使用AAV载体的PLAKOPHILIN-2(PKP2)基因疗法制造技术

本文提供了例如使用腺相关病毒(AAV)载体对PKP2(Plakophilin

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用AAV载体的PLAKOPHILIN
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2(PKP2)基因疗法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年8月7日提交的美国临时专利申请号63/063,032的优先权权益，该申请通过引用整体并入本文。
[0003]关于序列表的声明
[0004]与本申请相关联的序列表以文本格式提供，代替纸质副本，并在此通过引用并入本说明书中。包含序列表的文本文件名称为ROPA_021_01WO_ST25.txt。该文本文件约为212KB，创建于2021年8月8日，经由EFS
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Web以电子方式提交。

技术介绍

[0005]致心律失常性右心室心肌病(ARVC)是一种成人发作的心脏病，其影响着估计每1,000人中的1人至每1,250人中的1人。它表现为心脏肌壁(心肌)随着时间的破裂，这会导致异常心跳(心律失常)的风险增加以及当所累及的个体剧烈运动时猝死的风险增加。个体还可能感到胸部颤动或砰砰作响(心悸)、头晕目眩、昏晕(昏厥)、呼吸短促以及腿部或腹部异常肿胀。随着时间的推移，ARVC可导致心力衰竭。
[0006]ARVC中牵涉至少13个基因，其中许多涉及在桥粒的生物发生中，桥粒是提供细胞之间的强粘附的细胞内连接。当桥粒不能适当地形成时，心肌细胞可能彼此分离并死亡。特别是右心室可能会变得无力，而脂肪沉积物和疤痕组织可能会替代受损的心肌，从而导致右心室的扩张。这些改变最终会阻止有效的心脏泵送并扰乱控制心跳的电信号，从而导致心律失常。常染色体显性plakophilin<br/>‑
2(PKP2)心肌病是一种遗传性的ARVC，在其中检测到影响PKP2的突变。
[0007]因此，本领域对于包括ARVC在内的PKP2
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相关疾病和病症的治疗仍然存在未满足的需求。本文公开的组合物和方法解决了这一需要。

技术实现思路

[0008]本专利技术大体上涉及使用表达PKP2或其功能变体的载体对疾病或病症例如心脏疾病或病症的基因疗法。
[0009]在一个方面，本公开提供了包含表达盒并且任选地侧接腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含可操作地连接至启动子的编码Plakophilin
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2(PKP2)或其功能变体的多核苷酸序列。
[0010]在一些实施方案中，启动子为心脏特异性启动子。
[0011]在一些实施方案中，启动子为肌肉特异性启动子。
[0012]在一些实施方案中，启动子为心肌细胞特异性启动子。
[0013]在一些实施方案中，启动子为肌球蛋白重链肌酸激酶7(MHCK7)启动子。
[0014]在一些实施方案中，MHCK7启动子与SEQ ID NO:31具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0015]在一些实施方案中，启动子为心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)启动子。
[0016]在一些实施方案中，hTNNT2启动子与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0017]在一些实施方案中，表达盒包含心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)基因的外显子1，其中任选地hTNNT2启动子和外显子1一起与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0018]在一些实施方案中，启动子为泛在启动子(ubiquitous promoter)，任选地CMV启动子或CAG启动子。
[0019]在一些实施方案中，表达盒包含polyA信号。
[0020]在一些实施方案中，polyA信号为人生长激素(hGH)polyA。
[0021]在一些实施方案中，表达盒包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，任选地WPRE(x)。
[0022]在一些实施方案中，Plakophilin
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2(PKP2)或其功能变体为PKP2。
[0023]在一些实施方案中，PKP2为功能性PKP2。
[0024]在一些实施方案中，PKP2为人PKP2。
[0025]在一些实施方案中，PKP2为PKP2同种型A。
[0026]在一些实施方案中，PKP2同种型A与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0027]在一些实施方案中，PKP2为PKP2同种型B。
[0028]在一些实施方案中，PKP2与SEQ ID NO:2具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0029]在一些实施方案中，编码PKP2的多核苷酸序列为人PKP2多核苷酸。
[0030]在一些实施方案中，编码PKP2的多核苷酸序列与SEQ ID NO:3具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0031]在一些实施方案中，编码PKP2的多核苷酸序列与SEQ ID NO:4具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0032]在一些实施方案中，多核苷酸包含至少约4.0kb、至少约4.1kb、至少约4.2kb、至少约4.3kb、至少约4.4kb、或至少约4.5kb。
[0033]在一些实施方案中，多核苷酸包含至多约4.1kb、至多约4.2kb、至多约4.3kb、至多约4.4kb、至多约4.5kb、或至多约4.6kb。
[0034]在一些实施方案中，多核苷酸包含4.0kb至4.6kb、4.0kb至4.5kb、或4.0kb至4.4kb，或者其中多核苷酸包含4.0kb至4.3kb、4.0kb至4.2kb、或4.0kb至4.1kb。
[0035]在一些实施方案中，PKP2或其功能变体包含至少800个或至少830个氨基酸。
[0036]在一些实施方案中，多核苷酸与SEQ ID NO:8
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15中的任何一个具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0037]在一些实施方案中，表达盒侧接5
′
和3
′
反向末端重复序列(ITR)。
[0038]在一些实施方案中，ITR为AAV2 ITR并且/或者ITR与SEQ ID NO:20
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26中的任何一个具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0039]在另一个方面，本公开提供了一种包含前述实施方案中的任一项的多核苷酸的基因疗法载体。
[0040]在一些实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含表达盒并且任选地侧接腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含可操作地连接至启动子的编码Plakophilin
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2(PKP2)或其功能变体的多核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述启动子为心脏特异性启动子。3.根据权利要求1或权利要求2所述的多核苷酸，其中所述启动子为肌肉特异性启动子。4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为心肌细胞特异性启动子。5.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为肌球蛋白重链肌酸激酶7(MHCK7)启动子。6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其中所述MHCK7启动子与SEQ ID NO:31具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。7.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)启动子。8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中所述hTNNT2启动子与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。9.根据权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒包含所述心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)基因的外显子1，其中任选地所述hTNNT2启动子和外显子1一起与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。10.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为泛在启动子，任选地CMV启动子或CAG启动子。11.根据权利要求1至10中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒包含polyA信号。12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述polyA信号为人生长激素(hGH)polyA。13.根据权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，任选地WPRE(x)。14.根据权利要求1至13中任一项所述的多核苷酸，其中所述Plakophilin
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2(PKP2)或其功能变体为PKP2。15.根据权利要求14所述的多核苷酸，其中所述PKP2为功能性PKP2。16.根据权利要求14或权利要求15所述的多核苷酸，其中所述PKP2为人PKP2。17.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述PKP2为PKP2同种型A。18.根据权利要求17所述的多核苷酸，其中所述PKP2同种型A与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。19.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述PKP2为PKP2同种型B。20.根据权利要求19所述的多核苷酸，其中所述PKP2与SEQ ID NO:2具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。21.根据权利要求1至20中任一项所述的多核苷酸，其中编码PKP2的所述多核苷酸序列为人PKP2多核苷酸。22.根据权利要求1至21中任一项所述的多核苷酸，其中编码PKP2的所述多核苷酸序列与SEQ ID NO:3具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同
一性。23.根据权利要求1至21中任一项所述的多核苷酸，其中编码PKP2的所述多核苷酸序列与SEQ ID NO:4具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。24.根据权利要求1至23中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含至少约4.0kb、至少约4.1kb、至少约4.2kb、至少约4.3kb、至少约4.4kb、或至少约4.5kb。25.根据权利要求1至24中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含至多约4.1kb、至多约4.2kb、至多约4.3kb、至多约4.4kb、至多约4.5kb、或至多约4.6kb。26.根据权利要求1至25中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含4.0kb至4.6kb、4.0kb至4.5kb、或4.0kb至4.4kb，或者其中所述多核苷酸包含4.0kb至4.3kb、4.0kb至4.2kb、或4.0kb至4.1kb。27.根据权利要求1至25中任一项所述的多核苷酸，其中所述PKP2或其功能变体包含至少800个或至少830个氨基酸。28.根据权利要求1至27中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:8
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15中的任何一个具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。29.根据权利要求1至28中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒侧接5'和3'反向末端重复序列(ITR)。30.根据权利要求29所述的多核苷酸，其中所述ITR为AAV2 ITR并且/或者所述ITR与SEQ ID NO:20
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26中的任何一个具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。31.一种基因疗法载体，所述基因疗法载体包含根据权利要求1至30中任一项所述的多核苷酸。32.根据权利要求31所述的载体，其中所述基因疗法载体为重组腺相关病毒(rAAV)载体。33.根据权利要求32所述的载体，其中所述rAAV载体为AAV9或其功能变体。34.根据权利要求33所述的载体，其中所述rAAV载体包含与SEQ IDNO:77中的任何一个具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的衣壳蛋白。35.根据权利要求32所述的载体，其中所述rAAV载体为AAVrh10或其功能变体。36.根据权利要求35所述的载体，其中所述rAAV载体包含与SEQ IDNO:79中的任何一个具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的衣壳蛋白。37.根据权利要求32所述的载体，其中所述rAAV载体为AAV6或其功能变体。38.根据权利要求37所述的载体，其中所述rAAV载体包含与SEQ IDNO:78中的任何一个具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的衣壳蛋白。39.根据权利要求38所述的载体，其中所述rAAV载体为AAVrh74或其功能变体。40.根据权利要求39所述的载体，其中所述rAAV载体包含与SEQ IDNO:80中的任何一个
具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的衣壳蛋白。41.一种在有此需要的受试者中治疗和/或预防疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求31至40中任一项所述的载体。42.根据权利要求41所述的方法，其中所述疾病或病症为心脏病症。43.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述疾病或病症为心肌病。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述心肌病为致心律失常性右心室心肌病(ARVC)。45.根据权利要求43所述的方法，其中所述心肌病为肥厚型心肌病或扩张型心肌病。46.根据权利要求41所述的方法，其中所述疾病或病症的特征在于心肌的纤维脂肪浸润。47.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述疾病或...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：太空飞船七有限责任公司，
类型：发明
国别省市：