【技术实现步骤摘要】
一种多巴胺能神经元的诱导分化方法及其应用
[0001]本专利技术属于神经生物学
，具体涉及一种多巴胺能神经元的诱导分化方法及其应用。
技术介绍
[0002]神经元是不可再生细胞。利用体细胞重编程获得诱导多能干细胞(induced pluripotent stemcells，iPSCs)，并诱导分化为目标靶细胞，是生命科学领域的前沿技术，有很好的科学研究与临床应用价值。将人源iPSCs诱导分化为神经元，使获得大量高纯度的人源性神经元变为可能。iPSCs技术在科学研究与临床应用方面均有重要意义。在科学研究方面，人源iPSCs诱导分化的多巴胺能(DA)神经元，克服了传统细胞系来源帕金森病(PD)模型的不足，更加真实地还原了PD患者脑内情况，使研究结果更加真实可靠。在临床应用方面，iPSCs及分化的细胞显示出对多种疾病具有临床疗效。iPSCs技术在疾病治疗中的运用，率先在PD患者、视网膜黄斑变性患者和扩张性心肌病患者中开展。目前利用iPSCs技术治疗PD已在日本展开临床研究，将iPSCs来源多巴胺能祖细胞(DAP)移植入PD患...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种多巴胺能神经元的诱导分化方法，其特征在于包括：采用诱导试剂对干细胞进行诱导分化，从而获得多巴胺能神经元其中，所述诱导试剂包括生长因子及小分子化合物，所述小分子化合物包括SB431542、LDN193189、SAG、RA、cAMP、LAA中的任意两种以上的组合；所述生长因子包括BDNF、FGF8b、GDNF、TGF
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β3的任意一种或两种以上的组合。2.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于包括：采用包含诱导试剂的培养基对所述诱导多能干细胞进行诱导分化，其中所述培养基中还包括辅助试剂，所述辅助试剂包括laminin及Y
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27632；优选的，所述laminin及Y
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27632能够抑制细胞凋亡、促进神经元贴壁；和/或，所述干细胞包括人类胚胎干细胞和/或诱导多能干细胞。3.根据权利要求2所述的诱导分化方法，其特征在于具体包括：(1)采用包含RA、LDN193189、SB431542的培养基对所述干细胞进行诱导分化3
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6天；(2)采用包含LDN193189、RA、SAG、laminin、Y
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27632的培养基对步骤(1)所获产物进行诱导分化4
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5天；(3)采用包含BDNF、LAA、SAG、FGF8b、laminin、Y
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27632的培养基对步骤(2)所获产物进行诱导分化3
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8天；(4)采用包含BDNF、GDNF、TGF
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β3、LAA、cAMP、laminin、Y
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27632的培养基对步骤(3)所获产物进行诱导分化5
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12天，从而获得所述多巴胺能神经元。4.根据权利要求2所述的诱导分化方法，其特征在于具体包括：(1)采用包含SB431542、LDN193189、RA的第一培养基对所述诱导多能干细胞于37℃进行第一阶段诱导分化3
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6天，获得第一阶段诱导分化产物；(2)采用包含LDN193189、RA、SAG、Y
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27632、laminin的第二培养基对所述第一阶段诱导分化产物于37℃进行第二阶段诱导分化2天，获得第二阶段诱导分化产物；(3)采用包含LDN193189、RA、SAG、Y
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27632、laminin的第三培养基对所述第二阶段诱导分化产物于37℃进行第三阶段诱导分化1
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2天，获得第三阶段诱导分化产物；(4)采用包含LDN193189、RA、SAG、Y
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27632、laminin的第四培养基对所述第三阶段诱导分化产物于37℃进行第四阶段诱导分化1天，获得第四阶段诱导分化产物；(5)采用包含BDNF、LAA、SAG、FGF8b、Y
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27632、laminin的第五培养基对所述第四阶段诱导分化产物于37℃进行第五阶段诱导分化1天，获得第五阶段诱导分化产物；(6)采用包含BDNF、LAA、SAG、FGF8b、Y
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27632、laminin的第六培养基对所述第五阶段诱导分化产物于37℃进行第六阶段诱导分化2
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7天，获得第六阶段诱导分化产物；(7)采用包含BDNF、GDNF、TGF
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β3、LAA、cAMP、Y
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27632、laminin的第七培养基对所述第六阶段诱导分化产物于37℃进行第七阶段诱导分化5
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12天，获得所述多巴胺能神经元。5.根据权利要求4所述的诱导分化方法，其特征在于，所述第一培养基包括如下组分：杜氏改良Eagle培养基/营养混合物F
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12，谷氨酰胺衍生物1X，非必须氨基酸1X，...
【专利技术属性】
技术研发人员：程筱雨，刘春风，王芬，毛成洁，丁妹，王媚瑕，
申请(专利权)人：苏州大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：
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