一种PTEN基因下游核苷酸序列及其编码的多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种PTEN基因下游核苷酸序列及其编码的多肽。其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其多肽的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO：2所示。该多肽可以在胶质瘤细胞和正常脑胶质细胞中内源表达，检测多种胶质瘤样本和正常样本中48aa

【技术实现步骤摘要】
一种PTEN基因下游核苷酸序列及其编码的多肽


[0001]本专利技术属于生物基因
，具体涉及一种PTEN基因下游核苷酸序列及其编码的多肽。

技术介绍

[0002]PTEN基因是继p53以后被发现的具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，该基因具有9个外显子和8个内含子，cDNA5
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端ATG和CGG重复序列形成甲基化的结构基础，其脂质磷酸酶活性取决于与蛋白质丝氨酸/苏氨酸酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶催化中心同源的结构。PTEN基因主要通过细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞迁移等环节发挥抑癌功能，而调控的关键在于过PI3K/AKT和MAPK信号通路的平衡，PTEN基因编码产物可特异性诱导CDKs抑制因子p21、p27和p51参与细胞周期的调控或通过拮抗AKT信号通路等方式导致细胞凋亡过程的变化。PI3K/AKT信号转导通路与细胞生存密切相关，PTEN蛋白主要通过此通路影响细胞周期进程导致细胞异常增殖、抑制细胞凋亡并影响细胞迁移和侵袭而发挥作用。
[0003]多项研究表明，PTEN基因在子宫内膜癌的表达低于正常内膜且与内膜腺癌细胞分化程度、病理分级、临床分期以及淋巴结转移等恶性评价指标具有相关性。薛帅等通过Meta分析显示，甲状腺癌PTEN蛋白表达低于正常甲状腺或甲状腺良性病变，这种低表达主要出现在肿瘤进展期而非早期，PTEN基因突变或失活可导致甲状腺良性及恶性肿瘤发病风险增加。PTEN基因mRNA和蛋白表达水平在乳腺导管上皮不典型增生、导管内癌和浸润性导管癌三个阶段呈逐渐减低趋势。作为具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，PTEN基因的研究目前主要集中在不同肿瘤中表达的缺失，对PTEN基因在肿瘤中表达减低的定量检测、不同肿瘤组织内表达缺失的机制以及影响肿瘤细胞生长、淋巴管生长等多环节的研究，将为肿瘤的鉴别诊断与治疗提供更多分子生物学的理论基础并提出更多的临床诊断方法。对PTEN基因相关的信号转导通路以及肿瘤细胞凋亡、细胞周期调控等作用靶点的进一步认知也将为肿瘤在基因水平上的诊治提供更多全新的思路和依据。
[0004]在传统概念中，“翻译”被限制于仅在编码蛋白的开放读码框中，而随着高通量深度测序以及蛋白质谱分析技术的发展和进步，这一观念正在被新的研究成果改变。研究人员发现，在哺乳动物细胞中一些以往认为不能编码蛋白的区域存在很多小开放读码框，可以编码100个氨基酸以下的多肽，并具备重要的生物学功能。这些区域包括编码基因mRNA的5
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UTR非编码区、3
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UTR非编码区。专利201710429319.X公开了一种PTEN基因的上游开放阅读框45aa
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uORF核苷酸序列及其编码的多肽的应用，该微肽的分子量特别小，可以很容易进入胶质瘤细胞和渗透到肿瘤组织，也能够很好的透过血脑屏障，治疗神经胶质瘤。目前，在PTEN基因的下游开放阅读框还未发现有活性肽的存在。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种PTEN基因下游核苷酸序列及其编码的多肽。
[0006]一种PTEN基因下游核苷酸序列，所述核苷酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示。
[0007]所述PTEN基因下游核苷酸序列编码的多肽，所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
[0008]扩增所述PTEN基因下游核苷酸序列的引物。
[0009]含所述PTEN基因下游核苷酸序列的表达载体。
[0010]含所述PTEN基因下游核苷酸序列表达载体的宿主细胞。
[0011]一种用于肿瘤诊断的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测PTEN基因下游核苷酸序列的探针、扩增PTEN基因下游核苷酸序列的引物或者抗PTEN基因下游核苷酸序列编码多肽的抗体。
[0012]所述肿瘤为子宫内膜癌、甲状腺癌或神经胶质瘤。
[0013]一种用于治疗肿瘤的药物组合物，该药物组合物包括权利要求1所述PTEN基因下游核苷酸序列、权利要求2所述PTEN基因下游核苷酸序列编码的多肽。
[0014]所述肿瘤为子宫内膜癌、甲状腺癌或神经胶质瘤。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术发现了在PTEN的3
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端存在小开放读码框48aa
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dORF，可以编码48个氨基酸的短肽PTTN
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48aa。制备PTTN
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48aa的抗体，通过Western blot发现48aa
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dORF确实可以在胶质瘤细胞和正常脑胶质细胞中内源表达。同时检测多种胶质瘤样本和正常样本中48aa
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dORF的表达量发现，与正常脑组织相比，胶质瘤组织样本中48aa
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dORF的表达量明显减少。
[0016]PTTN
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48aa可以明显抑制胶质瘤细胞的生长和增殖，可以为神经胶质瘤的临床治疗提供一种新的多肽药物。
附图说明
[0017]图1为48aa
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dORF编码多肽特异性抗体western检测48aa
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dORF在细胞内的内源性表达。
[0018]图2为平板克隆形成实验统计U251细胞和慢病毒过表达48aa
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dORF细胞形成克隆的数目。
[0019]图3为软琼脂克隆形成实验统计U251细胞和慢病毒过表达48aa
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dORF细胞形成克隆的数目。
[0020]图4为48aa
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dORF编码多肽组及随机肽对照组的裸鼠U251皮下移植瘤的生长体积。
具体实施方式
[0021]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0022]实施例1
[0023]通过分析PTEN基因的mRNA序列，在3
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UTR非编码区找到一个147nt的开放读码框(Open Reading Frame，ORF)，可以编码一个48个氨基酸的短肽，专利技术人将其命名为：48aa
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dORF，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其编码的短肽命名为：PTTN
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48aa，短肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。通过蛋白质分子量预测软件http://www.bio
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soft.net/sms/prot_mw.html预测蛋白的分子量为5.54KD。
试剂37℃培养3h后检测450λm的吸光度(OD)，吸光度值与细胞数目成正比。
[0037]平板克隆形成实验(CFA，clone formation assay)：将U251
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GFP对照细胞或者U251
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48aa
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dORF
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GFP细胞以2000个每孔的数量接种于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PTEN基因下游核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。2.权利要求1所述PTEN基因下游核苷酸序列编码的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。3.扩增权利要求1所述PTEN基因下游核苷酸序列的引物。4.含权利要求1所述PTEN基因下游核苷酸序列的表达载体。5.含权利要求4所述PTEN基因下游核苷酸序列表达载体的宿主细胞。6.一种用于肿瘤诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测PTEN基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹金良，张瑞，
申请(专利权)人：阔然生物医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：