CSRP3(富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3)基因疗法制造技术

本文提供了例如使用腺相关病毒(AAV)载体对与心肌病相关联的CSRP3(富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CSRP3(富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3)基因疗法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月5日提交的美国申请号63/061,727的优先权，该申请的内容通过引用整体并入本文。
[0003]关于序列表的声明
[0004]与本申请相关联的序列表以文本格式提供，代替纸质副本，并在此通过引用并入本说明书中。包含序列表的文本文件名称为ROPA_020_01WO_ST25.txt。该文本文件约为120KB，创建于2021年8月3日，经由EFS
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Web以电子方式提交。

技术介绍

[0005]富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3(CSRP3)编码肌肉LIM蛋白(MLP)。CSRP3中的遗传缺陷与常染色体显性心肌病(肥厚型心肌病(HCM)和扩张型心肌病(DCM)两者)相关联，因为蛋白质的不同结构域中的常染色体显性突变与不同的表型相关。降低MLP水平的功能丧失突变可导致蛋白质错误定位和蛋白酶体介导的降解，从而导致心肌和骨骼肌中正常信号传导通路的破坏。MLP水平或细胞内定位的变化也与骨骼肌病相关联，包括面肩胛肱型肌营养不良症、线状体肌病和2B型肢带型肌营养不良症。在2A型肢带型肌营养不良症、Duchenne型肌营养不良症和皮肌炎患者中已检测到同种型MLP
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b蛋白水平的变化或MLP:MLP
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b比率的失调。
[0006]CSRP3患者表现出取决于特定突变的不同症状，但一般症状包括阻塞性HCM或DCM、心室肥大(室间隔在14
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32mm的范围内)、室性心动过速、运动不耐受、心绞痛。I
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II的轻度NYHA(纽约心脏协会)得分是常见的。已观察到心脏性猝死，例如在携带C58G突变的家族中。在一项研究中，大多数提供肌肉活检的C58G携带者在就诊时抱怨劳力性肌痛和痉挛。
[0007]对于CSRP3相关疾病或病症的治疗存在未满足的需求。本文提供的基因疗法解决了这一需求。

技术实现思路

[0008]本专利技术大体上涉及使用表达MLP或其功能变体的载体对疾病或病症例如心脏疾病或病症的基因疗法。
[0009]在一个方面，本公开提供了包含表达盒和任选地侧接腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含可操作地连接至启动子的编码肌肉LIM蛋白(MLP)或其功能变体的多核苷酸序列。
[0010]在一些实施方案中，启动子为心脏特异性启动子。
[0011]在一些实施方案中，启动子为肌肉特异性启动子。
[0012]在一些实施方案中，启动子为心肌细胞特异性启动子。
[0013]在一些实施方案中，启动子为MHCK7启动子。
[0014]在一些实施方案中，MHCK7启动子与SEQ ID NO:31具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0015]在一些实施方案中，启动子为心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)启动子。
[0016]在一些实施方案中，hTNNT2启动子与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0017]在一些实施方案中，表达盒包含心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)基因的外显子1，其中任选地hTNNT2启动子和外显子1一起与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0018]在一些实施方案中，启动子为泛在启动子(ubiquitous promoter)，任选地CMV启动子或CAG启动子。
[0019]在一些实施方案中，表达盒包含polyA信号。
[0020]在一些实施方案中，polyA信号为人生长激素(hGH)polyA。
[0021]在一些实施方案中，表达盒包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，任选地WPRE(x)。
[0022]在一些实施方案中，肌肉LIM蛋白(MLP)或其功能变体为MLP。
[0023]在一些实施方案中，MLP为人MLP。
[0024]在一些实施方案中，MLP为MLP同种型A。
[0025]在一些实施方案中，MLP与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0026]在一些实施方案中，MLP为MLP同种型B。
[0027]在一些实施方案中，MLP与SEQ ID NO:2具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0028]在一些实施方案中，MLP与SEQ ID NO:3具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0029]在一些实施方案中，MLP与SEQ ID NO:4具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0030]在一些实施方案中，编码MLP的多核苷酸序列为富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3(CSRP3)多核苷酸。
[0031]在一些实施方案中，CSRP3多核苷酸为人CSRP3多核苷酸。
[0032]在一些实施方案中，编码MLP的多核苷酸序列与SEQ ID NO:5具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0033]在一些实施方案中，编码MLP的多核苷酸序列与SEQ ID NO:7具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0034]在一些实施方案中，多核苷酸包含至少约2.4kb、至多约2.6kb、或约2.4kb至约2.6kb之间。
[0035]在一些实施方案中，多核苷酸包含至少约3.0kb、至多约3.3kb、或约3.0kb至约3.3kb之间。
[0036]在一些实施方案中，多核苷酸包含至少约2.4kb、至少约2.6kb、至少约3.0kb、至少约3.3kb、至少约3.5kb、至少约3.7kb、至少约3.9kb、至少约4.1kb、或至少约4.3kb。
[0037]在一些实施方案中，多核苷酸包含至少约2.6kb、至少约3.0kb、至多约3.3kb、至多约3.5kb、至多约3.7kb、至多约3.9kb、至多约4.1kb、至多约4.3kb、或至多约4.5kb。
[0038]在一些实施方案中，表达盒与SEQ ID NO:8
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11中的任何一个具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
[0039]在一些实施方案中，多核苷酸与SEQ ID NO:12
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15中的任何一个具有至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含表达盒和任选地侧接腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含可操作地连接至启动子的编码肌肉LIM蛋白(MLP)或其功能变体的多核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述启动子为心脏特异性启动子。3.根据权利要求1或权利要求2所述的多核苷酸，其中所述启动子为肌肉特异性启动子。4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为心肌细胞特异性启动子。5.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为MHCK7启动子。6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其中所述MHCK7启动子与SEQ ID NO:31具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。7.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)启动子。8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中所述hTNNT2启动子与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。9.根据权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒包含所述心肌肌钙蛋白T(hTNNT2)基因的外显子1，其中任选地所述hTNNT2启动子和外显子1一起与SEQ ID NO:32具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。10.根据权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述启动子为泛在启动子，任选地CMV启动子或CAG启动子。11.根据权利要求1至10中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒包含polyA信号。12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述polyA信号为人生长激素(hGH)polyA。13.根据权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸，其中所述表达盒包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，任选地WPRE(x)。14.根据权利要求1至13中任一项所述的多核苷酸，其中所述肌肉LIM蛋白(MLP)或其功能变体为MLP。15.根据权利要求14所述的多核苷酸，其中所述MLP为人MLP。16.根据权利要求14或权利要求15所述的多核苷酸，其中所述MLP为MLP同种型A。17.根据权利要求15或16所述的多核苷酸，其中所述MLP与以下具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCMACRKALDSTTVAAHESEIYCKVCYGRRYGPKGIGYGQGAGCLSTDTGEHLGLQFQQSPKPARSVTTSNPSKFTAKFGESEKCPRCGKSVYAAEKVMGGGKPWHKTCFRCAICGKSLESTNVTDKDGELYCKVCYAKNFGPTGIGFGGLTQQVEKKE(SEQ ID NO:1)。18.根据权利要求14或权利要求15所述的多核苷酸，其中所述MLP为MLP同种型B。19.根据权利要求15或18所述的多核苷酸，其中所述MLP与以下具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCSPQSRHAQLPPATLPNSLRSLESPRSALDVASQSMLLRRLWEVASLGTRPVSAVPSVGRVWSPQMSLTKMGNFIAKFAMPKILAPRVLGLEALHNKWKRKNEEVRRFSDFLRA
(SEQ ID NO:2)。20.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述MLP与以下具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCLC(SEQ ID NO:3)。21.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述MLP与以下具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCTLAQDLFP LCHLWEESGVHKC(SEQ ID NO:4)。22.根据权利要求1至21中任一项所述的多核苷酸，其中编码MLP的所述多核苷酸序列为富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3(CSRP3)多核苷酸。23.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述CSRP3多核苷酸为人CSRP3多核苷酸。24.根据权利要求1至23中任一项所述的多核苷酸，其中编码MLP的所述多核苷酸序列与以下具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：ATGCCAAACTGGGGCGGAGGCGCAAAATGTGGAGCCTGTGAAAAGACCGTCTACCATGCAGAAGAAATCCAGTGCAATGGAAGGAGTTTCCACAAGACGTGTTTCCACTGCATGGCCTGCAGGAAGGCTCTTGACAGCACGACAGTCGCGGCTCATGAGTCGGAGATCTACTGCAAGGTGTGCTATGGGCGCAGATATGGCCCCAAAGGGATCGGGTATGGACAAGGCGCTGGCTGTCTCAGCACAGACACGGGCGAGCATCTCGGCCTGCAGTTCCAACAGTCCCCAAAGCCGGCACGCTCAGTTACCACCAGCAACCCTTCCAAATTCACTGCGAAGTTTGGAGAGTCCGAGAAGTGCCCTCGATGTGGCAAGTCAGTCTATGCTGCTGAGAAGGTTATGGGAGGTGGCAAGCCTTGGCACAAGACCTGTTTCCGCTGTGCCATCTGTGGGAAGAGTCTGGAGTCCACAAATGTCACTGACAAAGATGGGGAACTTTATTGCAAAGTTTGCTATGCCAAAAATTTTGGCCCCACGGGTATTGGGTTTGGAGGCCTTACACAACAAGTGGAAAAGAAAGAA(SEQ ID NO:5)。25.根据权利要求1至24中任一项所述的多核苷酸，其中编码MLP的所述多核苷酸序列与以下具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性：ATGCCCAATTGGGGTGGAGGAGCTAAATGTGGAGCTTGTGAAAAAACAGTTTATCATGCTGAAGAAATTCAATGTAATGGAAGATCTTTTCATAAAACATGTTTTCATTGTATGGCTTGTAGAAAAGCACTTGATTCTACAACTGTTGCAGCACATGAAAGTGAAATCTATTGTAAAGTATGTTATGGAAGAAGATATGGACCAAAAGGAATTGGATATGGACAAGGAGCAGGATGTCTTTCTACAGATACTGGAGAACATTTGGGATTGCAATTTCAACAAAGTCCTAAACCAGCTAGATCTGTTACAACAAGTAATCCATCAAAATTTACTGCTAAATTTGGAGAATCCGAAAAATGTCCTAGATGTGGAAAATCAGTATATGCTGCTGAAAAAGTTATGGGAGGTGGAAAACCATGGCATAAGACATGTTTTAGATGTGCAATTTGTGGTAAATCTTTGGAATCTACAAATGTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：太空飞船七有限责任公司，
类型：发明
国别省市：