ATRX抗原表位肽，其特征在于，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。2.一种抗原，其特征在于，所述抗原为权利要求1所述的ATRX抗原表位肽与载体蛋白偶联而成。3.由权利要求2所述抗原制备而成的ATRX单克隆抗体或多克隆抗体。4.权利要求3所述ATRX抗体在制备检测脑胶质瘤的试剂中的应用。5.根据权利要求4所述ATRX...

【专利技术属性】
技术研发人员：卜令斌，张瑞，曹金良，
申请(专利权)人：阔然生物医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：