一种抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种产生抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。所述杂交瘤细胞株命名为8D7

【技术实现步骤摘要】
NO：C202141和CCTCC NO：C202142，于2021年01月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为是，中国，武汉，武汉大学，经检测存活。
[0010]第二方面，本专利技术提供一种抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体由第一方面所述的产生抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生。
[0011]第三方面，本专利技术提供第二方面所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的制备方法，所述单克隆抗体的制备方法包括：培养第一方面所述的产生抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，进行分离纯化，获得所述抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0012]第四方面，本专利技术提供第二方面所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体在制备用于人肝功能、人肝脏疾病及癌症的筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测的试剂盒中的应用。
[0013]优选地，所述人肝脏疾病包括肝炎、脂肪肝、肝纤维化或肝硬化。
[0014]优选地，所述癌症包括肝癌、肺癌或乳腺癌。
[0015]优选地，所述试剂盒包含特异性检测样本中的AKR1B10蛋白水平的试剂。
[0016]优选地，所述试剂盒还包含AKR1B10蛋白标准品。
[0017]优选地，所述试剂盒检测的样本包括血清、血浆、尿液、脑脊液、腹水、乳汁、肠液、大便、唾液、阴道分泌物或组织样本中任意一种或至少两种的组合。
[0018]本专利技术中，使用所述试剂盒进行筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测包括：
[0019](a)利用所述特异性检测AKR1B10蛋白的试剂测量来自受试者的生物学样品中AKR1B10蛋白的水平；
[0020](b)将(a)中测得的水平与正常样品中的相应水平比较。
[0021]本专利技术发现，AKR1B10蛋白是一种分泌性的人醛酮还原酶，在健康人胃肠道上皮组织高表达，在肝脏组织中低表达，由于正常人胃肠道上皮和肝脏表达分泌的AKR1B10蛋白均进入肠道排出，因此正常人血液中AKR1B10蛋白浓度很低。
[0022]第五方面，本专利技术提供一种检测人醛酮还原酶1B10蛋白的酶联免疫吸附检测试剂盒，所述酶联免疫吸附检测试剂盒包含第二方面所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0023]优选地，所述单克隆抗体为含有HRP标记的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0024]优选地，所述酶联免疫吸附检测试剂盒还包含包被特异性捕获抗体的酶联免疫吸附测定板、包被缓冲液、样品稀释液、封闭液或洗脱液中的任意一种或至少两种的组合。
[0025]本专利技术中，所述酶联免疫吸附检测试剂盒包括：
[0026]包被特异性捕获抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)板；包被缓冲液：1
×
PBS，pH7.3
±
0.1；样品稀释液：1
×
PBS、1
‑
5％ BSA、0.05
‑
1％ NaN3，pH7.3
±
0.1；封闭液：1
×
PBS、3
‑
5％ BSA；洗脱液PBST：1
×
PBS、0.05
‑
0.06％ Tween
‑
20；用HRP标记的单克隆抗体。
[0027]第六方面，本专利技术提供一种检测人醛酮还原酶1B10蛋白的时间分辨免疫荧光分析试剂盒，所述时间分辨免疫荧光分析试剂盒包含第二方面所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0028]优选地，所述单克隆抗体为含有生物素标记的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0029]优选地，所述酶联免疫吸附检测试剂盒还包含包被特异性捕获抗体的时间分辨荧光免疫测定板、包被缓冲液、样品稀释液、封闭液、洗脱液或Streptavidin
‑
Eu中的任意一种或至少两种的组合。
[0030]本专利技术中，所述时间分辨荧光免疫试剂盒(TRFIA)包括：
[0031]包被特异性捕获抗体的时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)板；包被缓冲液：1
×
PBS，pH7.3
±
0.1；样品稀释液：1
×
PBS、1
‑
5％ BSA、0.05
‑
1％ NaN3，pH7.3
±
0.1；封闭液：1
×
PBS、3
‑
5％ BSA；洗脱液PBST：1
×
PBS、0.05
‑
0.06％ Tween
‑
20；含有生物素(Biotin)标记的单克隆抗体；Streptavidin
‑
Eu。
[0032]第七方面，本专利技术提供一种检测人醛酮还原酶1B10蛋白的化学发光检测试剂盒，所述化学发光检测试剂盒包含第二方面所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0033]优选地，所述单克隆抗体为含有化学发光标记物的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体，所述化学发光标记物包括吖啶酯、三联吡啶钌、碱性磷酸酶或鲁米诺中任意一种。
[0034]优选地，所述化学发光检测试剂盒还包含包被有特异性捕获抗体的法学发光磁微粒、样品稀释液、洗脱液或发光底物中的任意一种或至少两种的组合。
[0035]本专利技术中，所述化学发光检测试剂盒包括：
[0036]包被有特异性捕获抗体的化学发光磁微粒；样品稀释液：1
×
PBS、1
‑
5％ BSA、0.05
‑
1％ NaN3，pH7.3
±
0.1；洗脱液PBST：1BSTS、0.05
‑
0.06％ Tween
‑
20；含有化学发光标记物的特异性单克隆抗体；所述的化学发光标记物包括吖啶酯、三联吡啶钌、碱性磷酸酶、鲁米诺；发光底物试剂。
[0037]第八方面，本专利技术提供一种检测人醛酮还原酶1B10蛋白的免疫比浊检测试剂盒，所述免疫比浊检测试剂盒包含第二方面所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。
[0038]优选地，所述免疫比浊检测试剂盒还包含R1试剂、R2试剂、定标液或检测抗体中的任意一种或至少两种的组合，所述R1试剂由磷酸盐缓冲液、聚乙二醇和叠氮钠组成，所述定标液为人AKR1B10抗原溶液，所述检测抗体为用全长AKR1B10抗原免疫山羊或兔获得的多克隆抗体。
[0039]优选地，所述R1试剂中含Tris缓冲液20
‑
30mmol/L，聚乙二醇8000 5
‑
15g/L和0.5
‑
1％叠氮钠等，pH为8.2。
[0040]优选地，所述R2试剂中含特异性单克隆抗体2
‑
15mg/mL和0.5
‑
1％叠氮钠，pH为7.5。
[0041]优选地，所述定标液中人AKR1B10抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产生抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株命名为8D7A9E2和8D7A9H4，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号分别为CCTCCNO：C202141和CCTCC NO：C202142，保藏日期为2021年01月28日。2.一种抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的产生抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生。3.权利要求2所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述单克隆抗体的制备方法包括：培养权利要求1所述的产生抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，进行分离纯化，获得所述抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体。4.权利要求2所述的抗人醛酮还原酶1B10蛋白单克隆抗体在制备用于人肝功能、人肝脏疾病及癌症的筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测的试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述人肝脏疾病包括肝炎、脂肪肝、肝纤维化或肝硬化；优选地，所述癌症包括肝癌、肺癌或乳腺癌。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包含特异性检测样本中AKR1B10蛋白水平的试剂；优选地，所述试剂盒还包含AKR1B10蛋白标准品；优选地，所述试剂盒检测的样本包括血清、血浆、尿液、脑脊液、腹水、乳汁、肠液、大便、唾液、阴道分泌物或组织样本中任意一种或至少两种的组合。7.一种检测人醛酮还原酶1B10蛋白的酶联免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述酶联...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗迪贤，李维，朱乐攀，
申请(专利权)人：华中科技大学协和深圳医院，
类型：发明
国别省市：