【技术实现步骤摘要】
一种脊髓类器官的培养方法和培养基
[0001]本专利技术涉及类器官培养
,尤其涉及一种脊髓类器官的培养方法和培养基。
技术介绍
[0002]类器官的构建对生物医药的发展具有重要的推动作用,其可以作为药物药效检验、毒性试验的有效手段,同时也对发育生物学、疾病的病理研究,尤其是对再生医学领域具有建设性的意义。
[0003]自2013年,Lancaster M.A.团队构建出脑类器官三维有机培养系统[1]后,大量的研究团队致力于构建特定区域的中枢神经系统类器官,例如脊髓类器官。2018年,Shi
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YanNg团队以Matrigel结合生长因子为培养基质,采用患者诱导多能干细胞构建脊髓微器官,用以研究脊髓性肌萎缩中运动神经元损伤的病理机制[2,3],但没有对神经系统创伤类疾病的干预研究。2020年,Sergiu P.Pasxca研究团队构建了类大脑皮层、后脑/脊髓和骨骼肌的3D培养组装体形成神经回路,能够在体外长期模拟皮层对肌肉收缩的控制[4],然而该类器官组合物无法重现特异的脊髓组织形态和发育过程,不适用于脊髓相关疾病研究。2022年Woong Sun研究团队报道了一个三维培养人类脊髓样器官的方案,重现了早期脊髓的神经管的形态发生,该类器官能够分化为具有成熟突触功能的脊髓神经元和胶质细胞,可用于有效筛选可能导致神经管发育缺陷的抗癫痫药物[5],但缺乏作为移植物的应用以及其对神经环路重建的作用。同年,中山大学的项鹏研究团队利用神经中胚层祖细胞构建出了一种脊柱
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脊髓类器官,该 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种脊髓类器官的培养基,其特征在于,包括:培养基1:含有BMP信号通路抑制剂、WNT信号通路激活剂和L
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抗坏血酸AA;培养基2:含有BMP信号通路抑制剂、WNT信号通路激活剂、L
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抗坏血酸AA和维甲酸RA;培养基3:含有L
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抗坏血酸AA、维甲酸RA和Purmorphamine;培养基4:含有L
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抗坏血酸AA、维甲酸RA和Purmorphamine;培养基5:含有L
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抗坏血酸AA、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF);其中,所述培养基3中的维甲酸RA的浓度低于培养基4,所述培养基3中的Purmorphamine的浓度高于培养基4。2.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于,包括:培养基1:含有DMEM/F
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12培养基、Neurobasal培养基、N2添加剂(N2Supplement)、B27添加剂(B27 Supplement)、GlutaMAX、BMP信号通路抑制剂、WNT信号通路激活剂和L
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抗坏血酸AA;培养基2:含有DMEM/F
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12培养基、Neurobasal培养基、N2添加剂(N2Supplement)、B27添加剂(B27 Supplement)、GlutaMAX、BMP信号通路抑制剂、WNT信号通路激活剂、L
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抗坏血酸AA和维甲酸RA;培养基3:DMEM/F
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12培养基、Neurobasal培养基、N2添加剂(N2Supplement)、B27添加剂(B27 Supplement)、GlutaMAX、L
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抗坏血酸AA、维甲酸RA和Purmorphamine;培养基4:含有DMEM/F
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12培养基、Neurobasal培养基、N2添加剂(N2Supplement)、B27添加剂(B27 Supplement)、GlutaMAX、L
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抗坏血酸AA、维甲酸RA和Purmorphamine;培养基5:DMEM/F
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12培养基、Neurobasal培养基、N2添加剂(N2Supplement)、B27添加剂(B27 Supplement)、GlutaMAX、L
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抗坏血酸AA、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF);优选地,所述BMP信号通路抑制剂为LDN
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193189;优选地,所述WNT信号通路激活剂为CHIR99021。3.根据权利要求2所述的培养基,其特征在于,所述培养基1
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5中,所述DMEM/F
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12培养基和Neurobasal培养基的体积比为1:1;优选地,所述培养基1或培养基2中,LDN
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193189的浓度为0.5~5μM;优选地,所述培养基1或培养基2中,所述CHIR99021的浓度为1~5μM;优选地...
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