用于改进封闭端DNA（ceDNA）的产生的经修饰的杆状病毒系统技术方案

本公开文本涉及一种用于在昆虫细胞中产生封闭端DNA(ceDNA)的重组杆状病毒表达载体(rBEV)。(rBEV)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于改进封闭端DNA(ceDNA)的产生的经修饰的杆状病毒系统
相关申请
[0001]本申请要求2020年8月23日提交的美国临时专利申请号63/069,115的优先权，其公开内容通过引用以其整体并入本文。对电子提交的序列表的引用
[0002]将以ASCII文本文件电子提交的序列表(名称：SA9
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475PC_ST 25.txt；大小：45kB；创建日期：2021年8月23日)的内容通过引用以其整体并入本文。

技术介绍

[0003]基因疗法提供了治疗多种疾病的持久手段。在过去，基因疗法通常依赖于病毒载体的使用。AAV载体已经作为一种更常见类型的病毒载体出现。然而，衣壳的存在限制了AAV载体在基因疗法中的效用。具体地，衣壳自身可能将载体中包括的转基因的大小限制到低至小于4.5kb。即使在添加表达控制序列之前，可用于基因疗法的各种治疗性蛋白也可以轻易超过这个大小。此外，构成衣壳的蛋白质可能充当受试者的免疫系统可靶向的抗原。AAV在一般群体中非常常见，大多数人在其一生中已经暴露于AAV。因此，大多数潜在的基因疗法接受者可能已经产生过针本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组杆粒，所述重组杆粒包含：(i)杆状病毒复制所需的杆状病毒基因的变体，其中所述变体基因表现出其编码的蛋白质的降低的表达；(ii)细菌复制起点(ori)；和(iii)至少一个用于整合包含转基因的异源DNA序列的整合位点。2.根据权利要求1所述的杆粒，其中杆状病毒基因是衣壳基因或衣壳相关基因。3.根据权利要求1所述的杆粒，其中所述杆状病毒基因选自VP80、VP39、GP41、P333、VP1
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54、VLF
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1和PP78/83。4.根据权利要求1所述的杆粒，其中所述杆状病毒基因是VP80。5.根据前述权利要求中任一项所述的杆粒，其中由于使所述必需基因的变体的表达失活的破坏或突变，所述必需基因的变体不表达。6.根据权利要求5所述的杆粒，其中所述变体基因包含破坏其表达的插入和/或缺失(“插入缺失”)。7.根据权利要求6所述的杆粒，其中所述插入缺失是由靶向核酸酶系统产生的。8.根据前述权利要求中任一项所述的杆粒，其中所述复制起点是微型F复制子、ColE1、oriC、OriV、OriT或OriS。9.根据前述权利要求中任一项所述的杆粒，所述杆粒进一步包含报告基因。10.根据前述权利要求中任一项所述的杆粒，所述杆粒进一步包含选择标记表达基因盒。11.根据前述权利要求中任一项所述的杆粒，所述杆粒进一步包含Rep蛋白。12.一种重组杆状病毒表达载体(rBEV)，所述表达载体是通过将异源DNA序列位点特异性整合到根据前述权利要求中任一项所述的杆粒的整合位点中产生的。13.根据权利要求12所述的rBEV，其中所述异源核酸序列包含侧接反向末端重复(ITR)的转基因。14.根据前述权利要求中任一项所述的rBEV，其中所述异源核酸表达为封闭端DNA(ceDNA)。15.一种杆状病毒表达系统，所述表达系统包含(i)根据前述权利要求中任一项所述的rBEV；和(ii)功能蛋白的来源，其中所述功能蛋白能够补充变体必需基因，并且其中所述功能蛋白以反式提供给所述rBEV。16.根据权利要求15所述的杆状病毒表达系统，其中所述功能蛋白以单独的表达载体提供，所述表达载体以反式表达所述功能蛋白。17.根据权利要求15所述的杆状病毒表达系统，其中所述功能蛋白由昆虫细胞提供，所述昆虫细胞表达与变体衣壳蛋白相对应的功能衣壳蛋白。18.根据权利要求17所述的杆状病毒表达系统，其中所述昆虫细胞是Sf9、Sf21、S2、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、E4a或BTI
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【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：比奥维拉迪维治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：