新型冠状病毒融合蛋白疫苗其应用制造技术

本公开提供一种新型冠状病毒融合蛋白疫苗其应用。该疫苗包含重组融合蛋白、缓冲液、稳定剂、表面活性剂、氯化钠以及佐剂，其中，该重组融合蛋白包含干扰素或其功能片段、新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒融合蛋白疫苗其应用


[0001]本公开涉及流行病预防及疫苗生产领域，具体涉及一种新型冠状病毒融合蛋白疫苗其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒由四种结构蛋白(棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白)以及RNA核酸链组成。其中棘突蛋白(Spike Glycoprotein，S蛋白)是一种糖蛋白，位于新冠病毒膜表面，主要作用于细胞粘附和细胞膜融合。S蛋白由S1和S2两个亚基组成，其中S1亚基中包含受体结合结构域(Receptor Binding Domain,RBD)，其负责识别宿主细胞的受体ACE2，是病毒和受体相互作用以及病毒入侵细胞的关键因素，也是疫苗设计的关键靶点。
[0003]新冠疫苗是一种有效且经济的消灭SARSCoV
‑
2病毒的方式，目前已有多种疫苗上市，为保护人类健康提供了保护。重组蛋白疫苗具备生产稳定、产量易于放大、易于贮存和运输，成本低等特点。但是重组蛋白对蛋白浓度、pH、辅料、多次冻融等条件比较敏感，会造成纯度降低和/或活性下降等，所以每种蛋白都需要在适合条件下才能保证储存和使用过程中的稳定性。通常，单独蛋白作为疫苗的抗原成分时，其免疫原性较弱，需要辅加佐剂以增强疫苗的效果。
[0004]因此，寻找高效、安全的新冠疫苗需要进一步的研究和探索。
[0005]
技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中存在的问题，本公开的目的在于提供一种新的高效安全的重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗。
[0007]为了实现上述目的，本公开采用以下具体方案：
[0008]在一方面，本公开涉及一种重组新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)融合蛋白疫苗，其包含：重组融合蛋白、缓冲液、稳定剂、表面活性剂、氯化钠以及佐剂，其中，重组融合蛋白包含干扰素或其功能片段、新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2或其功能片段以及IgG1 Fc。
[0009]在本公开的一些实施方案中，融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 1
‑
7任一所示。
[0010]在另一方面，本公开涉及一种重组新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)融合蛋白疫苗在制备预防和/或治疗新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2感染和/或新型冠状病毒疾病COVID
‑
19的药物的用途。
[0011]在另一方面，本公开涉及一种预防和/或治疗新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2感染和/或新型冠状病毒疾病COVID
‑
19的方法，其包括向受试者施用有效量的前述的疫苗。
[0012]在另一方面，本公开涉及一种诱导个体中和抗原特异性免疫应答的方法，其包括向受试者施用前述疫苗。
[0013]本公开的重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗(例如V
‑
01重组融合蛋白疫苗)的一大亮点在于它的安全性和保护力，它对老年人和有基础疾病的人的保护力优势很明显。根据
V
‑
01的序贯加强Ⅲ期临床试验数据，V
‑
01试验中全身不良反应(发热、头痛和肌肉痛等)情况优于使用mRNA疫苗或腺病毒载体疫苗的同类加强试验。
[0014]本公开的重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗具有良好安全性和保护力的原因之一是它的分子设计：由重组人IFNα
‑
2b的C端通过Linker(含Pan表位序列)与RBD的N端连接，然后将RBD的C端与人IgG1 Fc相连，形成对称的双价Fc融合蛋白结构。这种分子设计的优势是：RBD与人IgG1 Fc融合表达形成稳定的二聚体结构，克服了单体RBD蛋白疫苗免疫原性弱的缺点。在RBD的N段融合人IFNα
‑
2b，形成独特的重组融合蛋白疫苗IFN
‑
RBD
‑
Fc，提高树突状细胞(DC)捕获和呈递抗原效率，促进疫苗抗体应答和T细胞应答。即V
‑
01设计时创新地融合了作为生物佐剂的人源干扰素。
[0015]本公开的重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗具有良好安全性和保护力的原因之二是常规铝佐剂的效果。考虑到传统铝佐剂的安全性已得到验证，重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗也选择加入常规铝佐剂，绕开了新型佐剂的生产和安全性问题。
[0016]针对重组新型冠状病毒融合蛋白分子的复杂性与不稳定性，专利技术人先探索稳定蛋白质的pH，稳定剂等，再研究稳定的蛋白质与铝佐剂吸附完全的条件。最终提供了一种稳定的重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗。重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗由高效表达重组新型冠状病毒融合蛋白的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，经细胞培养、澄清过滤和高度纯化后获得重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗的原液，经稀释液稀释配制、添加氢氧化铝佐剂混匀吸附、分装制得成品。成品可以在2
‑
8℃长期储存和运输，25
±
2℃加速6个月稳定性良好，在40
±
2℃强加速1个月保持稳定。重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗具备生产稳定、产量易于放大，成本低等特点。
附图说明
[0017]图1：不同含量的铝佐剂免疫小鼠14天后抗体滴度结果
[0018]图2：吸附率DOE等值线图
[0019]图3：纯度DOE等值线图
[0020]图4：不同含量铝佐剂对V
‑
01蛋白的最大吸附能力影响
具体实施方式
[0021]本公开下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学生物试剂，均为市售产品。
[0022]除非另有定义，本公开所使用的所有的技术和科学术语与属于本公开的
的技术人员通常理解的含义相同。本公开的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本公开。
[0023]本公开的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
[0024]在本公开中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在
B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语地定义和解释。
[0025]本公开中使用的术语“RBD”是receptor
‑
binding domain或受体结合结构域，是ARS
‑
CoV
‑
2与ACE2受体结合以及抗体识别的关键区域。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组新型冠状病毒融合蛋白疫苗，其包含：重组融合蛋白、缓冲液、稳定剂、表面活性剂、氯化钠以及佐剂，其中，所述重组融合蛋白包含干扰素或其功能片段、新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2或其功能片段以及IgG1Fc；优选地，所述SARS
‑
CoV
‑
2的功能片段为其受体结合结构域RBD；优选地，所述疫苗的pH为4.0
‑
5.0；更优选地，所述疫苗的pH为4.3
‑
4.9。2.权利要求1所述的疫苗，其中，所述重组融合蛋白包含与选自SEQ ID NO 1
‑
7中任一所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 1
‑
7任一所示；优选地，所述重组融合蛋白疫苗中重组融合蛋白的浓度为0.001
‑
0.9mg/mL，优选0.01
‑
0.9mg/mL。3.权利要求1或2所述的疫苗，其中，所述缓冲液为醋酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、谷氨酸盐缓冲液、甘氨酸
‑
盐酸缓冲液、磷酸氢二钠
‑
柠檬酸缓冲液中的一种或多种；优选地，所述缓冲液的浓度5
‑
80mM，优选18
‑
22mM；优选地，所述缓冲液是醋酸
‑
醋酸钠缓冲液。4.权利要求1
‑
3任一项所述的疫苗，其中，所述稳定剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N
‑
甲基葡糖胺、半乳糖胺、神经氨酸以及氨基酸中的一种或多种，优选地，所述氨基酸选自精氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、赖氨酸、组氨酸和脯氨酸中的一种或多种；优选地，所述稳定剂是蔗糖；更优选地，所述蔗糖的浓度为1％
‑
10％，优选4％
‑
6％；优选地，所述稳定剂海藻糖；更优选地，所述海藻糖的浓度为1％
‑
10％，优选4％
‑
6％；优选地，所述氨基酸是甘氨酸；更优选地，所述甘氨酸的浓度为1
‑
10mg/mL，优选3.5
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7.5mg/mL。5.权利要求1
‑
4任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：安然，杨嘉明，胡振湘，冯夕珈，邓钦培，陈曦，李金明，
申请(专利权)人：珠海市丽珠单抗生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：