KRAB融合阻遏物以及用于阻遏基因表达的方法和组合物技术

一种异源转录阻遏物，其包含DNA靶向结构域，优选无催化活性的DNA靶向蛋白如CRISPR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】KRAB融合阻遏物以及用于阻遏基因表达的方法和组合物
[0001]相关家族成员
[0002]本PCT申请要求2020年8月14日提交的美国专利申请序列号63/065,953的优先权权益，该美国专利申请通过引用并入本文。
[0003]序列表的并入
[0004]2021年8月13日创建的序列表“2223
‑
P61944PC00_SequenceLi sting”(56320字节)的计算机可读形式通过引用并入本文中。


[0005]本公开涉及用于转录阻遏的试剂和方法，特别是涉及异源KRAB结构域在转录阻遏物中用于靶向转录阻遏的用途。
[0006]引言
[0007]与Kr
ü
ppel相关盒(KRAB)转录阻遏结构域融合的无催化活性的dCas9已被广泛用作称为CRISPRi的遗传筛选工具[1
‑
4]。CRISPRi缺乏由DNA双链断裂形成引起的Cas9的非特异性细胞毒性，允许沉默非编码RNA，并使得能够发现远端调控区[1,5,6]。然而，在许多情况下，CRISPRi不能如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种异源转录阻遏物，其包含：DNA靶向结构域，任选地CRISPR
‑
Cas蛋白，优选无酶活性的CRISPR
‑
CAS 9蛋白、锌指结构域、tet
‑
阻遏物或TALE；和至少一个选自由ZIM3
‑
KRAB、ZIM2
‑
KRAB、ZNF554
‑
KRAB、ZNF264
‑
KRAB、ZNF324
‑
KRAB、ZNF354A
‑
KRAB、ZFP82
‑
KRAB和ZNF669
‑
KRAB组成的组的KRAB结构域。2.如权利要求1所述的转录阻遏物，其进一步包含至少一种相互作用组分。3.如权利要求1或权利要求2所述的转录阻遏物，其中所述DNA靶向结构域和KRAB结构域是单一多肽的结构域。4.如权利要求2所述的转录阻遏物，其包含：含有所述DNA靶向结构域和第一相互作用组分的第一多肽，和含有KRAB结构域和第二相互作用组分的第二多肽，其中所述第一和第二相互作用组分在合适的条件下相互作用。5.如权利要求4所述的转录阻遏物，其中所述第一和第二相互作用组分形成在诱导条件下相互作用的诱导型异源二聚体对，任选地ABI1和PYL1。6.如权利要求1至5中任一项所述的转录阻遏物，其中所述DNA靶向结构域是无酶活性的CRISPR
‑
Cas蛋白，任选地为dCas9或dCas12a。7.如权利要求1至6中任一项所述的转录阻遏物，其中至少一个KRAB结构域选自SEQ ID NO:4
‑
10或19的KRAB结构域中的任一者，任选地ZIM3
‑
KRAB。8.如权利要求1至7中任一项所述的转录阻遏物，其进一步包含一种或多种细胞核定位信号(NLS)，任选地SV40 NLS。9.如权利要求1至8中任一项所述的转录阻遏物，其中所述转录阻遏物具有SEQ ID NO:14、16或17的氨基酸序列，或所述DNA靶向结构域及其KRAB结构域部分的至少80％、85％、90％、95％或99％。10.一种分离的核酸，其编码权利要求1至9中任一项所述的转录阻遏物。11.一种表达构建体，其包含可操作地连接至一种或多种启动子和一个或多个转录终止位点的权利要求10所述的核酸。12.一种载体，其包含权利要求10所述的核酸或权利要求11所述的表达构建体，任选地其中所述载体是腺病毒或慢病毒载体。13.一种细胞，其包含权利要求1至9中任一项所述的转录阻遏物、权利要求10所述的核酸、权利要求1所述的表达构建体或权利要求12所述的载体。14.一种转录阻遏系统，其包含：a...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：多伦多大学管理委员会，
类型：发明
国别省市：