包含具有延长的半衰期的mRNA治疗剂的LNP组合物制造技术

本公开的特征在于一种编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸包含：本文所描述的5'UTR；包含本文所描述的有效载荷和终止元件的编码区；和本文所描述的3'UTR，以及包含所述多核苷酸的LNP组合物。本公开的多核苷酸和/或LNP组合物能够：通过增加编码有效载荷的多核苷酸或有效载荷多肽的半衰期和/或表达持续时间来提高所述有效载荷的水平和/或活性。本文还公开了使用本公开的LNP组合物治疗受试者的疾病或病症的方法。症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含具有延长的半衰期的mRNA治疗剂的LNP组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年6月23日提交的美国临时申请号63/042,822、2021年3月23日提交的美国临时申请号63/165,094和2021年3月24日提交的美国临时申请号63/165,469的权益。前述申请的内容特此以全文引用的方式并入。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，所述序列表按ASCII格式以电子方式提交并且特此以全文引用的方式并入。2021年6月23日创建的所述ASCII副本命名为M2180
‑
7007WO_SL.txt并且大小为45,216字节。
[0005]专利技术背景
[0006]提高mRNA效力的努力已经致力于产生具有开放阅读框(ORF)的最佳序列设计的mRNA。然而，就mRNA表达的效力和持久性来说，没有迹象表明通过这些努力已经达成了最大效力。在mRNA治疗剂的情况下尤其如此。因此，需要通过利用RNA生物学来进一步提高mRNA表达的效力和持久性。

技术实现思路

[0007本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码多肽的多核苷酸(例如，mRNA)，其中所述多核苷酸包含：(a)5'
‑
UTR，所述5'
‑
UTR包含SEQ ID NO:1的序列或其变体或片段；(b)编码区，所述编码区包含终止元件(例如，如本文所描述)；以及(c)3'
‑
UTR(例如，如本文所描述)。2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述5'UTR包含式A的核酸序列：G G A A A U C G C A A A A(N2)
X
(N3)
X C U(N4)
X
(N5)
X C G C GU U A G A U U U C U U U U A G U U U U C U N
6 N
7 C A A C U A GC A A G C U U U U U G U U C U C G C C(N
8 C C)x(SEQ ID NO:46)，其中：(N2)
x
是尿嘧啶并且x是0至5的整数，例如，其中x＝3或4；(N3)
x
是鸟嘌呤并且x是0至1的整数；(N4)
x
是胞嘧啶并且x是0至1的整数；(N5)
x
是尿嘧啶并且x是0至5的整数，例如，其中x＝2或3；N6是尿嘧啶或胞嘧啶；N7是尿嘧啶或鸟嘌呤；和/或N8是腺嘌呤或鸟嘌呤并且x是0至1的整数。3.如权利要求1所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含与SEQ ID NO:1或其片段(例如，缺少SEQ ID NO:1的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。4.如权利要求1或3所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％的尿苷含量。5.如权利要求1或3
‑
4中任一项所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个连续尿苷(例如，聚尿苷序列段)。6.如权利要求5所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体中的所述聚尿苷序列段包含至少2
‑
12、2
‑
11、2
‑
10、2
‑
9、2
‑
8、2
‑
7、2
‑
6、2
‑
5、2
‑
4、2
‑
3、3
‑
12、4
‑
12、5
‑
12、6
‑
12、7
‑
12、8
‑
12、9
‑
12、10
‑
12、11
‑
12、2
‑
6或3
‑
5个连续尿苷。7.如权利要求1或3
‑
6中任一项所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体中的所述聚尿苷序列段包含4个连续尿苷。8.如权利要求1或3
‑
7中任一项所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体中的所述聚尿苷序列段包含5个连续尿苷。9.如权利要求1或3
‑
8中任一项所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个聚尿苷序列段。10.如权利要求9所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含3个聚尿苷序列段。11.如权利要求9所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含4个聚尿苷序列段。12.如权利要求9所述的多核苷酸，其中SEQ ID NO:1的所述变体包含5个聚尿苷序列段。
13.如权利要求1或3
‑
12中任一项所述的多核苷酸，其中所述聚尿苷序列段中的一者或多者与不同聚尿苷序列段相邻。14.如权利要求1或3
‑
13中任一项所述的多核苷酸，其中所述聚尿苷序列段中的每一者，例如全部彼此相邻，例如，所述聚尿苷序列段全部是相连的。15.如权利要求1或3
‑
14中任一项所述的多核苷酸，其中所述聚尿苷序列段中的一者或多者由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、2、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50或60个核苷酸隔开。16.如权利要求1或3
‑
15中任一项所述的多核苷酸，其中所述聚尿苷序列段中的每一者，例如全部由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、2、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50或60个核苷酸隔开。17.如权利要求1或3
‑
16中任一项所述的多核苷酸，其中第一聚尿苷序列段和第二聚尿苷序列段彼此相邻。18.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述5'UTR包含Kozak序列，例如，GCCRCC核苷酸序列(SEQ ID NO:43)，其中R是腺嘌呤或鸟嘌呤。19.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述5'UTR包含SEQ ID NO:1的序列，或与SEQ ID NO:1具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。20.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述5'UTR包含SEQ ID NO:41的序列，或与SEQ ID NO:41或其片段(例如，缺少SEQ ID NO:41的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。21.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述5'UTR包含SEQ ID NO:42的序列，或与SEQ ID NO:42或其片段(例如，缺少SEQ ID NO:42的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。22.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述5'UTR使得所述多核苷酸的半衰期增加，例如，所述多核苷酸的半衰期增加约1.5
‑
20倍。23.如权利要求22所述的多核苷酸，其中将所述多核苷酸的半衰期的所述增加与不具有5'UTR、具有不同5'UTR或不具有权利要求1
‑
21中任一项所述的5'UTR的在其它方面类似的多核苷酸进行比较。24.如权利要求22
‑
23中任一项所述的多核苷酸，其中根据测量多核苷酸的半衰期的测定，例如本文所公开的实施例中的任一者中所描述的测定来测量所述多核苷酸的半衰期的所述增加。25.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述5'UTR使得由所述多核苷酸编码的所述多肽的水平和/或活性，例如输出增加。26.如权利要求25所述的多核苷酸，其中所述5'UTR使得由所述多核苷酸编码的所述多肽的水平和/或活性，例如输出增加约1.5
‑
20倍。27.如权利要求26所述的多核苷酸，其中将活性的所述增加与不具有5'UTR、具有不同5'UTR或不具有权利要求1所述的5'UTR的在其它方面类似的多核苷酸进行比较。
28.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中(b)的所述编码区包含选自表3中所提供的终止元件的终止元件，例如，SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:96。29.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中(c)的所述3'UTR包含表2中所提供的3'UTR序列或与表2中所提供的3'UTR序列或其片段(例如，缺少表2中所提供的3'UTR序列的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列任选地其中所述多核苷酸包含与表4中所提供的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。30.如权利要求29所述的多核苷酸，其中所述3'UTR包含与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:95或其片段(例如，缺少前述序列中的任一者的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列，任选地其中所述3'UTR包含微RNA(miRNA)结合位点，例如，如本文所描述，例如SEQ ID NO:38
‑
40中的任一者的序列，任选地其中所述3'UTR包含TENT募集序列，例如，如本文所描述，例如SEQ ID NO:91或92的序列，任选地其中所述多核苷酸包含与SEQ ID NO:47、48、49、50、122、52、53、54、55、59、60、61、126、127、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120中的任一者或其变体或片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。31.如权利要求1
‑
27中任一项所述的多核苷酸，其中：(i)(b)的所述编码区包含选自表3中所提供的终止元件的终止元件，例如，SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:96；以及(ii)(c)的所述3'UTR包含表2中所提供的3'UTR序列或与表2中所提供的3'UTR序列或其片段(例如，缺少表2中所提供的3'UTR序列的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列任选地其中所述多核苷酸包含与表4中所提供的序列，例如SEQ ID NO:47、48、49、50、122、52、53、54、55、59、60、61、126、127、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120中的任一者或其变体或片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。32.如权利要求31所述的多核苷酸，其中所述3'UTR包含与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:
12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:95或其片段(例如，缺少前述序列中的任一者的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。33.如权利要求32或33所述的多核苷酸，其中所述3'UTR包含微RNA结合位点，例如，如本文所描述，例如SEQ ID NO:38
‑
40中的任一者的序列，和/或其中所述3'UTR包含TENT募集序列，例如，如本文所描述，例如SEQ ID NO:91或92的序列。34.一种编码多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含：(a)5'
‑
UTR(例如，如本文所描述)；(b)编码区，所述编码区包含选自表3中所提供的终止元件的终止元件；以及(c)3'
‑
UTR(例如，如本文所描述)。35.如权利要求34所述的多核苷酸，其中所述终止元件包含SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO；62、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:96的序列。36.如权利要求34所述的多核苷酸，其中(b)的所述编码区包含终止元件，所述终止元件包含式B的共有序列：X
‑3‑
X
‑2‑
X
‑1‑
U
‑
A
‑
A
‑
X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
‑
X
12
(SEQ ID NO:37)其中：X1是G或A；X2、X4、X5、X6或X7各自独立地是C或U；X3是C或A；X8、X
10
、X
11
、X
12
、X
‑1或X
‑3各自独立地是C或G；X9是G或U；和/或X
‑2是A或U。37.如权利要求34所述的多核苷酸，其中(b)的所述编码区包含终止元件，所述终止元件包含式C的共有序列：X
‑3‑
X
‑2‑
X
‑1‑
U
‑
G
‑
A
‑
X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
‑
X
12
(SEQ ID NO:56)其中：X
‑3、X
‑1、X2、X5、X6、X7、X8、X9或X
12
各自独立地是G或C；X
‑2、X3或X4各自独立地是A或C；X1是A或G；和/或X
10
或X
11
各自独立地是C或U。38.如权利要求34所述的多核苷酸，其中(b)的所述编码区包含终止元件，所述终止元件包含式D的共有序列：X
‑3‑
X
‑2‑
X
‑1‑
U
‑
A
‑
G
‑
X1‑
X2‑
X3‑
X4‑
X5‑
X6‑
X7‑
X8‑
X9‑
X
10
‑
X
11
‑
X
12
(SEQ ID NO:57)
ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90或其片段(例如，缺少前述序列中的任一者的初始一个、两个、三个、四个、五个或六个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列，任选地其中所述多核苷酸包含与SEQ ID NO:47、48、49、50、122、52、53、54、55、59、60、61、126、127、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120中的任一者或其变体或片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。56.如权利要求54或55所述的多核苷酸，其中所述3'UTR包含与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:95或其片段(例如，缺少前述序列中的任一者的初始一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个核苷酸的片段)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。57.如权利要求56所述的多核苷酸，其中所述3'UTR包含微RNA结合位点，例如，如本文所描述，例如SEQ ID NO:38
‑
40中的任一者的序列，和/或其中所述3'UTR包含TENT募集序列，例如，如本文所描述，例如SEQ ID NO:91或92的序列。58.一种编码多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含：(a)5'...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：摩登纳特斯有限公司，
类型：发明
国别省市：