一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法，属于分子生物学领域。所述试剂盒包括裂解液，所述裂解液包括SDS、蛋白酶K和RNase A。本发明专利技术的试剂盒组份简单，易于配制，成本低，无毒性。本发明专利技术的提取方法简便，易于操作，能够快速提取蟹肉DNA，进而能够促进水产养殖产业的高质量、可持续发展。可持续发展。可持续发展。

【技术实现步骤摘要】
一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体地，涉及一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]中国作为水产养殖大国，其水产品总产量占到了世界的三分之一，水产养殖产量占世界水产养殖产量的约60％。而水产业的快速发展离不开生物技术的支撑。分子生物学的方法通过追溯生物基因的核苷酸序列，研究其结构与功能，有助于探索水产品的育种与繁殖、疾病与免疫等。尤其是人们对水产食品的喜爱，使得越来越多的研究热点聚焦于水产生物的育种与养殖上。目前，水产养殖存在一些问题，如遗传改良品种少、病害严重、育种率低等。
[0003]合格的样本DNA应具有核酸一级结构的完整性，以及减少RNA、蛋白质、多糖的污染等。水产生物生物中，如蟹类，其肌肉松散易碎，且含有较高的蛋白质等。由于其与陆地生物不同细胞与组织的特点，常规的DNA提取方法无法获得高质量的蟹肉DNA。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题中的至少一个，本专利技术采用的技术方案如下：
[0005]本专利技术第一方面提供一种蟹肉DNA提取试剂盒，包括裂解液，所述裂解液包括SDS、蛋白酶K和RNase A。
[0006]在本专利技术的一些实施方案中，所述裂解液中包括0.6～2.4％的SDS、2％的蛋白酶K和1％的RNase A。
[0007]在本专利技术的一些优选实施方案中，所述裂解液中包括1％的SDS、2％的蛋白酶K和1％的RNase A。
[0008]在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂盒还包括漂洗液和洗脱液。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，所述漂洗液为有机醇溶液。在本专利技术的一些优选实施方案中，所述漂洗液为80％乙醇。
[0010]在本专利技术的一些实施方案中，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液和水中的一种。在本专利技术的一些优选实施方案中，所述洗脱液为10mM Tris
‑
HCl。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂盒还包括蛋白酶K。
[0012]本专利技术第二方面提供一种蟹肉DNA提取试剂盒提取蟹肉DNA的方法，包括以下步骤：
[0013]S1，在含有钢珠的磨样管中加入本专利技术第一方面所述的裂解液，取适量蟹肉于磨样管中，使用研磨仪50Hz，打磨1～3min；；
[0014]S2，将磨样管置于65℃水浴锅中13～15min；
[0015]S3，将磨样管置于70℃水浴锅中13～15min；
[0016]S4，将磨样管放入离心机8000～10000g离心10～15min，转上清至新的离心管中；
[0017]S5，加入0.5倍体积的氯仿，颠倒混匀直至溶液完全乳化成白色后，在12000～
15000
×
g，4℃条件下离心8～15min；
[0018]S6，吸取上清液转移至新的灭菌离心管中；
[0019]S7，向上清液中加入0.6倍体积混合均匀的磁珠，吹打混匀，室温静置3～8min；
[0020]S8，将离心管置于磁力架，直至溶液澄清，吸弃上清；
[0021]S9，保持离心管在磁力架上，加入200μL漂洗液，室温静置20～40s后，吸弃上清；
[0022]S10，瞬时离心，弃尽离心管中多余的漂洗液，室温干燥磁珠2～5min；
[0023]S11，将离心管从磁力架上取下，室温静置2～5min；加入100μL洗脱液，用移液器轻轻吹打混匀，室温静置3～8min；
[0024]S12，将离心管置于磁力架上，室温静置3～8min至溶液澄清，吸取上清液转移到对应的新的样本保存管中，得到纯化后的蟹肉DNA。
[0025]在本专利技术的一些实施方案中，在步骤S10之前，重复一遍步骤S9。
[0026]在本专利技术的一些实施方案中，所述漂洗液为80％乙醇。
[0027]在本专利技术的一些实施方案中，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液和水中的一种。
[0028]本专利技术的有益效果
[0029]相对于现有技术，本专利技术取得了以下有益效果：
[0030]本专利技术的试剂盒组份简单，易于配制，成本低，无毒性。
[0031]本专利技术的提取方法简便，易于操作，能够快速提取蟹肉DNA。
[0032]本专利技术为蟹肉DNA的提取提供了一种高效率高质量的提取方法，能够促进水产养殖产业的高质量、可持续发展。
附图说明
[0033]图1示出了利用实施例1配制的裂解液1结合实施例2的提取方法提取得到的蟹肉DNA的琼脂糖凝胶检测结果。M：DNA Marker，1～3：样本编号。
[0034]图2示出了利用实施例1配制的裂解液2结合实施例2的提取方法提取得到的蟹肉DNA的琼脂糖凝胶检测结果。M：DNA Marker，1～3：样本编号。
[0035]图3示出了天根“血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒(DP304)”，按照试剂盒提供的方法提取得到的蟹肉DNA的琼脂糖凝胶检测结果。M：DNA Marker，1～3：样本编号。
[0036]图4示出了利用含不同浓度SDS的裂解液结合实施例2的提取方法提取得到的蟹肉DNA的琼脂糖凝胶检测结果。。M：DNA Marker，1：SDS浓度为0.2％；2：SDS浓度为0.6％；3：SDS浓度为2.4％；4：SDS浓度为3.2％。
具体实施方式
[0037]除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本申请的提交日期同步的。在适用的情况下，本申请中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考，特别这些文献所披露的关于本领域中的相关术语的定义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。
[0038]本申请中的数字范围是近似值，因此除非另有说明，否则其可包括范围以外的数值。数值范围包括以1个单位增加的从下限值到上限值的所有数值，条件是在任意较低值与任意较高值之间存在至少2个单位的间隔。对于包含小于1的数值或者包含大于1的分数(例如1.1，1.5等)的范围，则适当地将1个单位看作0.0001，0.001，0.01或者0.1。对于包含小于10(例如1到5)的个位数的范围，通常将1个单位看作0.1。这些仅仅是想要表达的内容的具体示例，并且所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能的组合都被认为清楚记载在本申请中。
[0039]术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本申请中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本申请中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，出来对操作性能所必要的那些，术语“本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蟹肉DNA提取试剂盒，包括裂解液，其特征在于，所述裂解液包括SDS、蛋白酶K和RNase A。2.根据权利要求1所述的一种蟹肉DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中包括0.6～2.4％的SDS、2％的蛋白酶K和1％的RNase A。3.根据权利要求1所述的一种蟹肉DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中包括1％的SDS、2％的蛋白酶K和1％的RNase A。4.根据权利要求1所述的一种蟹肉DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括漂洗液和洗脱液。5.根据权利要求4所述的一种蟹肉DNA提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液为有机醇溶液。6.根据权利要求4所述的一种蟹肉DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液和水中的一种。7.利用权利要求1所述的一种蟹肉DNA提取试剂盒提取蟹肉DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，在含有钢珠的磨样管中加入所述裂解液，取适量蟹肉于磨样管中，使用研磨仪50Hz，打磨1～3min；；S2，将磨样管置于65℃水浴锅中13～15min；S3，将磨样管置于70℃水浴锅中13～15min；S4，将磨样管放入离心机8000～10000g离...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑逸婷，吴允正，刘宇翔，殷楠楠，
申请(专利权)人：杭州联川生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：